html5-img
1 / 19

Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигровый глаз - орто»

Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигровый глаз - орто». Лункин В.В., Поляшова Т.И. НПФ «МЕДИКОМЕД». Действие активных форм кислорода (АФК) на клетки и ткани. High. Гибель. Воздействие активных форм кислорода в высоких концентрациях

Download Presentation

Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигровый глаз - орто»

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигровый глаз - орто» Лункин В.В., Поляшова Т.И. НПФ «МЕДИКОМЕД»

  2. Действие активных форм кислорода (АФК) на клеткии ткани High Гибель Воздействие активных форм кислорода в высоких концентрациях на клетки и ткани приводит к их повреждению и гибели, что является причиной многих заболеваний. Апоптоз Некроз Доза АФК Задержка роста и старение Выживаемость Митогенетическое и пролиферативное действие Low АФК в низких дозах способствуют выживаемости

  3. D A N G E R Chemicals Radiation Microbial and virus infection Free radicals ROS Oxygen radicals scavengers ? DNA damage Endogenic Exogenic Carcinogenesis

  4. Предпосылки работы. Природные соединения и их композиции являются потенциальными экзогенными «ловушками» АФК и других свободных радикалов и требуют научного анализа для их практического применения. • Задача работы состояла в исследовании антиоксидантной активности препарата «Тигровый глаз – орто» на экспериментальных моделях in vitro: нефракционированной крови человека, изолированных гранулоцитах крови человека, ферментативной бесклеточной среде.

  5. Объект и Метод Работа проведена на клетках периферической нефракционированной крови, изолированных гранулоцитах человека и на модели ферментативной реакции Интенсивность генерации АФК была оценена по люминол-зависимой хемилюминесценции с использованием хемилюминометра ХЕМИЛЮМ-12, который позволяет проводить измерения одновременно в 12 образцах. Прибор разработан в Лаборатории клеточной нейробиологии Института биофизики клетки РАН.

  6. ХЕМИЛЮМ-12Хемилюминометр роторный 12-ячеечный ХЕМИЛЮМ-12 работает с пробами объемом от 0,1 до 0,3 мл, помещаемыми одновременно в 12 ячеек. В процессе регистрации на экране монитора выстраиваются 12 графиков; через каждые 2,5 секунды на каждом из них ставится очередная точка. Одновременная регистрация хемилюминесценции от 12 проб позволяет получить серию измерений с использованием минимального количества исследуемого материала. Высокая чувствительность при стабильном уровне нуля, возможность регистрировать быстрые изменения хемилюминесценции, - все это при большом числе одновременно анализируемых проб малого объема - главные отличительные черты прибора.

  7. Проявление антиоксидантных свойств препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» в цельной крови человека Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ - орто» дозозависимо понижал уровень продукции активных форм кислорода (АФК) в цельной крови человека. Высокий уровень АФК в крови является опасным и высокореактивным повреждающим фактором для клеток и тканей организма.

  8. Нейтрофил -полиморфноядерный нейтрофильный гранулоцит 5 мкм • Фагоцитоз • Дегрануляция • Респираторный взрыв Фагоцитоз зимозана нейтрофилом (с любезного разрешения Dr. K.B.Pryzwansky) 1 – прикрепление частицы зимозана; 2 – образование псевдоподии вокруг зимозана; 3 - поглощение

  9. Респираторный взрыв 2NADPH + 4O2 = 2NADP+ + 4O2- + 2H+ • Повышенная утилизация глюкозы • Усиленное потребление О2 • Активация гексозомонофосфатного пути • Усиленная продукция активных форм кислорода Активированная продукция АФК 0,5-1 nmol/мин/106 клеток Спонтанный уровень продукции АФК

  10. Реактивные формы кислорода H2O2 H2O HOCl 1O2 + Cl- O2 singlet oxygen hypochlorus acid MPO O2-· O2 Fe2+ Fe3+ H2O2 O2-· OH· H2O SOD H2O superoxide anion radical hydrogen peroxide hydroxyl radical NO2· NO OONO- HOONO nitrogen dioxide radical nitric oxide peroxynitrite anion

  11. Антиоксидантные свойства препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» Клетки были инкубированы с ТГ-орто в возрастающих концентрациях в течение 30 мин при 37оС Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» дозозависимо понижает высокий уровень спонтанной продукции АФК изолированными нейтрофилами человека

  12. Влияние препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» на опосредованную рецептором хемотаксического пептида продукцию АФК изолированными гранулоцитами крови человека Препарат ТГ-орто дозозависимо подавляет развитие респираторного взрыва в изолированных гранулоцитах. Клетки были инкубированы с ТГ-орто в различных разведениях при 37оС в течение 30 мин, затем активированы 1 мкМ N-формил-Met-Leu-Phe, чтобы вызвать респираторный взрыв.

  13. Влияние препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» на опосредованную рецептором хемотаксического пептида продукцию АФК изолированными гранулоцитами крови человека Препарат ТГ-орто дозозависимо изменяет способность гранулоцитов продуцировать активные формы кислорода . Клетки были инкубированы с ТГ-орто в различных разведениях при 37оС в течение 30 мин, затем активированы 50мкМ N-формил-Met-Leu-Phe, чтобы вызвать респираторный взрыв.

  14. αi   Участники передачи сигнала от рецептора fMLF Рецептор fMLF SOS Shc Gi GAP Grb2 ras PA PLD PA-AK raf MAPK каскад PI3K PKB/Akt PLC PDK PI3P DAG Ca2+ PKC Кальмодулин Ca2+-CK

  15. Сигнальные пути, активируемые окислительным стрессом Активные Формы Кислорода PI3K PKB ERK JNK p38 DNA-PK JAK PLCγ1 C-Jun STAT p53 HSF1 Gene expression changes PKC NF-kB (on J.L. Martindale & N.J. Holbrook, 2002, J.Cell.Physiol.)

  16. Оценка антиоксидантной активности препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ - орто» на модели супероксид-анион продуцирующей ферментативной реакции Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ - орто» дозозависимо ингибирует генерацию АФК в ферментативной бесклеточной реакции «ксантин – ксантиноксидаза». Препарат В реакции «ксантин – ксантиноксидаза» продуцируется супероксид-анион радикал

  17. Выводы: • Антиоксидантная активность препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» проявляется в цельной крови, на изолированных клетках и в ферментативной реакции. • Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» обладает высокой антиоксидантной активностью в дозах, достигаемых при его разведении более чем в 100000 раз. • Антиоксидантное действие исследуемого препарата направлено на супероксид-анион радикал, который является исходной формой активных интермедиатов кислорода. Предполагается, что применение препарата может быть полезным при заболеваниях, сопровождающихся дисфункцией фагоцитов, связанной с избыточной нерегулируемой продукцией АФК.

  18. Работа выполнена совместно с сотрудниками Лаборатории клеточной нейробиологии Института Биофизики клетки Российской Академии Наук г. Пущино Благодарности Сафронова В.Г. Мальцева В.Н. Кротова Л.М. Санталов Б.Ф.

More Related