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药物分析

药物分析. 甄 汉 深 注：甄 --- 音 “ 真 ” zhen. 普通高等教育 “ 十五 ” 国家级规划教材 药物分析 供药学类专业用 第五版 刘文英 主编 人民卫生出社 2003 年 7 月. 普通高等教育 “ 十五 ” 国家级规划教材 中药制剂分析 供中药类专业用 中国中医药出社 2003 年１月. 第三章 药物的杂质检查 药物的 杂质 是指 药物中存在的无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质 。 第一节 概 述 一、药物的纯度要求 药物的纯度 即纯净程度，是反映药品质量的一项重要指标。

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  1. 药物分析 甄 汉 深 注：甄---音“真”zhen

  2. 普通高等教育“十五”国家级规划教材 药物分析 供药学类专业用 第五版 刘文英 主编 人民卫生出社 2003年7月

  3. 普通高等教育“十五”国家级规划教材中药制剂分析普通高等教育“十五”国家级规划教材中药制剂分析 供中药类专业用 中国中医药出社 2003年１月

  4. 第三章 药物的杂质检查 药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。 第一节 概 述 一、药物的纯度要求 药物的纯度即纯净程度，是反映药品质量的一项重要指标。 对药物质量的评价 ： 三效：高效、长效、速效; 三小：毒性、用量、副作用小。

  5. 药物的纯度 • 通常可以从 （１）药物的结构，（２）外观性状， （３）理化常数，（４）杂质检查，（５）含量测定等方面作为一个有联系的整体来表明和评定药物的纯度。所以在药物的质量标准中就规定药物的纯度要求。 但是杂质多了：１）药物的理化常数变化 ２）外观性状变化 ３）稳定性下降 ４）含量下降、活性下降 ５）毒副作用上升

  6. 二、杂质的来源和种类 （一）杂质的来源 1、生产过程中引入的杂质：来源 于制备——原料、溶剂 、试剂、中间产品、副产品、器械等等。 2、贮存过程中引入的杂质：来源于外界条件——包装、运输、保管不妥（受光线、温度、空气、微生物的影响等等）。

  7. （二） 杂质的种类 药物中的杂质来源可分为一般杂质和特殊杂质。 一般杂质是指在自然界分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。 特殊杂质是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。容许量。

  8. 三、杂质的限量的检查 （一）、没有必要把药物中的杂质完全除去从杂质的来源考虑，完全除去药物中的杂质，即不可能也没有必要。 （二）、药物中杂质允许最大限度的原则： 在不影响药物的疗效和不发生毒性的前提下，允许药物中存在有一定量的杂质。这一允许量被称为杂质的限量。 杂质限量—— 指药物中所含杂质的最大容许量。 药物中杂质的检查多数采用限量检查（limit test ），该检查不要求测定杂质的含量，而只检查其是否超过限量。 由于以上的原因， 因此，药物的杂质 检查又称纯度检查，限度（限量）检查。

  9. B、取一定量与 被检杂质相同 同上处理 的纯物质或其他对照品标准液 ———— 结果 （色或浑浊 ） 药物的限量检查的方法：比色法或比浊法 A、取一定量供试品—————— 结果 （产生色或浑浊） 依法处理 然后比较A和B： 当A> B时：本项不合格。 当A< B 时： 本项合格。 当 A = B时： 重做。

  10. 杂质限量的计算： 杂质限量（L）= ——————— × 100% 杂质限量= ×100% L = ————— × 100% 杂质的最大允许量 供试品量 标准溶液的体积（V）×标准溶液的浓度（C） 供试品的量（S） C V S 杂质的限量 通常用百分之几 (%) 或百万分之几 ( 10-6 ) 来表示。 1 μg = 10-6g = 10-3mg

  11. 应用示例一 对乙酰氨基酚中氯化物检查 取对乙酰氨基酚2.0g ，加水100ml时，加热溶解后冷却，滤 过，取滤液25ml ，依法检查氯化物（中国药典，附录VIIIA）， 所发生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml 相当于10µg的cl-） 制成的对照液比较，不得更浓。问氯化物的限量是多少？ C·V 0.01 × 5 L = ×100% = 0.01% × 100% = S 25 2 ×103 × 100

  12. 第二节     一般杂质的检查方法 一、 氯化物的检查法 1、原理：中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定标准氯化钠溶液在相同的条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。 Cl- AgCl （微量时浑浊 ） 稀 HNO3 AgNO3

  13. 2、方法：比浊法 A、取一定量供试品 产生AgCl (浑浊） 依法处理 稀HNO3 AgNO3 同上处理 B、取一定量标准NaCI液 同上 （标准NaCI浓度C= 0.01 mg CI - /ml） （如 A 浊度比B小则本项合格）。

  14. 3、注意点： （1）加HNO 3目的； A、AgCI 不溶于HNO 3可在HNO 3中 产生最好 的乳化浑浊； B、加速 AgCI 的 产生； C、防止产生Ag2 0 ，Ag3PO4 , Ag2CO3因为 这些溶于HNO 3这样就可以防止CO 32 -， OH -，PO43 -干扰。 （2）加HNO 3 的 量要合适 （3）CI -浓度 （4）温度

  15. （5）严格按照操作顺序进行 （6）有干扰物必须消除。 A、如：（有色） 取两分等量供试品： a、 一份做供试液（A管）——— 依法检查 b、另一份 AgCI滤液（B 管加入 规定量的标准NaCI溶液作为对照管）。 加稀 HNO 3 过滤 AgNO3 B、用滤纸过滤时，滤纸中如含有氯化物，可预先用含 有硝酸的水溶液洗净后使用。 C、Br -、I -与AgNO3作用均能生成Ag（卤化银）； 硫氰酸盐能与AgNO 3作用生成硫氰酸银 ， 以上均有干扰。因此，必须排除。

  16. D、存在于有机物结构中的氯化物检查。 方法： 必须 使结状态的氯变为游离状态的氯。 如 有机破坏的方法： 某些药物含有有机氯杂质可以采用本法。 Cl Cl- （7）、溶于水的有机药物（如有机酸碱金属盐）按药典附录方法直接检查氯化物。不溶于水的有机药物，多数加水振摇，使所含氯化物溶解，滤过，取滤液依法检查（也有用丙酮溶解后检查的）。

  17. 二、 硫酸盐检查法1、原理：药物中存在的微量硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性介质中 生 成硫酸钡白色浑浊，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件生 成的浑浊比较，浊度不得更大。 SO42 -BaSO 4（SO 42 -微量时浑浊） HCl 25% BaCI 2 2、方法：比浊法 依法处理 A、供试品一定量 产生BaSO4的浑浊 HCl，25% BaCI 2 同上 B、取一定量K 2 SO 4标准液 同上

  18. 3、注意点： （1）加HCI 要 适量,防止BaCO 3 ,Ba 3（PO 4）2等 的生成。（2）本法适宜比浊浓度为0.1~0.5 mgSO4 2- /50 ml。（3）BaCl2试液浓度在10% ~25% 范围内。（4）供试液如需滤过，应先用盐酸使成酸性的蒸馏水洗净滤纸中硫酸盐。（5）有色供试品溶液的处理及其他注意事项与氯化物检查法相同。

  19. 三、铁盐检查法： 1 、原理 铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色比较，颜色不得更深。 （一）硫氰酸盐法 H+ 3 - Fe3+ + 6 SCN- [ Fe（SCN）6］ ２、方法：比色法 移至50mI纳氏 稀HCI 4mI （１）供试品 ＋水２５mI 比色管 过硫酸铵50mg 加水稀释或约35mI后 加硫氰酸铵溶 液（30 100）3 mI，再加水适量稀释成 50mI，摇均 如显色与标准溶液比较。 按上法 （2）标准铁溶液 处理 显色

  20. 3）注意点： 1）加HCI防止铁盐水解 2）加过硫酸铵 [（NH4）2S2O8] 氧化剂，氧化供试品中 F2+生成Fe3+; 防止光线使硫氰酸铁还原或分解退色。3）有干扰要排除。 （二） 巯基醋酸法 （“巯”音“球”） BP采用巯氰醋酸（mercaptoacetic acid）法检查药物中铁盐。 原理 硫氰醋酸还原Fe 3＋为Fe 2＋ ，在氨碱性溶液中进一步与Fe2＋作用生成红色配位离子，与一定量标准铁溶液经同法处理后产生的颜色进行比较，以限制铁的量。

  21. 2Fe3＋ ＋2HSCH2COOH 2Fe2＋＋SCH2COOH ＋2H＋ SCH2COOH 2Fe3＋ ＋2HSCH2COOH Fe（SCH2COOH）2＋H＋ Fe（SCH2COOH）2 [Fe（SCH2COO）2]2－ ＋2H20 2OH- 红色

  22. 四、重金属检查法： 1、原理 H+ （1）Pb2+ PbS （量少时，呈色 黄 黑） H2S （2）、凡溶于碱不溶于稀酸的药物，如磺胺类，巴比妥类等，均在碱性溶液中以硫化钠试液为显色剂 。 OH- Pb2+ PbS  Na2S （3）含芳环或杂环的有机药物，先进行结构破坏，使共价的铅变为游离的铅，再采取上述的（1）或者（2）法检查。

  23. ２.方法 第一法 硫代乙酰胺法 原理 硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈现颜色比较，颜色不得更深。 CH3CSNH2 ＋H20 CH3CONH2＋H2S H2S ＋Pb2＋PbS ＋2H＋ pH3.5

  24. 操作方法（比色法）： 依法处理 A、一定量供试品 PbS HAC、H2S 同上 B、取一定标准铅液 PbS Pb(NO3)2 注意点： pH：pH3.5 在此条件下沉淀完全 ；不溶于HAC的检品在OH- 中进行。

  25. 第二法 适用于在水、乙醇中难溶，或能与金属离子形成配位化合物的有机药物。 原理 将供试品炽灼破坏后 ，加硝酸加热处理，使有机物分解，破坏完全后，再按第一法进行检查。 第三法 适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性水溶液的药物，如磺胺类、巴比妥类药物等。 原理 在碱性介质中，以硫化钠为显色剂，使Pb2＋ 生 成PbS 微粒的混悬液，与一定标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较不得更深。

  26. 注意点：A、加HNO3目的： 水解 盐 + H 2 O酸 + 碱 中和 B、临用前配制：溶液愈释愈易水解，所以临用前稀释。 （3）排除干扰物质 （4）含芳环或杂环有机物，按药典方法先炽灼破环使 与有机物分子结合的重金属游离，再依法检查。 （5）微孔滤膜过滤法 。

  27. 第四法 微孔滤膜法。 适用于重金属限量低的药物。（含2～5μg重金属）的检查。 。 原理 使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，比较供试品和一定量的标准铅溶液同法处理后产生的色斑深浅，确定重金属是否超过限量 。 试验装置 　　　　　　　　图见下页

  28. 五、  砷盐检查法 （一）古蔡（Gutzeit）氏法 原理 金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，颜色不得更深。

  29. Zn + HCI 原理： ASO33 -（亚砷酸盐） ASH3 ———— AsH（HgBr）2 黄色 As（HgBr）3 棕色 HgBr2试纸 新生态H2 砷斑：

  30. As3＋ ＋3Zn ＋3H＋3Zn2＋ ＋AsH3 AsO3 - ＋3Zn＋9H＋ 3Zn2+ ＋3H2O＋ AsH3 AsH3＋ 3HgBr2 3HBr ＋ As（HgBr）3 （黄色） 2As（HgBr）3＋AsH3 3 AsH（HgBr）2（棕色） As（HgBr）3 ＋AsH3 3HBr ＋ As2 Hg3 （棕黑色）

  31. 装置:

  32. 方法 注意事项 供试品处理 含锑药物，如葡萄糖酸锑钠，用古蔡氏法检查时， 锑盐也可被还原为锑化氢，与溴化汞试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检出： SbH3 ＋ HgBr2 SbH2（HgBr）＋HBr 可改用白道田夫（Betterdorff）法检查砷盐。方法原理是氯化亚锡在盐酸中将砷盐还原成棕褐色的胶态砷，与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色比较，可控制

  33. 供试品中的砷量： 2As3＋ ＋3SnCl2＋6HCl 2As ＋3 SnCl4＋6H＋ 此法的反应灵敏度以As2O3计20µg。少量二氯化汞的加入，能提高反应灵敏度达20µg/10ml。 （二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（silve diethyldithiocarbamate） [简称Ag （DDC）法] 本法为中国药典和USP（24）收载的方法。不仅可用于 砷盐的限量检查，也可用作微量砷盐的含量测定。 原理 金属锌与酸作用，产生新生态的氢，与微量砷盐反应，生成具有挥发性的砷化氢； 砷化氢遇二乙基二硫代氨基甲酸银，

  34. 使其还原产生红色的胶态银，用目视比色法或在510nm 波长处测定吸收度，再以一定量标准砷溶液用同法处 理后得到的有色溶液进行比较。 AsH3＋6Ag（DDC）＋3 ·HDDC As（DDC）3 ＋6Ag ＋3

  35. 六、溶液颜色检查法 有色杂质可能在药物的生产过程中引入，也可能由贮藏 过程产生。对溶液颜色进行检查，可控制药物中有色杂质的 含量。中国药典采用的检查方法有三种。 （一）目视比色法 （二）分光光度法 （三）色差法 原理 方法

  36. 七、易炭化物检查法 易炭化物检查法是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化 而呈色的微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，用硫酸 呈色的方法可以简便地控制他们的总量。 方法 注意事项 八、溶液澄清度检查法 澄清度可反应药物溶液中的微量不溶性杂质的存在情 况，在一定的程度上可反映药品的质量和生产的工艺水平， 对于供制备注射液用原料药物的纯度检查尤为重要。

  37. 原理 乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与 肼缩合生成不溶于水的甲醛白色浑浊。 （CH2）6N4＋6H2O 6HCHO＋4NHS HCHO＋H2N NH2 H2C = N NH2 ＋H2O 方法 注意事项

  38. 九、炽灼残渣检查法 中国药典和美国药典对炽灼残渣（residue on ignition ） 的定义：有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后， 高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。英国药 典称去其为硫酸灰分（sulphated ash）。炽灼残渣检查用 于控制有机药物和挥发性无机药物中存在的非挥发性无机杂质。 方法 注意事项

  39. 十、干燥失重测定法 干燥失重系指药品在规定的条件下，经干燥后所减少 的量，以百分率表示。干燥失重的量应恒重。由干燥至恒 重的第二次及各次称重均应在规定的条件下继续干燥1h后 进行。 （一）常压恒温干燥法 本法适用于受热较稳定的药物。 方法 注意事项

  40. （二）干燥剂干燥法 本法适用于受热分解、或易于挥发的供试品。 　　　　　干燥剂：（1）硅胶 ( 吸水力大于硫酸, 使 用方便, 价廉, 变色, 可以反复使用） （2）硫酸（吸水次之，较便宜） （3）五氧化二磷（吸水力强，但价高） （三）减压干燥法 本法适用于熔点低、受热不稳定或难驱除水分的药物。 　　原理 　　方法 　　注意事项

  41. （四）热分析法 在程序控制温度的情况下，测定物质的物理、 化学变化与温度关系的一类仪器分析方法称为热分 析法。该方法具有样品用量少，灵敏、快速等优点， 在药物分析中广泛用于物质的熔点、多晶型、纯度、 溶剂化物、水分及热解产物的测定。根据测定物理 量的不同，热分析法又有不同的名称。药物分析中 常用的热分析方法是：热重分析法、差示热分析法、 差示扫描量热法。

  42. 1．热重分析法（thermogravimetric analysis，TGA） 2．差示热分析法（differential thermal analysis ） 3．差示扫描量热法（differential scanning calorimetry，DSC）

  43. 十一、 有机溶剂残留量测定 中国药典附录收载的残留溶剂测定法有溶液直接进样法和顶空进样法两种。 第一法 溶液直接进样法 方法 注意事项 第二法 顶空进样法 方法 注意事项 应用示例一 壬苯醇醚中二氧六环检查 应用示例二 秋水仙碱中氯仿和醋酸乙酯的检查

  44. 第三节 特殊杂质检查方法 一、利用药物和杂质在物理性质上的差异 （一）臭味及挥发性的差异 （二）颜色的差异 （三）溶解行为的差异 （四）旋光性质的差异 （五）对光吸收性质的差异 1．紫外分光光度法 2．原子吸收分光光度法 3．红外分光光度法 4．荧光分析法

  45. （六）吸附或分配性质的差异 1．薄层色谱法 2． 纸色谱法 3．高效液相色谱法 4．气相色谱法 二、利用药物和杂质在化学性质上的差异 （一）酸碱性的差异 1．规定消耗滴定液的体积 2．PH值法 3．指试剂法

  46. （二）氧化还原性的差异 （三） 杂质与一定试剂反应产生沉淀 （四）杂质与一定试剂反应产生颜色 （五）杂质与一定试剂反应产生气体 （六）药物经有机破坏后检查杂质 1．硒检查法 2．氟检查法

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