slide1 n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигров PowerPoint Presentation
Download Presentation
Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигров

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 19

Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигров - PowerPoint PPT Presentation


  • 120 Views
  • Uploaded on

Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигровый глаз - орто». Лункин В.В., Поляшова Т.И. НПФ «МЕДИКОМЕД». Действие активных форм кислорода (АФК) на клетки и ткани. High. Гибель. Воздействие активных форм кислорода в высоких концентрациях

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигров' - kaden-sanders


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide1
Исследование антиоксидантной активности фитопрепарата «Тигровый глаз - орто»

Лункин В.В., Поляшова Т.И.

НПФ «МЕДИКОМЕД»

slide2
Действие активных форм кислорода (АФК) на клеткии ткани

High

Гибель

Воздействие активных форм кислорода

в высоких концентрациях

на клетки и ткани приводит к их повреждению и гибели,

что является причиной многих заболеваний.

Апоптоз

Некроз

Доза АФК

Задержка роста

и старение

Выживаемость

Митогенетическое и

пролиферативное

действие

Low

АФК в низких дозах

способствуют выживаемости

slide4

D A N G E R

Chemicals

Radiation

Microbial and virus infection

Free radicals

ROS

Oxygen radicals

scavengers

?

DNA damage

Endogenic

Exogenic

Carcinogenesis

slide5
Предпосылки работы. Природные соединения и их композиции являются потенциальными экзогенными «ловушками» АФК и других свободных радикалов и требуют научного анализа для их практического применения.
  • Задача работы состояла в исследовании антиоксидантной активности препарата

«Тигровый глаз – орто» на экспериментальных моделях in vitro: нефракционированной крови человека, изолированных гранулоцитах крови человека, ферментативной бесклеточной среде.

slide6

Объект и Метод

Работа проведена на клетках периферической нефракционированной крови, изолированных гранулоцитах человека

и на модели ферментативной реакции

Интенсивность генерации АФК была оценена

по люминол-зависимой хемилюминесценции с использованием хемилюминометра ХЕМИЛЮМ-12, который позволяет проводить измерения одновременно в 12 образцах.

Прибор разработан в Лаборатории клеточной нейробиологии Института биофизики клетки РАН.

12 12
ХЕМИЛЮМ-12Хемилюминометр роторный 12-ячеечный

ХЕМИЛЮМ-12 работает с пробами объемом от 0,1 до 0,3 мл, помещаемыми одновременно в 12 ячеек. В процессе регистрации на экране монитора выстраиваются 12 графиков; через каждые 2,5 секунды на каждом из них ставится очередная точка.

Одновременная регистрация хемилюминесценции от 12 проб позволяет получить серию измерений с использованием минимального количества исследуемого материала.

Высокая чувствительность при стабильном уровне нуля, возможность регистрировать быстрые изменения хемилюминесценции, - все это при большом числе одновременно анализируемых проб малого объема - главные отличительные черты прибора.

slide8

Проявление антиоксидантных свойств

препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» в цельной крови человека

Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ - орто»

дозозависимо понижал уровень продукции активных форм кислорода (АФК) в цельной крови человека. Высокий уровень АФК в крови является опасным и высокореактивным повреждающим фактором для клеток и тканей организма.

slide9

Нейтрофил -полиморфноядерный нейтрофильный гранулоцит

5 мкм

  • Фагоцитоз
  • Дегрануляция
  • Респираторный взрыв

Фагоцитоз зимозана нейтрофилом

(с любезного разрешения

Dr. K.B.Pryzwansky)

1 – прикрепление частицы зимозана;

2 – образование псевдоподии вокруг зимозана;

3 - поглощение

slide10

Респираторный взрыв

2NADPH + 4O2 = 2NADP+ + 4O2- + 2H+

  • Повышенная утилизация глюкозы
  • Усиленное потребление О2
  • Активация гексозомонофосфатного пути
  • Усиленная продукция активных форм кислорода

Активированная продукция АФК

0,5-1 nmol/мин/106 клеток

Спонтанный уровень продукции АФК

slide11
Реактивные формы кислорода

H2O2

H2O

HOCl

1O2

+ Cl-

O2

singlet

oxygen

hypochlorus

acid

MPO

O2-·

O2

Fe2+

Fe3+

H2O2

O2-·

OH·

H2O

SOD

H2O

superoxide

anion radical

hydrogen

peroxide

hydroxyl

radical

NO2·

NO

OONO-

HOONO

nitrogen

dioxide

radical

nitric

oxide

peroxynitrite

anion

slide12
Антиоксидантные свойства препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто»

Клетки были инкубированы с ТГ-орто в

возрастающих концентрациях

в течение 30 мин при 37оС

Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто»

дозозависимо понижает высокий уровень спонтанной

продукции АФК изолированными нейтрофилами человека

slide13

Влияние препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» на опосредованную рецептором хемотаксического пептида продукцию АФК изолированными гранулоцитами крови человека

Препарат ТГ-орто

дозозависимо подавляет развитие

респираторного взрыва в изолированных

гранулоцитах.

Клетки были инкубированы с

ТГ-орто в различных разведениях

при 37оС в течение 30 мин,

затем активированы 1 мкМ N-формил-Met-Leu-Phe,

чтобы вызвать респираторный взрыв.

slide14

Влияние препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» на опосредованную рецептором хемотаксического пептида продукцию АФК изолированными гранулоцитами крови человека

Препарат ТГ-орто

дозозависимо изменяет способность гранулоцитов продуцировать активные формы кислорода

.

Клетки были инкубированы с

ТГ-орто в различных разведениях

при 37оС в течение 30 мин,

затем активированы 50мкМ N-формил-Met-Leu-Phe, чтобы вызвать респираторный взрыв.

slide15

αi

Участники передачи сигнала от рецептора fMLF

Рецептор fMLF

SOS

Shc

Gi

GAP

Grb2

ras

PA

PLD

PA-AK

raf

MAPK

каскад

PI3K

PKB/Akt

PLC

PDK

PI3P

DAG

Ca2+

PKC

Кальмодулин

Ca2+-CK

slide16
Сигнальные пути, активируемые окислительным стрессом

Активные

Формы

Кислорода

PI3K

PKB

ERK

JNK

p38

DNA-PK

JAK

PLCγ1

C-Jun

STAT

p53

HSF1

Gene expression

changes

PKC

NF-kB

(on J.L. Martindale & N.J. Holbrook, 2002, J.Cell.Physiol.)

slide17
Оценка антиоксидантной активности препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ - орто» на модели супероксид-анион продуцирующей ферментативной реакции

Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ - орто»

дозозависимо ингибирует

генерацию АФК в

ферментативной

бесклеточной реакции

«ксантин – ксантиноксидаза».

Препарат

В реакции «ксантин – ксантиноксидаза»

продуцируется супероксид-анион радикал

slide18
Выводы:
  • Антиоксидантная активность препарата «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» проявляется в цельной крови, на изолированных клетках и в ферментативной реакции.
  • Препарат «ТИГРОВЫЙ ГЛАЗ – орто» обладает высокой антиоксидантной активностью в дозах, достигаемых при его разведении более чем в 100000 раз.
  • Антиоксидантное действие исследуемого препарата направлено на супероксид-анион радикал, который является исходной формой активных интермедиатов кислорода.

Предполагается, что применение препарата может быть полезным при заболеваниях, сопровождающихся дисфункцией фагоцитов, связанной с избыточной нерегулируемой продукцией АФК.

slide19
Работа выполнена совместно с сотрудниками

Лаборатории клеточной нейробиологии

Института Биофизики клетки

Российской Академии Наук

г. Пущино

Благодарности

Сафронова В.Г.

Мальцева В.Н.

Кротова Л.М.

Санталов Б.Ф.