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回忆旧知识. 抗虫棉. 普通棉. 重组 DNA 转移到 动物受精卵 中。. 将人的生长激素基因注射到小白鼠受精卵中，得到的“超级小鼠”。. 超级小鼠与超级鱼. 专题一 基因工程. 1.1 DNA 重组技术的基本工具. 一、限制性核酸内切酶. “ 分子手术刀”. 1 、来源： 2 、种类： 3 、作用： 4 、结果：. 主要是从 原核生物中分离纯化出来 的， 切断 外来的 DNA ，在内部进行，故名限制性核酸内切酶。. 4000 种.
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回忆旧知识 抗虫棉 普通棉
重组DNA转移到动物受精卵中。 将人的生长激素基因注射到小白鼠受精卵中，得到的“超级小鼠”。 超级小鼠与超级鱼
1.1 DNA重组技术的基本工具 一、限制性核酸内切酶 “分子手术刀”
1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 主要是从原核生物中分离纯化出来的，切断外来的DNA，在内部进行，故名限制性核酸内切酶。 4000种 每种酶识别某种双链DNA分子特定的核苷酸序列，使每一条链中两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(具专一性) 黏性末端 形成两种末端 平末端
大肠杆菌(EcoRI) 限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶
黏性末端 黏性末端 黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的 核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。
什么叫平末端？ 当限制酶切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。
当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。
思考题： • 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 • 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端。
二、 DNA连接酶—— “分子缝合针” E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 切断的DNA片段要与受体细胞的DNA连接，你觉得可以用什么酶？ 两类 1、种类： 2、作用部位： 磷酸二酯键
二、DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶连接被限制酶切开的两个核苷酸之间的的磷酸二酯键。
E.coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端
教材P7思考与探究 1 • 2和7能连接形成…ACGT… …TGCA…； • 4和8能连接形成…GAATTC… …CTTAAG…； • 3和6能连接形成…GCGC… …CGCG…； • 1和5能连接形成…CTGCAG… …GACGTC…。
三、基因进入受体细胞的载体 —“分子运输车” 常用主要有两类： 1）细菌的质粒(绝大多数是环状DNA分子) 2）入噬菌体或某些动植物病毒 运载体：
有切割位点 标记基因的作用鉴别受体细胞中是否含目的基因。如将来可用含青霉素的培养基鉴别，将含目的基因的细胞筛选出来。 能带着插入的目的基因一起复制
3. （1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。 （2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 （3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 （4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 （5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。
练习 1.不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D
练习 C 2.以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键
练习 B D 3.有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体
