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医学遗传学实验

医学遗传学实验. Department ：医学遗传学教研室 Address: 科研楼 B705 Telephone: 88208257. 整体实验安排 实验一 人类外周血染色体标本制备 实验二 人类染色体Ｇ带标本制备及观察 实验三 遗传病基因突变分析 （ SSCP ） 实验四 进行性肌营养不良症（ DMD ）基因检测 实验五 人类染色体核型分析. 第一次 实验内容. 1. 人类外周血染色体标本制备 2. 聚合酶链反应（ polymerase chain reaction ， PCR ） 加样 （实验三 ）.

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Presentation Transcript

  1. 医学遗传学实验 Department：医学遗传学教研室Address: 科研楼B705 Telephone: 88208257

  2. 整体实验安排 实验一 人类外周血染色体标本制备 实验二 人类染色体Ｇ带标本制备及观察 实验三 遗传病基因突变分析 （SSCP） 实验四进行性肌营养不良症（DMD）基因检测 实验五 人类染色体核型分析

  3. 第一次 实验内容 1.人类外周血染色体标本制备 2. 聚合酶链反应（polymerase chain reaction， PCR）加样（实验三 ）

  4. 1.人类外周血染色体标本制备 (P3) 两人一组，做一份血 !!! ● 实验目的： 初步掌握人类 染色体标本培 养制备的基本方法

  5. ● 实验原理： 正常情况下，外周血中的小淋巴细胞，几乎都处在G1期或G0期，外周血细胞中是没有分裂相的。

  6. 1960年，Nowell和Moorhead证实，外周血中的小淋巴细胞可以在植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA)和其它有丝分裂刺激剂的影响下，在形态上转变为淋巴母细胞，在培养中进行有丝分裂。 Moorhead P S, Nowell P C, Mellman W J, Battips DMA Hungerford D A. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood. Exp. Cell Res. 20:613-16, 1960

  7. 秋水仙素处理 低渗和固定，就可以迅速而又简便地获得体外生长的细胞群体和有丝分裂相。

  8. ●实验准备 实验材料：人外周血 (淋巴细胞) 实验器具：离心机、恒温培养箱、恒温水浴箱、 培养瓶、离心管、注射器和针头（61/2号）、吸管、量筒、火材、洒精灯、载玻片、染缸、试管架、玻璃铅笔、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。 药品和试剂：

  9. ● 实验步骤 采血 培养(37℃0.5℃,72h ） 秋水仙素处理（终止培养前２-３h） 离心 (1000rpm, 10min) 低渗处理 预固定,离心 再固定,再离心 再固定,再离心 再固定,再离心 制片

  10. 制片方法 （冷片） 每组制 3-4片

  11. PCR加样 实验三遗传病基因突变分析内容

  12. 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种体外由引物介导的特定DNA序列的扩增方法. 双蒸水 10*Buffer MgCl2 dNTPs（ATP/CTP/GTP/TTP） Primer（引物 ）R + F DNA 模板 Taq-DNA聚合酶 石蜡油 PCR 组分

  13. 变性：95℃,1min 退火：温度和引物有关 延伸 ：时间和待扩 增产 物长度有关 72 ℃ for Taq

  14. 循环参数设置 • Step 1 94C 5分钟 • Step 2 94C 30秒 • 59C 30秒 • 72C 30秒 • Step 3 72C 5分钟 30 cycles

  15. 两人一组，做一份PCR，样品加入0.2ml 的薄壁离心管中 双蒸水 18.5 l 10*Buffer 2.5 l MgCl2 2 l dNTPs 0.5 l Primer R + F 0.7 l DNA 模板 0.5 l （正常人or 病人） Taq-DNA聚合酶 0.3 l 石蜡油 1滴

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