检测系统定量项目性能评价 傅应裕

1. 浙江大学医学院附属第二医院检验科 检测系统定量项目性能评价傅应裕

2. 检测系统（Test System）？ 人 检测系统： 包括测量过程的所有因素，如仪器、样本、人员、试剂、辅助材料和操作等，也包括样本类型、测试温度、湿度等。 机 料 法 环

3. 评价：确认&验证 • 确认（Validation） 方法建立者或者实验室修改了CFDA批准的方法。 Validation - A defined process by which a laboratory confirms that a laboratory developed or modified FDA-cleared/approved test performs as intended or claimed. (CAPAll Common Checklist) • 验证（Verification ） CFDA批准的方法，实验室未做修改，严格按照供应商说明书执行。 Verification - The process by which a laboratory determines that an FDA-cleared/approved test performs according to the specifications set forth by the manufacturer. (CAPAll Common Checklist)

4. 样本处理流程 样本或试剂用量 检测系统 样本或试剂稀释倍数 校准品（厂家有赋值说明除外） 反应步骤 何为修改？ 底物或结合物 孵育温度或时间 样本类型 如血浆→尿液 预期用途：筛查改诊断，定性改定量 等等……

5. 纲要 1 为什么要做（Why）？ 2 要做些什么（What）？ 什么时候做（When）？ 3 谁来做（Who）？ 4 5 怎么做（How）？

6. 为什么要做（Why）？ 病人安全需要 1 • 国家法律、法规和行业规范要求： • 《医疗机构临床实验室管理办法》(2006年卫生部)，第三十条．医疗机构临床实验室应当将尚未开展室间质量评价的临床检验项目与其他临床实验室的同类项目进行比对，或者用其他方法验证其结果的可靠性。临床检验项目比对有困难时，医疗机构临床实验室应当对方法学进行评价，包括准确性、精密度、特异性、线性范围、稳定性、抗干扰性、参考范围等，并有质量保证措施。 • 《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求意见稿）》（2009年国家食品药品监督管理局医疗器械技术审评中心） 2 认可准则、认可条款要求： CNAS-CL02 ：2008 5.5.2，实验室应只用确认过的程序证实所用检验程序适合其预期用途，证实应尽量充分以满足给定用途或满足某领域应用的需求。实验室应记录证实所得的结果及使用的程序。 3

7. 美国Clia 2 要做些什么（What）？ • 验证： • 准确度 • 精密度 • 可报告范围 • 参考区间（相似的人口统计学和地理学） • 确认 除上述参数外，还需： • 干扰 • 最低检测限 • 建立参考区间 出自：Clia88-CFR-2012（493.1253）

8. CAP 2 要做些什么（What）？

9. ISO15189 2 要做些什么（What）？ 验证或确认包括，但不限于以下内容： • 正确度 • 精密度 • 分析测量范围（线性范围） • 可报告范围 • 检测限 • 参考区间 确认比验证费时、费力和费钱

10. 什么时候做（When）？ 3 新增/ 更改项目 性能 评价 病人 检测 准备 • 新增项目 • 检测系统更改 • 某项目停止检测一段时间，重新检测病人 • 仪器挪动位置 • 关键部位维修 • 编写相应操作规程与评价方案 • 工作人员熟悉规程与评价方案 • 日常检测，出具报告 • 确认或验证 www.themegallery.com

11. 谁来做（Who）？ 4 实验室工作人员 • 方案确立： • 包括标本选择 • 测定重复次数 • 时间跨度…… • 方案实施 • 数据处理 • 评价结论 学习机会： 熟练新系统 更新新知识

12. 精密度 5 怎么做（How）？ 谁来做（Who）？ 4 • 依据来源：CLSI（临床实验室标准化协会） 网址：http://www.clsi.org • 标准：

13. 精密度-EP5 A2方案 • 标本来源： • 病人血清/血浆（来源：实验室）； • 基质合适的商用质控品。 • 浓度： • 高低2个浓度（医学决定水平）； • 3浓度（2个浓度的精密度有显著差异时）。 • 测定次数：2次/批； • 测定天数：≥20天； • 离群点数据：以最初的5天数据为初步精密度（SD）,≥4SD的剔除，并补足。

14. 精密度-EP5 A2举例

15. 精密度-EP5 A2举例 • 批内不精密度： （I：天数） • 室内总不精密度： （T：总自由度）

16. 精密度-EP5 A2举例 允许SD数值为厂家声明或者该方法的质量要求指标。

17. 精密度-EP15 方案（验证） • 标本：2个浓度水平； • 测定次数： 3次/批； • 测定时长：5天； • 离群点剔除：质控失败或操作失败的数据剔除，并补足； • 供应商声明：若供应商指出其精密度是在多个校准周期得出的，则实验方案应类似。

18. 精密度- EP15应用 数据记录与统计

19. 精密度- EP15 A2应用 数据记录与统计 根据υ值和浓度水平（2个水平）查卡方表得C值。 sr与sl分别≤相应的验证值：验证通过

20. 精密度- Westgard • 标本来源： • 质控物（基质与临床标本相似） • 标准液 • 病人标本混合物 • 浓度：高低2个水平（考虑医学决定值） • 试验次数与周期： • 批内≥20次 • 日间≥20天 • 数据处理：均值、标准差和变异系数

21. 精密度- Westgard举例 批内不精密度要求 ≤1/4TEa 日间不精密度要求 ≤1/3TEa

22. 正确度-EP15（方案1：患者样本） 方法变更最常用的试验方案 前提：方法具有可比性，厂家有偏倚声明 • 标本来源：新鲜患者样本 • 浓度：覆盖可报告范围 • 份数：20份 • 时间：3~4天，平均5~7份每天 • 数据处理：配对样本t-检验 • 结果判断

23. 正确度-举例

24. 正确度-结果判断 • 根据所得数据得到 以及两组方法的平均偏倚（b） • 验证结果如下时： ≤b≤ 验证通过 （β为厂家声明，n为标本份数，t查表所得）

25. 正确度-EP15（方案2：参考品） • 标本来源： • 有证参考物质（CRM） • 能力验证（正确度计划）样品 • 室间质评同组（Peer group）均值（≥10家） • 第三方商品化定值物质 • 浓度：高低2个浓度（可报告范围内，且需考虑医学决定水平） • 时间：3~5天，双份测定 • 数据处理 • 结果判断 定值

26. 正确度-举例

27. 检测限 • 名称： • 检测限（limit of detection） • 检测低限（lower limit of detection） • 分析灵敏度（analytical sensitivity） • 功能灵敏度（functional sensitivity ） • CLSI EP17： • 空白限（Limit of Blank， LoB）：一定概率下，测量空白样本所得到的测量结果。 • 检出限（Limit of Detection， LoD）：检测方法可检测出的最低被测物的浓度。 • 定量限（Limit of Quantitation， LoQ）：检测系统能够得到可靠结果的被测物最低浓度。在规定实验条件下，其正确度与精密度可接受。

28. 检测限-EP17 LoB＜LoD≤LoQ

29. 检测限-EP17 • LoB： • 实验前：同批试剂、校准批号； • 样本测定数：建立n≥60，验证n≥20； • 样本类型： • 临床样本（不含被测物）； • 基质类似的样本（5%牛血清，人血清白蛋白溶液） ※基质互通性参见EP14或《基质效应与互通性评估指南》（WS/T 356-2011） • 测定时间安排：多样本，多天，如5个样本，5天内测定； • 结果计算（正态分布or非正态分布？）； • 验证：20次，≤3个不大于LoB，验证通过。

30. 检测限-EP17 • LoD： • 样本类型： • 低值临床样本； • 浓度范围：LoB～4LoB之间。 • 样本测定数： • 建立：n≥60； • 验证：n≥20； • 浓度分组：4～6组。 • 结果计算：正态分布or非正态分布？ • 验证：20次，≤3个不大于声明的LoD，验证通过。

31. 检测限-EP17 • LoQ： 测定方法：多样本、多天、重复测定 • 建立： • n≥40（测定总数）； • TEa=|偏差|+2SD＜规定的质量目标，则LoQ=LoD，否则，需检测稍微高的标本 • 验证： • n≥25； • ≤3个不大于声明的LoQ，验证通过。

32. 检测限-功能灵敏度 • 定义： 低值测定结果变异系数等于20%时分析物浓度 • 制备： • 浓度：5~10个水平，对数递增/减； • N=20（每个浓度测定数）； • 结果计算：每个浓度均值、SD与CV% • 作图（可选）。

33. 可报告范围

34. 可报告范围 • 可报告范围： • 理论数据：{LoQ~AMR上限×最大可稀释倍数} • 实际应用：考虑临床需求 • 线性范围： • 覆盖检测系统可接受线性关系的范围，非线性误差小于设定标准。--EP6-A

35. 线性范围- EP6 • 样本：与临床标本基质相似 • 临床标本高低混合物 • 厂家提供质控物 • PT中的线性质控品（如CAP的LN质控品） • 浓度： • 建立：9~11个水平 • 验证：5~7个 • 覆盖整个预期测定范围 • 测量重复次数： • 建立：2~4次 • 验证：2~3次 • 测量时间：较短时间内（最好1天内）

36. 线性范围- EP6 • 标本制备举例： • 数据记录： • 离群数据剔除：目测或GRUBBS法

37. 线性范围- EP6 • 数据统计（多项回归）： • 以测量数据均值作为Y值，预期值作为X值作图（散点图）--目测 • 判断用非线性多项式拟合数据是否比线性好 • 判断最适非线性模型与线性拟合之间的差值是否小于预先设定的该方法的允许偏差 • 离群数据剔除：GRUBBS法（查表）

38. 线性范围- EP6 • 结果判断： • b2/b3（非线性系数）与零差异无显著性，线性关系成立，偏差（%）与不精密度均≤实验室质量目标，验证（建立）通过

39. 线性范围- EP6 • b2/b3（非线性系数）与零有显著性差异，统计学线性不成立： • 二项/三项拟合曲线与一阶线性的差值≤质量目标 • 不精密度≤质量目标 临床线性成立，验证通过，否则失败。 ※线性试验×： • 找原因 • 找厂家 • 缩小范围（前提：满足临床需求且非线性原因在高低两端）

40. 最大可稀释倍数 • 标本选择： • 浓度：线性范围上1/3区域（高/混合/添加） • 稀释倍数：供应商建议，临床需求 • 测定：3个浓度，每个浓度测定3次 • 结果记录与计算： • 离群数据剔除：GRUBBS法（查表） 偏差（%） ≤质量目标

41. 干扰- EP7 • 配套/批准方法（ISO15189与CAP）： • 引用供应商资料 • 引用官方出版物资料 • 修改/自建方法： • 确定干扰物及来源（内源/外源）： • 异常标本，如黄疸，脂浊与溶血等 • 药物及代谢产物 • 被测物相似物质 • 处理过程的添加物，如抗凝剂、防腐剂等 • 食物中的某些物质，如β-胡萝卜素、咖啡因等

42. 干扰- EP7 • 选择实验方案： • 加入可疑干扰物前后测定比较 • 选代表性病人样本与高特异性方法比较 ※两种方法各有优劣，可以互补 • 干扰筛查： • 选择合适待评分析物浓度（考虑Xc） • 确定该浓度分析物时，干扰引起的最大临床允许差异（dmax） • 确定实验重复次数：双侧 • 实验/对照交替测定

43. 干扰- EP7 • 数据统计与结果判断： dnull无效假设值，通常=0 dobs 95%可信区间的值为 dobs ≤dc 认为干扰物质引起的偏差＜dmax；否则假 设成立，有干扰。 • 干扰效应特征： 干扰物不同浓度时对待测物的干扰程度，可通过剂量响应曲线（Dose-Response Curve）描述。

44. 干扰- EP7 • 实验设计： • 确定待测物高低浓度（考虑Xc） • 制备干扰物各系列浓度（如高低混合） • 确定重复测试次数与测试顺序（随机或低→高，高→低） • 确定临床显著性差异值 • 数据处理与统计： 干扰物浓度为X轴，待测物浓度为Y轴作图 • 举例：溶血对AST测定的影响（软件）

45. 参考区间- EP28(原C28)

46. 参考区间- EP28(原C28) • 验证： • 小样本n=20，不超过2例落在区间外 • 大样本n=60 • 来源： • 官方权威出版物：如《临床常用生化检验项目参考区间》（WS/T 404-2012）、《血细胞分析参考区间》（WS/T 405-2012） • 厂家或其它实验室提供的参考区间：前提是相同的人口地理学、人口统计学特征以及测定程序。

47. 谢谢