Riesgos gen éticos asociados a técnicas de reproducción asisitida

1. Riesgos genéticos asociados a técnicas de reproducción asisitida Presenta: Dr. Pedro A. Ponce Barberena Profesor titular: Dr. Héctor S. Godoy Morales Profesor asociado: Emb. Luciano Cedillo García-Lascurain CURSO DE SUBESPECIALIDAD EN BIOLOGIA DE LA REPRODUCCION HUMANA HOSPITAL ANGELES PEDREGAL Marzo 2011- Febrero 2013

3. Introducción • Enero 14 y 15 2005 • Hospital forSickChildren – Toronto – Ontario – Canadá • 45 profesionales • Riesgos del embarazo y del feto • Después de un periodo de infertilidad y con TRA • Recomendaciones

4. Introducción • Más de 2 millones de niños nacidos por TRA • RCIU OR 1.59 IC95%( 1.20-2.11) • Parto pretérmino < 33 SDG OR 2.99 IC95%( 1.54-5.80) • Parto pretérmino < 37 SDG OR 1.93 IC95%(1.36-2.74) • Bajo peso al nacer < 1,500 g OR 3.78 IC95%(4.29-5.75) • Muerte in utero OR 2.40 IC95%(1.59-3.63)

5. Introducción • Síndrome de Beckwith-Wiedemann • Síndrome de Angelman • Infertilidad

6. Métodos • Grupo de investigadores y clínicos expertos en: epidemiología, ginecología y obstetricia, embriología clínica, biología molecular, genética clínica y de cáncer, impronta genómica, consejería genética, bioética , salud de la mujer y leyes.

7. Propósito • Resumen de los conocimientos actuales de los riesgos de los hijos nacidos por ART • Redes de contactos y la transferencia de conocimientos entre los expertos en la materia • Determinar si se ameritan más estudios • Desarrollar recomendaciones para futuras investigaciones en los desenlaces clínicos causados por alteraciones genéticas o epigenéticasdespúes de la infertilidad o TRA.

8. Resumen de la revisión sistemática • Judith Hall MD. • Niños de embarazo único están tienen mayor riesgo de parto pretérmino, muy bajo peso al nacer, muerte perinatal. • * Anormalidades cromosómicas relacionadas al sexo ( anormalidades en cromosomas paternos) • Los embarazos gemelares por TRA = espontáneos • * Evidencia sugestiva pero no concluyente para la pérdida del imprintinggenómico ( S. B-W y S. Angelman)

9. Resumen de la revisión sistemática • Los datos fueron insuficientes o no sugestivos para la asociación de FIV con : • Infecciones respiratorias • Hipospadias • Trastornos del desarrollo y psicosociales • Malformaciones mayores • Cáncer infantil • Anormalidades del crecimiento

10. Dificultades • Heterogéneo en indicaciones para el tratamiento y TRA • Riesgo a priori de parejas infértiles para defectos al nacimiento • Asignación del grupo control con parejas infértiles que conciban sin tratamiento ó fértiles que conciban con TRA

12. Reporte de 2 casos no relacionados de Síndrome de Angelman concebidos por ICSI

13. Paciente 1 : • 3 años de edad • Referido por retraso en el desarrollo : habla - hipotonía • Pobre balance, dificultad para dormir, personalidad exageradamente feliz. • Madre de 33 años y padre de 31 años (oligospermia y astenozoospermia) • Embarazo normal

14. Paciente 1 : • Cariotipo del paciente 46 XX y normal para X frágil • RM y estudio metabólico normal • Exámen físico : macrosomia, obesidad, microbraquicefalico, facies de felicidad, brazos flexionados • FISH: normal

15. Paciente 1 : • SouthernBlot: anormal - Una banda fuertemente no metilada y una con metilación débil (10% de la intensidad por densitometría) • PCR del exon 1 del gen SNRPN : igual. • METILACION EN MOSAICO • Padres con estudio normal

16. Paciente 2: • 2 años 8 meses • Referido por retraso mental y deficiencia en el habla • Vómitos frecuentes , hiperactiva y muy amigable • Microbraquicefalia, boca ancha, prognatismo, hipotonía de tronco, marcha ataxica • Electroencefalograma: actividad epileptiforme • Habla en sonidos no palabras

17. Paciente 2: • Madre de 31 años y padre de 32 años (oligospermia, hipo-hipo) • Embarazo normal • Cariotipo ambos padres normal • FISH : normal • SouthernBlot y PCR: anormal • Una banda no metilada

18. Individuos normales: • Gen SNRPN : • Alelo materno metilado • Alelo paterno no metilado

20. Coincidencia o casualidad por ICSI • Síndrome de Angelman : • 1/15 000 • Defectos de imprinting: (< 5%) • 1/300 000

21. 2 casos (ambos por defecto de imprinting) ninguno por deleción del cromosoma 15q (70%). • La metilación del cromosoma 15 no se realiza antes de la ovulación • Sino durante o después de la fertilización (defecto de imprinting) • ICSI: • Fertilización y activación del ovocito • Introducción del acrosoma y enzimas

22. Stress mecánico en el ovocito y daño de estructuras intracelulares • 50% de éxito ICSI • Falta de producción o disfunción de factores para el imprinting del cromosoma 15. • Young et al. (2001) : Bajo ciertas condiciones el cultivo in vitro de de pre-embriones de ovejas que se fertilizan en vivo pueden producir un crecimiento exagerado. • El imprinting materno suceptible. • Estudios prospectivos y de metilación prenatal.

24. Introducción • Síndrome de Beckwith-Wiedemann (BWS) • Defecto congénito : crecimiento excesivo y neoplasia • Macrosomía, macroglosia, defectos de linea media abdominal y predisposición a cáncer embrional • Epigenético – pérdida del imprinting • 11p15 • (15%)H19: RNA no traducido • IGF2: factor de crecimiento autocrino • (100%)LIT1:RNA no traducido (gen KvLQT1)

25. Introducción • Pérdida del imprintig : hiper-hipo metilación • Activación aberrante del IGF2.

26. Métodos • 1994 Registro de BWS en el GeneticEpidemiologyBranch of theNationalCancerInstitute.(NCI) • Diagnóstico clínico (2/5): macroglosia, peso y talla >90, hipoglicemia en el primer mes de vida, pliegues redundantes en las orejas, defecto de línea media. • 2001 Washington University • Cuestionario 1994-2001 (natural o TRA por tipo) • Genómica del DNA : linfocitos de sangre periferica • Gen H19 y LIT1 ( Zeta-Probe GT blotting)

27. Resultados • Incremento en la frecuencia de FIV en niños con BWS: • 7 BWS por FIV-TE • Esporádicos sin historia familiar de BWS • 6/7 ovocitos y espermatozoides propios • 1/7 ovocito donado y espermatozoide propio • 4/7 ICSI con espermatozoides eyaculados • 1/7 ICSI con TESE • 2/7 sin ICSI

28. Resultados • 3/7 Washington University y 4/7 NCI • Washington University : TRA con (3/65)BWS 4.6% • NCI: Estudio no sistemático de las TRAs.

29. Resultados • Características clínicas de los niños con BWS que nacieron después de TRA: • Sin diferencias comparado con niños nacidos de embarazos espontáneos.

30. Resultados • Alteraciones del impronting en pacientes con BWS que nacieron después de TRA: • 6/7 muestras • 5/6 imprinting anormal de LIT1 ( hipometilación) - 1/6 LIT1 + H19 (hipermetilación) • 1/6 metilación normal ( LIT1 y H19)

31. Resultados

32. Resultados

33. Discusión • Primera evidencia de asociación TRA y BWS. • Defecto específico de imprinting(6/7) • Sugieren el aumento en la frecuencia de defectos epigenéticos con algunos aspectos de la TRA. • Síndrome de Angelman y BWS : Alelo materno afectado (no metilado) • Improbable que sea relacionado a la diferenciación espermática. • ICSI u otra TRA: interrupción de la metilación del genoma materno o en etapas tempranas del embrión.

34. Conlcusiones • Asociación real • Número de pacientes, llenado del cuestionario • Factores: medio de cultivo para el ovocito, tiempo de exposición a un medio específico o factores de crecimiento, la etapa de la diferenciación del espermatozoide al momento del ICSI • ICSI por sí mismo • Más estudios para explicar la patogénesis y la asociación • Prevención.