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胶乳凝集试验 —— RF 测定

胶乳凝集试验 —— RF 测定. 实验原理. 以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的 间接凝集试验 ： 聚苯乙烯颗粒具有很强的吸附蛋白质的能力，借此将抗原（变性 IgG ）与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与待测标本中的抗体（ RF ）发生凝集反应。. RF 为抗变性 IgG 的抗体，因此本实验使用的是人 IgG 致敏的聚苯乙烯颗粒。. 试剂和器材. RF 检测试剂（商品化试剂） RF 阴性血清和阳性血清（试剂盒自带） 黑色反应板、滴管、搅拌棒等. 操作方法. 在黑色反应板上取 3 格，用滴管分别加待测血清、阳性血清和阴性血清各 1 滴，然后每格加入 1 滴致敏胶乳颗粒试剂。

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胶乳凝集试验 —— RF 测定

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Presentation Transcript

  1. 胶乳凝集试验——RF测定

  2. 实验原理 以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验： 聚苯乙烯颗粒具有很强的吸附蛋白质的能力，借此将抗原（变性IgG）与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与待测标本中的抗体（RF）发生凝集反应。

  3. RF为抗变性IgG的抗体，因此本实验使用的是人IgG致敏的聚苯乙烯颗粒。RF为抗变性IgG的抗体，因此本实验使用的是人IgG致敏的聚苯乙烯颗粒。

  4. 试剂和器材 • RF检测试剂（商品化试剂） • RF阴性血清和阳性血清（试剂盒自带） • 黑色反应板、滴管、搅拌棒等

  5. 操作方法 • 在黑色反应板上取3格，用滴管分别加待测血清、阳性血清和阴性血清各1滴，然后每格加入1滴致敏胶乳颗粒试剂。 • 用搅拌棒充分混匀后，连续摇动2~3min后与对照比较，观察结果。

  6. 结果判断 • 胶乳颗粒凝集且液体澄清者为阳性， 胶乳颗粒不凝集仍保持均匀胶乳状者为阴性； • 首先观察阳性血清和阴性血清的反应结果，若前者为阳性反应后者为阴性反应，说明试剂有效； • 然后再观察待测样品的反应情况，并判断阴阳性。

  7. 方法学评价 • 该试验方法简单、快速、特异性强、结果清晰易观察判断。 • 观察时应注意排除非特异性凝集反应。 • 如何进行半定量分析？

  8. CIC测定

  9. 实验原理： PEG沉淀法 聚乙二醇（PEG），分子量6000，具有较强的脱水作用，可引起蛋白质沉淀，沉淀具有选择性且对蛋白质生物活性无影响。是免疫浊度测定技术中常用的增浊剂。

  10. PEG沉淀蛋白质的选择性与其浓度相关：2%PEG只能沉淀大分子，PEG沉淀蛋白质的选择性与其浓度相关：2%PEG只能沉淀大分子， 4%PEG能沉淀较小分子的循环免疫复合物 大于5%PEG，选择性沉淀特性消失。 在PH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的PEG浓度越小。

  11. 分离血清免疫复合物一般采用最终浓度为3%~4%PEG。分离血清免疫复合物一般采用最终浓度为3%~4%PEG。 • 血清中加入最终浓度约为3.5%的PEG后，其浊度与血清中免疫复合物含量相关，用分光光度计测定其A值，代表免疫复合物相对含量。

  12. 试剂和器材 • 试剂1：0.1mol/L PH8.6硼酸缓冲液 试剂2：3.75%PEG-硼酸缓冲液 （已备好） • 仪器：721分光光度计

  13. 操作方法 • 加样：对每一份标本，取两试管按下表操作

  14. 操作方法 • 将以上反应管充分混匀，置室温1小时。 • 用721分光光度计在460nm波长下混匀测定OD值。 • 关机，清洁仪器，盖上布罩。

  15. 正常参考值：OD<0.15 • 结果易受多种大分子蛋白质的干扰，特异性差。 • CIC的检出可以为多种与自身免疫相关疾病提供辅助诊断诊断指标，但由于方法上的问题，其测定结果尚不能作为诊断疾病的敏感可靠的指标。

  16. 要 求 • 实验结束后安排同学打扫卫生。 • 实验报告与单扩实验分开写，下周上课交报告。

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