药理学实验
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药学实验教学中心 伍小波 - PowerPoint PPT Presentation


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药理学实验. 药学实验教学中心 伍小波. 实验一 药理实验基础知识 实验二 不同给药途径对药物效应的影响 实验三 药物的协同作用和拮抗作用 实验四 硝酸士的宁 LD 50 的测定 实验五 利尿药对家兔尿量的影响. 实验一 药理实验基础知识. 一、目的 1. 掌握基本操作,锻炼动手、动脑能力; 2. 更好地掌握药理学基本理论知识; 3. 培养科学思维. 二、 基本要求 1. 实验前: 预习实验内容并复习相关理论知识; 2. 实验时 ⑴ 实验器材要妥善保管; ⑵ 实验操作按步骤进行,仔细观察实验中出现的现象,实事求是地做好记录; ⑶ 注意节约实验药品;

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药理学实验

药学实验教学中心 伍小波


实验一 药理实验基础知识

实验二不同给药途径对药物效应的影响

实验三 药物的协同作用和拮抗作用

实验四 硝酸士的宁LD50的测定

实验五 利尿药对家兔尿量的影响


实验一 药理实验基础知识

一、目的

1.掌握基本操作,锻炼动手、动脑能力;

2.更好地掌握药理学基本理论知识;

3.培养科学思维


二、基本要求

1.实验前:预习实验内容并复习相关理论知识;

2.实验时

⑴ 实验器材要妥善保管;

⑵ 实验操作按步骤进行,仔细观察实验中出现的现象,实事求是地做好记录;

⑶ 注意节约实验药品;

⑷ 维持良好的课堂纪律。

3.实验后

⑴ 各组同学将实验动物处死,实验台擦干净,将实验方盘送回准备室;

⑵ 值日生搞好实验室卫生,将死亡动物送至指定场所;

⑶ 书写实验报告。


三、实验报告的书写

1.题目

2.目的

3.原理

4.材料:实验动物,器材,药品

5.方法:用自己的语言简单扼要描述出来;

6.结果:要求真实、清楚;

7.讨论:将实验结果进行比较、分析;实验中有哪些不足之处;结果异常或失败的原因;

8.结论:将实验结果进行归纳总结,应带有提示性质。


四、实验设计基本原则

1.随机原则

使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中,除处理因素外其他因素尽可能均衡一致,从而抵消非实验因素的影响。

2.对照原则

⑴ 组间对照:阴性对照,阳性对照,同因素不同水平对照;

⑵ 自身前后对照

3.重复原则


五、实验动物

1.动物的选择

⑴ 小白鼠:适用于需大量动物的实验,如某些药物的筛选,半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。

⑵ 大白鼠:比较适用于抗炎药物实验,血压测定、利胆、利尿药实验,也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。


豚鼠:因其对组胺敏感,并易于致敏,故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感,常用于抗结核病药的实验。

⑷ 家兔:常用于观察研究脑电生理作用,药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感,也常用于体温实验,用于热原检查。

⑸ 狗:狗是记录血压,呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘,以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时,也常采用狗。


2.实验动物的编号

狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。


3.麻醉药的选择

⑴局部麻醉:常采用2%普鲁卡因做皮下浸润注射,可用于局部手术。

⑵全身麻醉:

①吸入麻醉:可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内,利用乙醚挥发的性质,经肺泡吸收,作用较快,适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。

②注射麻醉:常用戌巴比妥钠和乌拉坦。


4.动物捉拿及固定方法

⑴ 小白鼠

右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁纱网上,用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤,并以左手的小指、无名指固定其尾部,便可将小鼠固定在手上。

⑵ 大白鼠

用右手提起尾部,放在粗糙面上,左手的拇指和食指捉其头部,其余三指夹住背腹部即可固定。


豚鼠

豚鼠性情温和不咬人,用手握住躯干即可。

⑷ 家兔

可用一手抓住家兔颈背部皮肤,将兔提起,另一手托其臀部,使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时,可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。


5. 动物的给药方法

⑴ 小白鼠

① 灌胃法(i.g.):以左手固定小鼠后,使其腹部朝上,颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器,自口角插入口腔,再从舌面沿上腭进入食道。小鼠灌胃容量一般为0.1-0.3m1/10g。

② 腹腔注射(i.p.):以左手固定小鼠,方法同灌胃,右手持注射器,取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高,刺入不宜太深,以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为0.1-0.3ml/l0g。


皮下注射(s.c.):用左手固定小鼠后,右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。

④ 静脉注射(i.v.):将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下,让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部,或将鼠尾在50'C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端,右手持注射器将针头刺入尾静脉,推入药液。


家兔

① 灌胃:需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身,左手握家兔双耳,右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内,压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中,如有气泡吹出,表示插在气管内,此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后,用注射器接通导尿管将药液推入。


皮下、腹腔注射:给药方法基本上同小鼠,唯针头可稍大,给药量可稍多。皮下与肌内为0.5-1.0/mg,腹腔为1.0-5.0ml/mg。

③ 静脉注射:将家兔置固定箱内,拨去耳壳外缘的毛,选择一条比较明显的耳缘静脉,用酒精棉球涂擦皮肤,使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部,食指垫在兔耳注射处的下面,右手持注射器,将针头从近耳尖处刺入,当确认针头在血管中后,将药液推入。


6.动物的处死:大、小鼠通常用颈椎脱臼法处死。


实验二不同给药途径对药物效应的影响

一、实验目的 观察不同给药途径对药物效应的影响。

二、实验材料lml注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、普通天平、3.5%硫酸镁溶液


三、观察指标 动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。

四、实验方法 取禁食12h的昆明种小鼠3只,称重,分别标为对照组、灌胃组和腹腔注射组按以下给药:

A:对照组:灌胃给生理盐水0.2ml/10g;

B:灌胃组:灌胃给3.5%硫酸镁溶液0.2ml/10g;

C:腹腔注射组:腹腔注射给3.5%硫酸镁溶液

0.2ml/10g。


给药后注意观察动物的活动情况,是否有肌肉松弛的表现。15min后每只小鼠均灌胃给予5%炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml。炭末灌胃后15min,将小鼠脱臼处死,剖开腹腔,取出胃肠道。剪去附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内的移动距离和小肠(自幽门至回盲部)的全长,计算每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率,比较3组动物的活动状况和胃肠炭末推进率有何不同。


鼠号 体重(g)药物及剂量 给药途径 动物反应 炭末推进率(%)

A

B

C

五、实验结果 实验结果填入下表中

不同途径对药物效应的影响


六、思考讨论题

1、灌胃和腹腔注射给硫酸镁的效应有哪些不同?为什么?

2、本次实验结果对临床用药有何提示?


实验三 药物的协同作用和拮抗作用

[目的]

观察激动剂与拮抗剂之间的相互作用

[材料]

兔子1只,0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%盐酸肾上腺素注液,0.2%硝酸毛果芸香碱注射液


[方法]

1、取兔放于兔固定箱内固定,避免阳光直射眼睛,用毛剪剪去兔两眼睫毛,然后用瞳孔量尺测量瞳孔大小,连续三次,取平均值。

2、在兔左眼滴入0.2%毛果芸香碱3滴,滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而不起作用,再用右手滴入药液。15分钟后再测量瞳孔大小,连续三次,取平均值,并进行比较。


3、滴入毛果芸香碱20分钟后,分别在两眼滴入0.1%肾上腺素3滴,15分钟后测量两瞳孔大小,连续3次,取平均值并进行比较。

4、滴入肾上腺素15分钟后,分别于两眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴,15分钟后观察两眼瞳孔变化,并测量其大小,连续3次,并取平均值。


项  目

正 常

毛果芸香碱

肾上腺素

阿托品

瞳孔

大小

左 眼

右 眼

[记录]

[讨论题]

从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮

抗作用?


实验四 硝酸士的宁LD50的测定

一、毒理学实验方法

1.急性毒性实验:一次性大剂量给予药物后观察药物的作用;

2.慢性毒性实验:长期连续多次给予中、小剂量的药物,观察动物一些器官的慢性受损程度;

3.特殊毒性实验:致癌,致畸,致突变,过敏反应等。


二、LD50的测定

1.优点:方法简单易行,所用动物小白鼠价廉易得;

2.方法

⑴简化机率单位法:要求每组动物数相同,每组剂量呈等比关系,数据不能出现倒置;

⑵bliss法:计算准确

⑶改进寇氏法、目测法等。


三、具体实验(以硝酸士的宁为例)

[目的]通过实验学习测定LD50的方法、步骤和计算过程,了解急性毒性实验的常规方法。

[材料]

1.动物:昆明种小白鼠(体重18-22g,雌雄各半)

2.器材:注射器、鼠笼、天平

3.药品:0.008%硝酸士的宁溶液,苦味酸溶液。

硝酸士的宁是较强的致惊剂,它为脊髓抑制性神经递质甘氨酸受体的拮抗剂。它的作用快,中毒30min内即可导致动物惊厥,窒息死亡。


[实验方法]

1、预实验:取小白鼠8-10只,以2只为一组,分为4-5组,选择一系列剂量,分别按组腹腔注射士的宁溶液,观察出现的症状并记录死亡数,找出引起10%和90%死亡率剂量的所在范围。

在预备实验所获得的10%和90%致死量的范围内,选用几个剂量,0.10ml/l0g、0.12ml/l0g、0.14ml/10g,0.17ml/10g、0.20ml/10g、0.24ml/10g (剂量按等比级数排列,剂量间的比例一般用1:0.7-1:0.85),使一半组数反应率在10-50%,另一半组数反应率在50-90%之间,各组的动物数应相等,一般每组可用10-20只,动物的体重和性别要均匀分配。


2、正式实验

每组取12只小鼠,称重,标记,随机分为6个计量组,每组2只,分别i.p.0.008%硝酸士的宁0.10ml/l0g、0.12ml/l0g、0.14ml/10g,0.17ml/10g、0.20ml/10g、0.24ml/10g;

3、给药后观察并记录中毒症状,30分钟后记录各组的死亡小鼠数。


受试物剂量 对数剂量 动物数 死亡率 概率单位 LD50

(mg/kg) (X) (只) (%) (Y) 及置信限(95%)

[实验结果]

全班结果汇总,计算硝酸士的宁的LD50、LD50的可信限和可信限率。

(1)结果处理 实验资料按下表列出:

[讨论题]

什么叫LD50?测定LD50的意义和根据是什么?


实验五 利尿药对家兔尿量的影响 对数剂量 动物数 死亡率 概率单位

一、利尿药

1.定义:是作用于肾脏,增加电解质和水的排出,使尿量增多的药物。

2.分类:根据利尿药的作用部位,可分为高效、中效和低效利尿药

3.呋塞米为高效利尿药

⑴ 利尿作用特点

⑵ 作用机制

⑶ 临床应用

⑷ 不良反应


二、利尿药的实验方法 对数剂量 动物数 死亡率 概率单位

1.动物选择

可用大白鼠、小白鼠、家兔、猫和狗,其中以大白鼠较为常用。

2.实验方法

⑴ 代谢笼实验法:适用于大、小白鼠;

⑵ 直接自输尿管或膀胱收集尿液:适用于较大动物(家兔、猫、狗)。


三、具体实验 对数剂量 动物数 死亡率 概率单位

[目的]

1. 了解急性利尿的实验方法;

2. 观察速尿对麻醉兔的利尿作用。

[材料]

1. 动物:家兔

2. 器材:兔手术台、量筒、注射器、手术

器械

3. 药品:25%乌拉坦,1%速尿


[ 对数剂量 动物数 死亡率 概率单位 方法]

1.麻醉:取家兔一只,称重,耳缘i.v. 25%乌拉坦4ml/kg;

注意:注射速度要缓慢,随时观察角膜反射,反射消失即停止注射。

2.水负荷:麻醉后i.g.给自来水40ml/kg;

注意:避免灌至气管,将灌胃管外端浸入水中,若有气泡立即拔出。

3.手术:背位固定后剪去下腹部毛,于耻骨联合上方切开皮肤约4~5cm,并沿腹白线剪开肌肉,暴露膀胱,在少血管区做荷包缝合后行膀胱插管;

注意:膀胱插管需注满生理盐水


4. 对数剂量 动物数 死亡率 概率单位 记录正常尿量(ml/2分钟),连续记录10min;

5.耳缘i.v.1%速尿4mg/0.4ml/kg,记录给药后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20min尿量毫升数(ml/2分钟)。

[结果]

结果汇总,计算不同时间尿量的均值,以尿量毫升数(ml/2分钟)为纵坐标,给药后不同时间为横坐标作直方图。


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