Sottofamiglia

1. HERPESVIRIDAE Sottofamiglia Genere Tipo Herpes simplex virus tipo 1 Simplexvirus Alphaherpesvirinae Herpes simplex virus tipo 2 Varicellovirus Virus Varicella Zoster 150 nm Cytomegalovirus Citomegalovirus Betaherpesvirinae Herpesvirus umano 6 Roseolovirus Capside icosaedrico rivestito da involucro Herpesvirus umano 7 Epstein Barr Gammaherpesvirinae Lymphocrypto- virus virus Herpesvirus 8 associato al Rhadinovirus sarcoma di Kaposi

2. HSV-1: genoma DNAds lineare(150 Kb) con sequenze ripetute HERPESVIRUS Sequenze Uniche = U (L e S) Sequenze Ripetute = R (L e S; T e I)

3. CICLO DI REPLICAZIONE Geni a - IE (ICP0, ICP4, ICP27) Geni b - E Sintesi del DNA Geni g1 e g2 cascata di espressione genica

4. REPLICAZIONE DEL GENOMA DI HSV-1 La replicazione del DNA virale avviene nel nucleo per circolarizzazione e sintesi tramite cerchio rotante L’assemblaggio della particella virale avviene nel nucleo e l’acquisizione del tegumento esterno avviene per gemmazione sulla membrana nucleare proteine beta

5. Acyclovir • farmaci inattivi (prodrug) • Base della selettività: convertiti nella forma attiva dalla Timidina chinasi virale, e successivamente da chinasi cellulari • L’incorporaazione della forma trifosfato porta alla terminazione dell’allungamento di catena da parte della DNA polimerasi From DeClercq Nature Reviews Drug Discovery 1, 13 (2002) Blocco della replicazione del DNA virale

6. genoma di ADENOVIRUS ds DNA lineare (30-35 Kb) ITR = Inverted Terminal Repeat Terminal protein p55 5’ desossicitosina Trascrizione su entrambi I filamenti geni E (Early): E1A (transattivattore), E1B, E2A, E2B (DNA pol), E3, E4 (proteine enzimatiche) geni L (Late): L1, L2, L3, L4, L5 (proteine strutturali, 13 mRNA)

7. ADENOVIRUS l’elica di DNA dislocata forma un “panhandle” via “inverted terminal repeats” presenti al 3’ e 5’ Replicazione del DNA virale DNA polimerasi virale Replicazione asimmetrica: inizia al 3’ di uno dei filamenti Primer: proteina terminale p55 (sequenza ORI in ITR al 3’ del filamento stampo) associazione Pol--TP e …… sintesi del filamento complementare From Flint et al. Principles of Virology (2000), ASM Press

8. - il virus si assembla nel nucleo - il rilascio avviene per lisi della cellula ospite

9. POXVIRIDAE Genere: ORTHOPOXVIRUS - Virus del vaiolo umano - Virus vaccino* AVIPOXVIRUS ENTOMOPOXVIRUS LEPORIPOXVIRUS *modello di studio

10. NUCLEOIDE 1 molecola lineare DNAds (180-200 kpb) contiene circa 200 geni sequenze ITR (terminali ripetute invertite) legami fosfodiestere 3’-5’ scissi da endonucleasi virali durante la replicazione del genoma Proteine del NUCLEOIDE ( Strutturali (simil-istone) associate al DNA Enzimi: RNA polimerasi Poliadenilato sintetasi Metil-transferasi Guanilil-transferasi Trascrizione precoce nel core mRNA senza introni- assenza di splicing

11. - Eparan solfato - EGF (Epidermal Growth Factor) POXVIRUS - Endocitosi • Trascrizione precoce nel core di: • proteasiche rimuovono il core (uncoating) • DNA polimerasi virale • Trascrizione tardiva: • proteine strutturali - Uscita per lisi della cellula ospite

12. Dal 1979 il virus è completamente eradicato il vaiolo è debellato al livello mondiale In Italia la vaccinazione è stata sospesa nel 1977 e definitivamente abrogata dal 1981 Centers for Disease Control and Prevention (Atlanta, USA) Laboratorio di Ricerche Virologiche e Biotecnologiche (Novosibirsk, Russia)

13. POLYOMAVIRIDAE Capside icosaedrico nudo 45 nm 72 capsomeri formati da pentameri di VP1 +1 mol. VP2 o VP3 interna DNA ds circolare (5.2 kbp) legato a istoni cellulari (H2A, H2B, H3 e H4) Minicromosoma con 24 nucleosomi

14. Funzione delle Proteine precoci: proteine (T, t) regolatorie e multifunzionali T,t: reprime la sua stessa sintesi transazione della trascrizione da precoce a tardiva T,t: attiva l’espressione dei geni tardivi SV40 T,t: essenziale per la replicazionedel DNA virale • interazione con pRB e p53 (induzione della fase S nella cellula ospite ed inibizione dell’apoptosi cellulare tardive: proteine strutturali (VP1, VP2, VP3) trascritti primari da differenti ORF e modificati da splicing

15. PAPILLOMAVIRIDAE L1 L2 Capside icosaedrico nudo (55 nm) L1,L2 DNA ds circolare (8000 bp) legato a istoni cellulari Specie-specifici Tropismo per cellule dell’epitelio squamoso

16. trasmissione: diretta (sessuale) rilascio del virus strato granuloso e corneo incapsidamento strato spinoso e granuloso amplificazione del genoma insieme al DNA cellulare strato basale proliferazione cellulare (E6, E7) infezione produttiva in cellule epiteliali differenziate E4 DNA virale nuclei

17. Infezione produttiva Il DNA del virus si integra nel genoma della cellula ospite inattivazione del gene E2 CARCINOMA DELLA CERVICE Risposta immunitaria incremento della trascrizione di E6 e E7 REGRESSIONE

18. VLP quadrivalente L1 espresse in Baculovirus adiuvante :Sali di alluminio vaccini profilattici basati su HPV VLPs B Cervarix bivalente A L1espresse in Saccaromyces Cerevisiae Adiuvante :Sali di alluminio azione crociata verso HPV 45 e 31 Efficaci al 99% sulla protezione da condilomi Efficaci al 100% sull’incidenza di lesioni CIN2/ 3 pre-cancerose

19. virus EPATITE B Particella di DANE (42 nm) capside icosaedrico rivestito da involucro Genoma dsDNA circolare incompleto filamento negativo completo 3200 b filamento positivo incompleto 50-80% del filamento complementare

20. Regione preS/S i peplomeri di HBV Particella di DANE (42 nm) Large protein: Antigene Australia HBsAg

21. Nel citoplasma - retrotrascrizione dell’mRNA pre-genomico a DNA Hepadnaviridae Replicazione nucleare e citoplasmatica • Nel citoplasma • dopo la penetrazione il filamento positivo viene completato ad opera della DNA polimerasi virale Nel nucleo trascrizione di mRNA subgenomici trascrizione di mRNA pre-genomico

22. Replicazione di HBV attraverso un intermedio ad RNA fibronectina Apolipoproteina H 5 mRNA = 900 - 3500 b RNA 3500 b = pregenoma Trascrizione inversa

23. Vaccino contro HBV a subunità • antigene di superficie del virus dell Epatite B (HbSAg) • Prodotto in lievito (S. cerevisiae)