slide1 n.
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
Billy Harnaldo Putra / 20511305 Ridho Brilliantoro / 20512055 PowerPoint Presentation
Download Presentation
Billy Harnaldo Putra / 20511305 Ridho Brilliantoro / 20512055

play fullscreen
1 / 18
Download Presentation

Billy Harnaldo Putra / 20511305 Ridho Brilliantoro / 20512055 - PowerPoint PPT Presentation

hoshi
158 Views
Download Presentation

Billy Harnaldo Putra / 20511305 Ridho Brilliantoro / 20512055

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript

  1. Tugas Mata Kuliah Enzimologi Billy Harnaldo Putra / 20511305 RidhoBrilliantoro / 20512055

  2. Teknik Rekayasa dan Karakterisasi Kristal Enzim Methylaspartate Ammonia Lyase untuk Sintesis Asimetris Unnatural Asam Amino

  3. Latar Belakang TeknikRekayasa Enzim AktivitasKatalitik Enzim LebihBaik LebihBervariasi

  4. Latar Belakang Enzim MAL BiokatalisReaksiSintesisAsimetris IsolatMutan Q73A RekayasaEnzim MAL (wild-type) (Raj et al., 2012) IsolatMutan L843A

  5. Latar Belakang KarakterEnzim sisiaktifpengikatantunggal EnzimL843A EnzimQ73A substratnon-nativesenyawaamina (nukleofil) substratnon-nativederivat as. fumarat (elektrofil) SintesisUnnatural Asam Amino

  6. Metodologi Preparasi& skrininglibrary mutan Pemurnian, kristalisasi &penentuan struktur molekul Simulasi molecular docking Ekspresi enzim dan karakterisasi kinetik Identifikasidankonfigurasiprodukasam amino

  7. Aktivitas katalitik enzim Q73Asubstrat mesconate & variasi amina (nukleofilik) Hasil dan Pembahasan

  8. Hasil dan Pembahasan Karakteristikenzimmutan MAL Q73A mengkatalisisreaksipadasubstratnukleofilik (variasisenyawaamina –RNH2) denganmesconate. Aktivitaskatalitikenzimmutan MAL Q73A kemampuankonversimaksimumpadasubstratethoxyaminedenganpersentasekonversisebesar 99%

  9. Aktivitas katalitik wild-type dan enzim L384A substrat amonia dan variasi asam fumarat (elektrofilik) Hasil dan Pembahasan

  10. Parameter kinetika reaksi katalisis wild-type & mutan MAL Hasil dan Pembahasan • Grafikdiatasmenunjukkanhubunganpersentasekonversiprodukterhadapwaktureaksisintesispadakondisi optimum menggunakan: • katalis Q73A padasubstratmethylamine, cyclobutylaminedanethoxyamine • katalis L384A padasubstratfumarate, 2-hexyl fumaratedan 2-(benzyloxy) fumarate

  11. Parameter kinetik katalisis dengan enzim wild-type MAL dan Q73A pada substrat nukleofilik Hasil dan Pembahasan

  12. Hasil dan Pembahasan Mutan L384A menunjukkan aktivitas terhadap semua substrat yang diuji. Hal ini diperlihatkan oleh nilai Km rendah maka afinitasnya lebih tinggi. Selain itu, nilai kcat menjadi lebih besar untuk substrat dengan rantai alkil panjang (1d-1g) dan dibandingkan dengan rantai alkil pendek (1a-1c).

  13. Parameter kinetik katalisis dengan enzim wild-type MAL dan L384A pada substrat elektrofilik Hasil dan Pembahasan

  14. Hasil dan Pembahasan Mutan Q73A menunjukkan tingkat katalitik tertinggi dalam penambahan metilamin pada mesaconate dan tingkat katalitik terendah dalam penambahan metilamin pada cyclobutylamin. Perbandingan nilai kcat/Km menunjukkan bahwa mutan Q73A 140 kali lipat lebih efisien dalam penambahan metilamin dibandingkan dengan wild-type MAL.

  15. Analisis Docking Hasil dan Pembahasan Analisis situs aktif dari mutan Q73A dan L384A yang dimodelkan kembali untuk mengakomodasi substrat baru Perbandingan struktur Q73A dan L384A serta wild type MAL Hasil ini menunjukkan bahwa substrat diperluas spektrum mutan Q73A dan L384A dikarenakan dengan penggantian situs residu aktif yang besar dengan yang lebih kecil, sehingga situs aktif diperbesar & dapat mengakomodasi substrat baru Perbandingan wild-type MAL (a), Mutan Gln73Ala (b), Mutan Leu384Ala (c)

  16. Hasil dan Pembahasan Situs aktif dari Q73A dan Mutan L384A dapat menampung substrat yang lebih besar daripada situs aktif wild type MAL, kami melakukan komparatif dengan simulasi docking. Molecular docking substrat pada sisi aktif wild-type MAL dan 2 Mutan MAL

  17. Simpulan Rekayasa enzim melalui proses mutasi genetik dapat menghasilkan enzim mutan yang memiliki aktivitas katalitik dan sebaran substrat yang bervariasi, baik pada substrat nukleofilik maupun elektrofilik. Enzim MAL hasil mutasi dapat diaplikasikan dalam sintesis asimetris unnatural asam amino.