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Activateur = ???

Exemple d’un activateur transcriptionnel La protéine CRP. Activateur = ???. b ’. aN. b. a. s. 4. -35. -10. aN. b. a. s. 4. -35. -10. aN. a. 4. s. Mécanismes simples. Taux de transcription. Changement de conformation. Classe I. b ’. CRP. Classe II.

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Activateur = ???

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Presentation Transcript

  1. Exemple d’un activateur transcriptionnel La protéine CRP Activateur = ???

  2. b’ aN b a s 4 -35 -10 aN b a s 4 -35 -10 aN a 4 s Mécanismes simples Taux de transcription Changement de conformation Classe I b’ CRP Classe II Busby and Savery ENCYCLOPEDIA OF LIFE SCIENCES & 2007, John Wiley & Sons, Ltd. www.els.net p1-9

  3. + CRP AMPc - CRP - AMPc N N HTH 209aa C ADN La protéine CRP cAMP receptor protein = CAP (catabolite gene activating protein) Chez E. coli Nbrx promoteurs incluant Plac, Pgal, Para, Pmal Certains promoteurs/Pcrp, Pcya -

  4. AAATGTGATCTAGATCACATTT Les promoteurs cibles 22pb Interactions ARNpol Angle ~ 90o

  5. N N AR1 HTH C ADN a Plac -61,5 Affinité ADN AR1 aval Liaison coopérative sur ADN Classe I AR2 AR3 Busby and Savery ENCYCLOPEDIA OF LIFE SCIENCES & 2007, John Wiley & Sons, Ltd. www.els.net p1-9

  6. AR2 N N AR1 AR3 HTH C ADN a a s 1)FixationAR1 amont aCTD effet inhibiteur : neutralisation (D aCTD AR1non nécessité) Pgal -41,5 ActivationAR2 aval Facilite isomérisation 3 aa+aNTD 4 aa - 2) Classe II Busby and Savery ENCYCLOPEDIA OF LIFE SCIENCES & 2007, John Wiley & Sons, Ltd. www.els.net p1-9 Quelle(s) manips: Hyp aCTD mal positionnné, CRP corrige????? Stabilisation ARNpol et facilite isomérisation AR3 aval

  7. a a a a a s -91,5 -61,5 -91,5 -41,5 Classe III Plusieurs sites 2 classe I classe I + classe II Synergie des CRP Activation D’après Busby and Savery ENCYCLOPEDIA OF LIFE SCIENCES & 2007, John Wiley & Sons, Ltd. www.els.net p1-9

  8. Certains promoteurs/Pcrp, Pcya CRP Répression par CRP CRP -Autorégulation ARNpol crp ARNpol Métabolisme des pyrimidines -deoP +cytidine CRP activateur -cytidine CRP permet fixation du répresseur CytR

  9. -1940 J. Monod: croissance d’E. coli + mélange sucres ??? -Niveau AMPc régulé par système de transport des sucres: PTS, qui contrôle activité AC PTS= sugar Phosphotransferase system Mb P EI et HPr protéines générales EII sucre-spécifiques: 3 à 4 domaines IIA et IIB Autres domaines P transfert PEP sucre sucre P transfert Passage membrane Répression catabolique; Carbon catabolite repression=CCR Ce phénomène a été appelé ??? Chez E. coli -Ce système nécessite

  10. GlpK LacY Inducteur exclusion -Glu AC CRP activation Opérons cataboliques Le système PTS GlpK=Glycérol Kinase LacY=lactose perméase AC=adénylate cyclase CM=cell membrane PEP=phosphoénol pyruvate D’après Stülke et Hillen Current opinion in Microbiology 1999 vol 2 p 195_201

  11. +Lac -Glu Allolac + inactif CRP active AMPc AMPc Rappels: Régulation opéron lactose lacI lacY lacA lacZ En présence ou absence de quel(s) sucre(s)???? 1)+Glu ou +Lac ou +Glu+Lac 2) CRP* active +Glu+Lac pas expression idem Qui de CRP-AMPc ou exclusion de l’inducteur est le principal responsable du phénotype Glu répression???

  12. Mb P PEP sucre sucre CCR chez B. subtilis et bactéries apparentées (G+, low GC) Le composant central du PTS HPr EI (His-15) -2 sites de phosphorylation Hpr kinase (Ser-46) PtsK Régulation Importance de Phosphorylation de Hpr dans CCR

  13. GlpK Reg spé -Glu +Glu PTS chez B. subtilis 1 Induc gly meta Glycérol-3-P 2 Reg spé= Régulateurs spécifiques contenant un PTS reg domain=PRD Exp: levR (levanase), licT (b-glucoside) D’après Stülke et Hillen Current opinion in Microbiology 1999 vol 2 p 195_201

  14. Le répresseur CcpA -CcpA Répresseur de la famille LacI -Promoteurs cibles Séquence cre : catabolite responsive element Localisation: -dans promoteur(exp amyE) -dans seq codante (exp xyl) -en amont des promoteurs (exp lev) CCR médiée par CcpA -Interaction spécifique CcpA/Hpr-S46-P Fixation sur cre Expériences?????? Complexe ternaire CcpA2 /2Hpr-S46-P /cre -Crh = Hpr-like proteine Crh-Ser46 par PtsK mais 0 P par EI

  15. GlpK Reg spé GlpK -Glu LacY Inducteur exclusion -Glu AC +Glu CRP activation Opérons cataboliques B. subtilis E. coli Conclusions 1 -Glu Repression des opérons cataboliques Deux mécanismes différents pour CCR enteric bactéries/G+low G+C Gènes codant Hpr et Hpr kinase chez G- non enteriques CCR? Rôle important de la P dans régulation au sens large Dans tous les cas

  16. Conclusions 2 Régulation transcriptionnelle avec comme point de départ CRP -Protéine: fonction et structure -Interaction avec autres macromolécules -Etude des cibles -Physiologie Quelles techniques????

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