肠杆菌科

1. 肠杆菌科 孙景勇 http://www.shsmu.edu.cn/

2. 1 2 3 4 沙门菌属 志贺菌属 克雷伯菌属 其他肠杆菌科菌属 肠杆菌科 上海交通大学医学院

3. 沙门菌属 一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验 上海交通大学医学院

4. 一、分类 上海交通大学医学院

5. 二、细菌特性 • 形态特征 • 培养特性 • 生化反应 • 抗原结构 • 变异性 • 抵抗力 上海交通大学医学院

6. 伤寒沙门菌革兰染色 （一）形态特征 革兰阴性直杆菌，较细长，大小0.7～1.5μm×2.0～5.0μm，多具有周鞭毛，能运动，有时会出现无鞭毛的突变型。无芽孢，无荚膜。 上海交通大学医学院

7. 伤寒沙门菌菌落特征（血平板） 上海交通大学医学院

8. （二）培养特性 兼性厌氧，最适生长温度35～37℃，最适生长pH为6.8～7.8。本菌属对营养的要求不高，在普通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润、半透明、边缘整齐的菌落，有时可出现粗糙型的菌落。 上海交通大学医学院

9. 伤寒沙门菌菌落特征（MAC） 在肠道选择性培养基上菌落小至中等，透明或半透明，乳糖不发酵，与志贺菌的菌落相似。 上海交通大学医学院

10. 伤寒沙门菌菌落特征（SS） 有些能产生硫化氢的菌株，在SS琼脂上形成中心黑色的菌落。 上海交通大学医学院

11. 伤寒沙门菌KIA（K A－＋）MIU（＋－－） （三）生化反应 乳糖阴性、在三糖铁琼脂中表现为产碱/产酸或产碱/产酸产气，H2S阳性、脲酶阴性。 上海交通大学医学院

12. 沙门菌IMViC试验（－＋－－） 吲哚阴性、动力阳性、VP 阴性、枸橼酸盐阴性、鸟氨酸阳性。 凡临床分离菌乳糖阳性、吲哚阳性或脲酶阳性者均不考虑为沙门菌。 上海交通大学医学院

13. （四）抗原结构 • 主要有3种，即菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原及表面抗原（Vi抗原等）。 • 1．O抗原 为多糖－类脂－蛋白质复合物，具耐热性，能耐受100℃2.5h。O抗原共有58种，以阿拉伯数字顺序排列，现已排至第67，但其中有9种被删除，故数字是不连续的。每个沙门菌的血清型可含一种或数种O抗原。 上海交通大学医学院

14. 凡含共同抗原成分的血清型归为一个群，每个群以O加上阿拉伯数字及括号中大写的26个英文字母（A～Z）顺序编排，如O2群（A），O4群（B），O50群（Z）等，Z以后无英文字母标记，直接以 O加数字表示，如O51群～O67群。O抗原是分群的依据（表8-8）。其刺激机体产生的抗体以IgM为主，与相应的抗血清反应时呈颗粒状凝集。 上海交通大学医学院

15. 2．H抗原 • 为不稳定的蛋白质抗原，加热或用乙醇处理均被破坏。沙门菌H抗原有两个相，第一相特异性较高，称特异相，用小写英文字母a、b、c表示，直至z，z以后用z加阿拉伯数字表示，如 z1、z2、z3……z65。第二相抗原为沙门菌所共有，称非特异相，直接用 1、2、3表示。 • 同时有第一相和第二相H抗原的细菌称双相菌，仅有一相者称单相菌。H抗原是定型的依据。其刺激机体产生的抗体以IgG为主，与相应的抗血清呈絮状反应。 上海交通大学医学院

16. 3．表面抗原 • 在沙门菌属中已被证实的表面抗原有Vi抗原、M抗原和5抗原三种，均为不稳定的表面抗原。其中最有意义的是Vi抗原。 上海交通大学医学院

17. 3．表面抗原 • Vi抗原位于菌体的最表层，新分离的伤寒及副伤寒丙沙门菌常带有此抗原，有抗吞噬及保护细菌免受相应抗体和补体的溶菌作用。Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体发生凝集，故在沙门菌血清学鉴定时需事先加热破坏Vi抗原。带Vi抗原的沙门菌亦可用Vi噬菌体进行分型，有助于流行病学调查和追踪传染源。 上海交通大学医学院

18. （五）变异性 • 1．S-R变异 自临床标本初次分离的菌株一般都是光滑（S）型，经人工培养、传代后逐渐变成粗糙（R）型菌落。此时菌体表面的特异多糖抗原丧失，在生理盐水中出现自凝。 • 2．H-O变异 是指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异。 上海交通大学医学院

19. 3．位相变异 具有双相H抗原的沙门菌变成只有其中某一相H抗原的单相菌，称位相变异。 • 在沙门菌血清学分型时，如遇到单相菌，特别是只有第二相（非特异相）抗原时，需反复分离和诱导出第一相（特异相）抗原方能作出鉴定。 上海交通大学医学院

20. 4．V-W变异 • 是指沙门菌失去Vi抗原的变异。 • 初次分离得到的具有Vi抗原、O不凝集的沙门菌称V型菌； V型菌经人工培养，逐渐丧失部分Vi抗原而成为VW型菌，进而丧失全部Vi抗原而成为W型菌。 • Vi抗原部分丧失、既可与O抗血清发生凝集又可与Vi抗血清凝集者称VW型菌； • Vi抗原完全丧失、与O抗血清发生凝集而与Vi抗血清不凝集者称W型菌。 上海交通大学医学院

21. （六）抵抗力 • 不强。 • 加热 60℃ l小时或 65℃ 15～20分钟即被杀死。在水中能存活 2～3周，粪便中可存活1～2个月。 • 对胆盐和煌绿等染料有抵抗力。因此可用于制备沙门菌的选择培养基。 上海交通大学医学院

22. 三、临床意义 致病物质 所致疾病 上海交通大学医学院

23. 致病物质 • 侵袭力 Vi-Ag • 内毒素 • 肠毒素 上海交通大学医学院

24. 1．侵袭力 • 有Vi抗原的沙门菌具有侵袭力，能穿过小肠上皮到达固有层。细菌在此部位常被吞噬细胞吞噬，但由于Vi抗原的保护作用，被吞噬后的细菌在细胞内不被破坏，反而在细胞内继续生长繁殖，并随游走的吞噬细胞将细菌带至机体的其他部位。 上海交通大学医学院

25. 2．内毒素 • 沙门菌有较强的内毒素，可引起发热，白细胞改变，中毒性休克，并能激活补体系统，产生多种生物效应，导致一系列病理生理变化。 上海交通大学医学院

26. 3．肠毒素 • 某些沙门菌（鼠伤寒沙门菌）能产生类似大肠埃希菌的肠毒素。 上海交通大学医学院

27. 所致疾病 • 伤寒和副伤寒 • 急性胃肠炎或食物中毒 • 菌血症（或败血症） 上海交通大学医学院

28. 肠热症 • 即指伤寒和副伤寒。最典型的是由伤寒沙门菌引起的伤寒，表现为发热、血培养或肥达反应阳性。 • 肠热症也可由其他沙门菌引起，常表现为轻度发热和腹泻。 上海交通大学医学院

29. 伤寒的发病过程 • 细菌随污染的食品或水经口感染，穿过小肠上皮进入黏膜下组织。细菌在此被吞噬细胞吞噬，但吞噬后不被消灭反在吞噬细胞内繁殖，并随吞噬细胞经淋巴管到达淋巴结 • 在淋巴结内大量繁殖后，经胸导管进入血流（第一次菌血症）。此时病人在临床上出现发热、不适等症状。 上海交通大学医学院

30. 随后，细菌随血流播散至肝、脾、胆囊、肾和骨髓等实质器官中，继续大量繁殖，再次进入血流（第二次菌血症）并随血液扩散至全身各器官及皮肤，病人出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身（内毒素）中毒症状。随后，细菌随血流播散至肝、脾、胆囊、肾和骨髓等实质器官中，继续大量繁殖，再次进入血流（第二次菌血症）并随血液扩散至全身各器官及皮肤，病人出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身（内毒素）中毒症状。 • 胆囊中的细菌随胆汁进入肠腔，可经粪便排出，肾脏中的细菌随尿排出体外。 上海交通大学医学院

31. 本病潜伏期7～20天，典型病程3～4周，发病2周后机体出现免疫反应，通过特异性抗体和致敏淋巴细胞消灭细菌，使疾病好转，但同时也可引起迟发性变态反应，导致肠壁孤立和集合淋巴结的坏死和溃疡，甚至造成肠穿孔而危及生命。本病潜伏期7～20天，典型病程3～4周，发病2周后机体出现免疫反应，通过特异性抗体和致敏淋巴细胞消灭细菌，使疾病好转，但同时也可引起迟发性变态反应，导致肠壁孤立和集合淋巴结的坏死和溃疡，甚至造成肠穿孔而危及生命。 • 携带者：伤寒沙门菌感染过后约3％患者可成为携带者，在粪便中可持续排菌长达1年或1年以上。 上海交通大学医学院

32. 四、微生物学检验 （一）检验程序（二）标本采集 （三）检验方法 上海交通大学医学院

33. 沙门菌检验程序 、 上海交通大学医学院

34. 标本采集 • 根据疾病的类型、病情和病程的不同分别采集不同的标本。 • 伤寒沙门菌分离培养原则上于发病第1周取血，第2、3周取粪便做培养的分离率高，第3周也可取尿液培养，全病程均可作骨髓培养。 • 血清学诊断应在病程的不同时期分别采集2～3份标本。 上海交通大学医学院

35. 检验方法 1.显微镜检查 2.分离培养 3.鉴定 4.血清学诊断 上海交通大学医学院

36. 标本直接检查 1、显微镜检查 革兰阴性杆菌 • 2、抗原检测 将病人标本或肉汤增菌培养物直接用商品胶乳凝集试剂进行试验，可快速检出沙门菌和志贺菌。 上海交通大学医学院

37. 分离培养 • 常规的肠道选择鉴别培养基能有效地分离沙门菌，常用肠道鉴别培养基（MAC或EMB）、选择培养基（SS等）和强选择培养基（孔雀绿和亚硫酸铋琼脂等）。 • 孔雀绿琼脂：分离除伤寒、副伤寒沙门菌以外的沙门菌种 • 亚硫酸铋琼脂：分离伤寒沙门菌 • 强选择培养基：仅适用于暴发流行时。 上海交通大学医学院

38. 在暴发流行或筛选带菌者时，在菌量较少的情况下，可在初次分离时加用亚硒酸盐或GN（Gram negative）增菌肉汤。 上海交通大学医学院

39. 鉴定 • 挑选疑为沙门菌的可疑菌落（EMB上无色或不透明琥珀色；MAC上较小、无色透明；SS上不透明或透明、无色或中央为黑色的菌落；XLD上呈红色或中央为黑色的菌落）。将可疑菌落进一步鉴定到属和种（生化、血清学试验）。 上海交通大学医学院

40. 沙门菌血清学鉴定 上海交通大学医学院

41. 上海交通大学医学院

42. 抗体检测（肥达反应） • 用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H抗原，检测受检血清中有无相应的抗体的半定量凝集试验，称为肥达反应（Widal test）。 • 与细菌分离培养同时进行或在前者失败的情况下，能辅助诊断伤寒、副伤寒A、B和C引起的肠热症。 上海交通大学医学院

43. 1．方法 将受检血清用生理盐水作倍比稀释，每个稀释度需作5个复管，分别加入等量的伤寒沙门菌O、H抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的H抗原（以A、B、C表示）进行凝集试验，凡血清最高稀释度出现明显凝集者为凝集效价。 上海交通大学医学院

44. 血清学诊断 肥达反应(Widal test) O凝集 （1:20～1:1280，效价1:80） H凝集 （1:20～1:1280，效价1:320） 上海交通大学医学院

45. 2．结果解释 • （1）正常值：各地区有所不同，一般O＞1：80，H＞1：160，A、B、C＞1：80才有临床意义。应在疾病早期及中后期分别采集两次血清，若第二份血清比第一份的效价增高4倍以上具有诊断价值。 • （2）O抗原刺激机体产生的抗体为IgM，出现较早，存在于血清内的时间较短；H抗体为IgG，出现较迟，持续存在的时间较长。因抗原、抗体性质的不同可影响肥达反应的结果，从而使结果的解释变得较为复杂。 上海交通大学医学院

46. 1）O高H不高：可能为疾病的早期；沙门菌属中其他菌种感染引起的交叉反应；或H→O变异的沙门菌引起的感染等。建议一周后复查。如一周后H也有升高，可证实为肠热症。1）O高H不高：可能为疾病的早期；沙门菌属中其他菌种感染引起的交叉反应；或H→O变异的沙门菌引起的感染等。建议一周后复查。如一周后H也有升高，可证实为肠热症。 • 2）H高O不高：可能为疾病的晚期；以往患过伤寒、副伤寒或接受过预防接种；回忆反应等。 上海交通大学医学院

47. 1 2 3 4 沙门菌属 志贺菌属 克雷伯菌属 其他肠杆菌科菌属 肠杆菌科 上海交通大学医学院

48. 志贺菌属 一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验 上海交通大学医学院

49. 一、分类 志贺菌属分为A、B、C、D 4群：A群为痢疾志贺菌（S. dysenteriae），B群为福氏志贺菌（S. flexneri），C群为鲍氏志贺菌（S. boydii），D群为宋内志贺菌（S. sonnei）。 上海交通大学医学院

50. 二、细菌特性 • 形态特征 • 培养特性 • 生化反应 • 抗原结构 • 变异性 • 抵抗力 上海交通大学医学院