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異嗜性抗體阻滯試劑與試管 之問與答

Heterophilic Blocking Reagent. F requently A sked Q uestions. 異嗜性抗體阻滯試劑與試管 之問與答. Q1. 什麼時候會需要 HBR?. 正在發展三明治免疫檢測。 曾有檢測到假陽性反應之檢體。 確認檢體為假陽性，而非真陽性檢體。 檢測結果受到 HAMA 或異嗜性抗體干擾。 查出影響檢測結果之假陽性檢體類別。 檢測需要阻滯劑。阻滯劑為 HAMA 阻滯劑或異嗜性阻滯試劑 ? 需要一個通用阻滯劑加至各種檢測系統。 評估一個阻滯劑的要素。. Q2. 何謂異嗜性抗體干擾 ?.

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異嗜性抗體阻滯試劑與試管 之問與答

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  1. Heterophilic Blocking Reagent Frequently Asked Questions 異嗜性抗體阻滯試劑與試管 之問與答 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  2. Q1. 什麼時候會需要HBR? • 正在發展三明治免疫檢測。 • 曾有檢測到假陽性反應之檢體。 • 確認檢體為假陽性，而非真陽性檢體。 • 檢測結果受到HAMA或異嗜性抗體干擾。 • 查出影響檢測結果之假陽性檢體類別。 • 檢測需要阻滯劑。阻滯劑為HAMA阻滯劑或異嗜性阻滯試劑? • 需要一個通用阻滯劑加至各種檢測系統。 • 評估一個阻滯劑的要素。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  3. Q2. 何謂異嗜性抗體干擾? • 病人血清/血漿中的內生性異嗜性抗體，可結合其它屬種的免疫球蛋白，包括用來產生抗體並作為免疫分析試劑的屬種 (species)。 • 這些抗體會干擾免疫分析系統，造成比實際分析物濃度更高的檢測值，因此有誤判檢體的可能。 • 雖然異嗜性抗體可以影響各樣檢測，其主要作用於三明治免疫分析系統。 • “三明治”法至少使用兩種針對不同表位 (epitode) 抗原的抗體，其一抗體為固相 (solid phase)，另一則是在溶液中，有如125I ，酵素，螢光劑，化學冷光等標幟物。一般而言，檢體中之抗原與兩抗體結合，標幟抗體與固相相結合的數量與檢體內的抗原濃度成正比（圖1）。 • 不過， 異嗜性抗體在無抗原的情況下，也可連結這兩個抗體，因而增加結合標幟抗體 (labeled antibody)的濃度（圖2 ）。 圖 1 圖 2 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  4. Q3. HBR 如何有效地阻滯異嗜性抗體? 一般的被動阻滯法，使用非特異性物質（鼠IgG ，鼠血清，非特異性的單株抗體，凝聚IgG等) ，阻滯人類異嗜性抗體的結合 (binding)。所有方法皆依賴人類異嗜性抗體之親和力 (affinity) 來影響阻滯。一般人類異嗜性抗體的親和力約在 K-value =105-106 的範圍內。 HBR 以完全不同的方法來完成結合。 HBR 是一個特定的結合劑 (binder)，直接針對人類異嗜性抗體。當 HBR 連結人體異嗜性抗體時，是利用立體阻隔效應 (steric hinderance) 來阻滯。HBR 結合劑之親和力約在 K-value = 109的範圍內。由於 HBR 的親和力較高，可有效地與人類異嗜性抗體結合，以達到阻滯的功效。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  5. Q4. HBR 超越了一般阻滯方法? HBR 的特異性結合反應，加上1000倍以上的親和力，使得 HBR 具有以下優點，超越傳統阻滯方法： 1. 使用 HBR，只需少量蛋白質作阻滯，不影響檢測信號。 2. HBR 比傳統方法能有效阻滯更多假陽性。 3. HBR 可阻滯所有anti-屬種 (anti-rabbit, anti-goat, anti-sheep, 和 anti- mouse) 反應。 4. HBR 可阻滯所有抗鼠單株抗體的 subtypes (如anti-mouse IgG1, anti-mouse IgG2等) 5. 使用 HBR，不限定於某些檢測。如同某些狀況，使用分析物特異 單株抗體用以作阻滯。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  6. Q5. 異嗜性抗體干擾到底是什麼? • 干擾因素是免疫球蛋白，目前已發現有 IgG 和 IgM 異嗜性抗體。 • 發生機率極高。依病人人口而別，目前有高達40 ％的發生率，至少有10 ％的案例已被存檔 (documented) 備查。 • 不同檢體有不同程度的干擾，單一病人體內的干擾程度也會隨著時間而變化。 • 異嗜性抗體並非針對特定屬種，但可與多種動物抗體結合。因此，干擾非僅限於以單株抗體為基礎的檢測。 • 干擾可能是藉由檢測系統內的抗體 Fc 部位所傳達。 • 異嗜性抗體並非單一和特異的實體，而是一個多成份 (multi-component) 的現象，由多種抗體所構成，可引發干擾，某些或全部抗體可能只存在於特定的檢體中。 • EIA 似乎較 RIA 容易受到干擾，這可能是因為抗體的 Fc 部份在鏈結 (conjugation) 時多數被改變，故較易受影響。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  7. Q6. 異嗜性抗體從何處來? 有許多可誘發病人身體產生異嗜性抗體的因素，其中包括： • 類風濕性關節炎 (慢性發炎性) • 注射疫苗 • 流行性感冒 • 動物接觸 (飼養寵物) • 過敏 • 特定食物 (乳酪) • 輸血 • 動物輔助治療 (胸腺細胞,羊細胞,胚胎細胞) • 自體免疫疾病 (AIDS) • 血液透析 • 免疫抑制藥物(OKT3) • 母性傳送 • 心肌病變 • 腸胃炎 (E. Coli) 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  8. Q7. 如何偵測異嗜性抗體干擾? 可採取以下方法來分辨假陽性和偵測異嗜性抗體干擾： • 檢測數據和臨床診斷或其它檢測不符。 • 通常表現正常的某些檢體，經稀釋後表現數據不一致。 • 利用親和層析法，將特定分析物自檢體中排除，以確定信號是否已被排除，若訊號仍在，即為假陽性。 • 加入異嗜性抗體阻滯劑，觀察檢測值是否降低。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  9. Q8. 異嗜性抗體和 HAMA 有何不同? 異嗜性抗體HAMA 異嗜性抗體只是一個通稱，用來形容所有可結合動物抗體的人類抗體，並對檢測造成干擾。 HAMA (Human anti- mouse antibody, 人類抗 鼠抗體)，是異嗜性抗 體的一種，可與鼠抗體結合。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  10. Q9. 何謂阻滯劑 (Blocking Reagent)? 阻滯劑是一種生物製劑，一旦加入免疫分析系統中，可有效防止異嗜性干擾，以避免在無抗原的情況下連結兩個 (補捉及標幟) 抗體。 目前有兩種主要的阻滯劑： (1) HAMA (human anti-mouse antibodies) (2) 異嗜性抗體阻滯試劑 (HBR) 與阻滯試管(HBT) 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  11. Q9. 何謂阻滯劑 (Blocking Reagent)? (1) HAMA • HAMA只阻滯一種特異的人類抗屬種抗體之活性（如人類抗鼠抗體），通常為非針對目標分析物的正常血清，正常 IgG ，單株抗體等。 • 將這些“被動阻滯劑 (passive blocking agents)” ，過量加入於檢體中，使得檢體中任何特異抗屬種抗體，易與低濃度之特異免疫反應物結合。 • 這些試劑用途有限，因為僅能排除異嗜性干擾的一部份，而異嗜性干擾牽涉許多成份。常觀察到的是，將鼠 IgG 加至一雙單株 (double monoclonal) 抗體三明治檢測時，只能改正部份異嗜性干擾。 (2) 真正異嗜性抗體阻滯試劑 (HBR) 與試管 (HBT) • 這些製劑可排除各類型的異嗜性干擾。 • 內含“主動阻斷試劑 (active blocking reagents) “ ，是直接針對造成干擾的異嗜性抗體。 • 只需低濃度即可達預期的功效，降低任何影響免疫反應的不良效應，並有效增強阻斷動能 (kinetics)。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  12. Q10. HBR 的表現特性 • HBR 阻滯下列假陽性反應: a. 人類抗鼠抗體（HAMA） b. 人類抗山羊抗體 c. 人類抗羊抗體 d. 人類抗兔抗體 e. 類風濕因子 • 廣泛特異性表示 Scantibodies HBR 可做為 “通用試劑”，適用於二部位免疫分析檢測，抗體為固相或標幟試劑。 • 為一高特異性及高純度的試劑， 極低濃度的 Scantibodies HBR 即夠用(有時比正常鼠 IgG 少百倍或千倍），乃使檢測信號夠大，不受不良影響。 • Scantibodies HBR 不干擾人類血清中分析物之加入 (spike) 或還原 (recovery)。 • ScantibodiesHBR 不干擾真正陽性病人檢體的稀釋線性。 • Scantibodies HBR 批與批之間重複性 (reproducibility) 極高。 • Scantibodies HBR 效期五年內品質穩定。 • 在檢測中使用Scantibodies HBR，比使用鼠IgG或鼠血清的成本為低。 • Scantibodies HBR 可直接加入檢測緩衝劑、鏈結物 (conjugates) 等。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  13. Q11. 辨識假陽性 Scantibodies已成功找出會引起假陽性結果的捐助者 (donors)。這些 捐助者的檢體，最難以傳統方法（鼠IgG等）阻斷其異嗜性干擾。 這些檢體可用以辨識假陽性反應，並用來評估異嗜性干擾對檢測的 影響。 請注意假陽性檢體往往有檢測特異性。因此，這些檢體在某些檢測 中，可能不會顯示假陽性。 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

  14. Q12. HBR相關文獻 • Prevalence of Heterophilic Antibody Interference in Eight Automated Tumor Marker Immunoassays Clinical Chemistry 51, No. 1, 2005 • Techniques for Identifying Heterophile Antibody Interference Are Assay Specific: Study of Seven Analytes on Two Automated Immunoassay Analyzers Clinical Chemistry 51, No. 3, 2005 • A Hyperthyroid Patient with Measurable Thyroid-stimulating Hormone Concentration – A Trap for the Unwary Annals Academy of Medicine 泰歷藥品儀器股份有限公司 0800-050-158

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