实验十 临床模拟标本的 细菌学检测

1. 实验十 临床模拟标本的细菌学检测

2. 病原菌的检查程序 标本 直接涂片镜检 初步诊断 分离培养 生化试验 血清学试验 明确诊断 动物试验 药物敏感试验 分子生物学技术 其他检测技术

3. 常用染色方法 • 革兰染色 • 抗酸染色

4. 革兰染色 • 试剂：结晶紫染液（初染剂）； 卢戈氏碘液（媒染剂）； 95%乙醇溶液（脱色液）； 稀释石炭酸复红液（复染液） • 染色步骤：初染 媒染 脱色 复染 • 染色结果：革兰阳性菌呈紫色或紫红色； 革兰阴性菌呈红色

5. 抗酸染色 • 试剂： 石炭酸复红； 3%盐酸酒精； 碱性美蓝 • 染色步骤：初染 脱色 复染 • 染色结果：抗酸杆菌呈红色； 非抗酸杆菌呈蓝色

6. 常用培养基 • 增菌：血平板、巧克力平板、碱性胨水等 • 选择性：MAC、EMB、SS、HE等 • 鉴别：KIA、MIU等

7. 菌落形态观察 • 形态特征： —大小、形状 —表面、边缘 —颜色、透明度 —粘度 • 溶血现象：α溶血 、β溶血 、γ溶血 • 色素 ：脂溶性、水溶性 • 气味

8. 纯菌落 涂片染色，结合菌落形态 革兰阴性杆菌 革兰阳性球菌 氧化酶触酶 - + + - 肠杆菌科 非发酵菌 葡萄球菌属 链球菌属

9. 常用生化试验 • 碳水化合物的代谢试验 • 蛋白质和氨基酸的代谢试验 • 碳源和氮源利用试验 • 各种酶类试验 • 抑菌试验

10. 碳水化合物的代谢试验 • 糖（醇、苷）类发酵试验：能分解糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应；若能产气时，培养基可出现开裂气泡等现象；肠杆菌科尤为重要 • 氧化-发酵试验（O/F）：肠杆菌科与非发酵菌的鉴别；葡萄球菌与微球菌的鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型 • ONPG（β半乳糖苷酶试验）：主要用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定，迅速及迟缓发酵乳糖的细菌为阳性，不发酵乳糖的细菌为阴性。 • 七叶苷水解试验：D群链球菌为阳性 • 甲基红试验：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸杆菌等为阳性； • V-P试验： 肠杆菌属阳性 • 葡萄糖酸盐试验：用于肠杆菌科分类

11. 蛋白质和氨基酸的代谢试验 1.明胶液化试验：多数假单胞菌能液化明胶，肠杆菌科细菌如沙雷菌、变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶 2.吲哚（叮基质）试验:肠杆菌科细菌的鉴定；大肠杆菌阳性 3.硫化氢试验:沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属阳性 4.尿素分解试验：变形杆菌、摩根氏、雷氏普罗维登氏、克雷伯氏为阳性 5.苯丙氨酸脱氨酶（TDA）试验：肠杆菌科变形杆菌、普罗维登氏菌、摩根氏菌阳性 6.氨基酸脱羧酶试验：肠杆菌科细菌的鉴定

12. 碳源和氮源利用试验 1.枸橼酸盐利用试验： 克雷伯菌属、沙门菌属常为阳性 2.丙二酸盐利用试验: 肠杆菌科属间鉴别

13. 各种酶类试验 1.氧化酶试验：肠杆菌科细菌与假单胞菌的区别，前者阴性，后者多阳性；奈瑟菌属、莫拉菌属也为阳性 2.触酶试验：用于革兰氏阳性球菌的鉴别，葡萄球菌和微球菌为阳性，链球菌和肠球菌为阴性，肠球菌多假阳性 3.硝酸盐还原试验：肠杆菌科为阳性；铜绿、嗜麦芽能产生氮气；链球菌肠球菌阴性，葡萄球菌阳性 4. DNA酶试验：金黄色葡萄球菌、变形杆菌阳性 5.凝固酶试验：致病性葡萄球菌；金黄色葡萄球菌多阳性 6. CAMP试验：B群链球菌阳性 7.胆汁溶菌酶试验：肺炎链球菌阳性 8.脂酶、卵磷脂酶试验：主要用于厌氧菌的鉴定;产气夹膜梭菌卵磷脂酶阳性

14. 抑菌试验 1.O/129试验：弧菌、邻单胞菌敏感；气单胞菌属耐药 2.杆菌肽试验：A群链球菌敏感 3.奥普托欣Optochin试验：肺炎链球菌对Optochin敏感 4.新生霉素敏感试验：区别表皮葡萄球菌与腐生葡萄球菌

15. 氢氧化钾拉丝试验 主要用于革兰阴性菌与易脱色的革兰阳性菌的鉴别。 大多数革兰阴性菌于5~10s内出现阳性反应，有的则需30~45s，假单胞菌、无色杆菌、黄杆菌、产碱杆菌、莫拉菌等大多数在10s内呈阳性，不动杆菌、莫拉菌反应较慢，大多数菌株在60s内出现阳性，而革兰阳性菌在60s以后仍为阴性。

16. 今天的实验内容 1.临床模拟标本的鉴定 （简单介绍，然后操作）