实验室生物安全

1. 实验室生物安全 眼科学国家重点实验室

2. 实验室意外事故频发 • 2009年10月 北京理工大学爆炸 实验室内5人均受伤 原因：厌氧培养箱调试时发生气体爆炸 • 2008年7月 云南省微生物研究所实验室突发爆炸 1名博士研究生受伤 原因：收集实验废料时操作不当引发爆炸 • 2011年6月 实验室办公室被盗 笔记本一台，相机一部，财物若干 原因：外来人员趁周末入室盗窃

3. 实验室常见意外 • 溢出和泼洒 • 针头和注射器刺伤 • 锐器、碎玻璃割伤 • 动物咬伤、抓伤 • 火灾、爆炸 • 紫外线损伤 • 中毒 无安全意识 穿白褂到处走 戴手套随意开门柄、接电话 台面/器皿不清洁 实验后不收拾 针头等尖利物品不放入利器盒

4. 实验室生物安全 • 实验动物生物安全 • 化学品生物安全 • 临床实验室生物安全 • 病原微生物实验室安全 • 基因工程生物安全 • 放射性实验生物安全

5. 实验动物的分级 一级：普通级动物 大动物（比格犬、恒河猴、小型猪等） 豚鼠、家兔 二级：清洁级动物 豚鼠、家兔 大、小鼠均为二级以上 三级：无特定病原体（SPF）动物 豚鼠、家兔 大、小鼠 四级：无菌级动物 裸鼠、无菌豚鼠、无菌大小鼠

6. 实验动物使用过程生物安全的相关因素 • 动物因素 • 完整的资料 • 品种、品系、遗传背景或其来源清楚 • 微生物检测状况 • 质量合格证号、生产许可证号 • 实验环境和设施的配备 • 隔离检疫室、饲养室、实验处置室、储存室等 • 实验操作者因素 • 严格做好防护，穿工作服、戴帽子、手套、口罩

7. 动物实验安全注意事项 • 不同级别的动物在相应的环境中进行实验 • 不得将普通级动物带进屏障环境中实验 • 不得将带出屏障环境的实验动物，再带回屏障环境 • 特殊改造的实验室 • 涉及传染性、中毒性、放射性、致癌性、致突变或致畸性动物实验

8. 实验动物废弃物处理 • 无污染的实验动物尸体 • 及时装入专用塑料袋密封后，当天送回动物中心，不得随意丢弃 • 已污染或具有危险性的动物尸体及组织 • 按规定收集、分离、包装标识后，当天送回动物中心，统一运输到特定场所焚烧

9. 被动物咬了怎么办？ • 凡不能确定伤人动物是否健康，应立即对受伤部位进行彻底清洗和消毒，越早越好，24-48小时内 • SPF级动物咬伤，建议注射破伤风及流行性出血热抗毒素 • 彻底冲洗 • 肥皂水、清水、碘制剂或乙醇等，冲洗20分钟 • 严格消毒 • 2～3％碘酒或75％酒精涂于伤口 • 酌情处置 • 未伤及大血管的伤口不要缝合及包扎 • 较大伤口或比较严重的浅部伤口，清创消毒后，先用狂犬病免疫血清或球蛋白浸润伤口，数小时后（不低于2小时）再予缝合包扎 • 伤口深而大者 放置引流条，并使用抗生素和破伤风抗毒素以控制感染 • 接种疫苗 • 越早越好。已受伤一段时间而未接种狂犬病疫苗者，也应按接种程序接种疫苗

10. 化学品生物安全 危险化学品标志

11. 危险化学品的分类 • 爆炸品受热、受压或撞击时产生爆炸或燃烧，如叠氮钠、TNT • 压缩和液化气体 受热、撞击或强烈震动时，导致容器破裂爆炸或气瓶阀门松动漏气，酿成火灾或 中毒，如氧气泄漏时可能引起火灾；氮气、二氧化碳泄露可能引起窒息 • 氧化剂和有机过氧化物高温、摩擦、撞击等易燃烧，甚至爆炸，如硝酸盐等 • 易燃液体乙醚、乙醇、乙醛、苯、甲醇等 • 易燃固体自燃和遇湿易燃，如金属钠、红磷等 • 有毒品 通过呼吸道、皮肤和消化道进入体内，引起刺激、过敏、缺氧、昏迷和麻醉、致癌、 致畸、致突 变、尘肺等 • 腐蚀品 强酸（浓盐酸、浓硫酸）、强碱（氢氧化钠）或其他腐蚀品（氯化铜、甲醛溶液） • 放射性物品钋、镭、钴等，高毒甚至剧毒

12. 化学品的储存 • 在适宜的温度和湿度下储存化学品，须远离高热源，如烤箱；避免阳光直射，如靠近窗台 • 定期目测原料和包装容器：颜色、是否溢出、腐蚀等 • 不得将化学品存放在实验台上，防止被碰倒 • 不得将化学品存放在地面上，即使是临时放置也不允许 • 不能将通风橱用作化学品的存放地，以免破坏通风橱的通风效果 • 不得将易漏有害性或腐蚀性化学品存放在视力水平以上的药品架上

13. 危险就在你身边! 核酸技术： • 强诱变剂，嵌入碱基分子中导致错配，高致癌性 • 赛百盛称“未发现其有致癌作用”，但有报道其与吖啶橙（强 致癌剂高度相似其安全性有待进一步评价） • 潜在致癌物质，吸入时毒性最强，使用时应戴口罩，通风橱中 进行 • 含有苯酚，毒性和刺激性，皮肤接触后立即用大量去垢剂和水 冲洗 • 致癌剂，易挥发，损害肝和肾 溴化乙锭（EB） Golden view 焦碳酸二乙酯（DEPC） Trizol /Tri-reagent 氯仿（三氯甲烷）

14. 危险就在你身边! 蛋白技术： Western blot • 中等毒性物质，可致癌，累积毒性，不易排毒，主要引起神经、 • 生殖与发育的毒性 • 有毒，影响中枢神经系统，切勿吸入粉末 • 对黏膜、上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性，吸入可致命 • 强神经毒性，防止误吸，操作时快速，存放时密封 丙烯酰胺 NN-亚甲双丙烯酰胺 过硫酸铵（APS） 四甲基乙烯二胺（TEMED ）

15. 危险就在你身边! 蛋白技术： Western blot • 吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康 • 吸入、咽下或皮肤吸收而致命 • 有毒，刺激性，高热分解放出有毒气体造成眼睛的严重损伤 • 神经麻醉作用，引起脑水肿 二硫苏糖醇（DTT ） 苯甲基磺酰氟（PMSF） 十二烷基硫酸钠（SDS） 甲醇

16. 危险就在你身边! 蛋白技术：免疫组化 • 毒性非常大，可因吸入、咽下或皮肤吸收，操作时应非常小心 • 微毒类，主要是对中枢神经系统的麻醉作用，能刺激眼睛 • 毒性，危害不可逆性，吸入或皮肤吸收，应在通风橱操作 • 毒性大，致癌，腐蚀性，易挥发，也通过皮肤吸收 叠氮钠（NaN3） 丙酮 吉姆萨（Giemsa） 甲醛（福尔马林）

17. 危险就在你身边! 细胞培养技术： • 对皮肤有极强的渗透性，与蛋白质疏水基团作用，导致蛋白质变性，具有血管和肝肾毒性，吸入高挥发浓度可致头痛，晕眩 二甲基亚砜（DMSO）

18. 临床实验室生物安全 • 临床样本均具有不同程度的潜在传染性 • 血液传播性病原体（如HBV和HIV）的操作应在BSL-2下进行 • 应由受过培训的人员采集患者的血样 • 操作时应戴手套及眼睛和粘膜的保护装置 • 血液和血清应当小心吸取，不能倾倒 • 适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出的标本 • 感染性废物应经过灭菌和焚烧处理

19. 病原微生物实验室安全 生物安全实验室的分级 • 一级生物安全实验室（BSL-1） • 对健康成年人已知无致病作用的微生物 • 二级生物安全实验室（BSL-2） • 对人或环境具有中等潜在危害的微生物 • 三级生物安全实验室（BSL-3） • 主要通过呼吸道使人传染上严重甚至致死性疾病的微生物，已有预防疫苗 • 四级生物安全实验室（BSL-4） • 对人具有高度危险性，尚无有效疫苗或治疗方法的微生物

20. 基因工程实验室操作注意事项 基因工程生物安全 • 所存在的危害是潜在的 • 应了解基因工程基本原理、实验目的及所操作生物的属性 • 充分认识所用菌种、受体、载体、目的基因、基因操作方法和基因工程产品的安全性 • 生物材料和垃圾排放以前需高压消毒

21. 放射性实验室生物安全 放射性物质的危害 • 急性放射病 • 皮肤放射损伤 • 凝血、造血功能障碍 • 癌症 • 遗传性疾病

22. 放射性实验室基本防护规程 • 放射性核素实验应在符合防护要求的专门实验室和专用工作台进行 • 连续从事放射性操作1个月以上应配带剂量仪 • 遇到少量放射性液体溅洒在手脚等情况时，立即用吸水材料吸干，再用湿布由外向里反复擦洗 • 短半衰期的放射性废物主要用放置衰变法处理 • 长半衰期的放射性废物采用焚烧法或埋存法处理 实验室不具备放射性核素实验条件

23. 常用仪器使用的注意事项 离心机 • 在装载离心管后应正确平衡 • 离心管应始终牢固盖紧 • 放置好离心管后盖上盖子才可开始离心 • 离心机放置高度应使实验人员能看到离心机内部 • 有危险性的微生物，必须使用可封口的离心桶

24. 常用仪器使用的注意事项 磁力搅拌器 • 烧杯、瓶子应确保没有裂缝 • 搅拌时用盖子或保鲜膜封盖 • 有毒物品应在通风橱中进行 • 因玻璃容易破碎，故建议使用塑料容器

25. 常用仪器使用的注意事项 高压蒸汽消毒锅 • 灭菌条件组合 • 134oC 3min，126oC 10min，121oC 15min，115oC 25min • 注意事项 • 受过培训的人员负责消毒和日常维护 • 物品应放在空气能排出并具有良好渗透性的容器中，包装稍松散 • 待温度下降到80oC 以下后才可打开门取出物品

26. 常用仪器使用的注意事项 冰箱与冰柜 • 应定期除霜及清洁，清理出破碎的物品 • 清理时应戴厚橡胶手套，必要时进行面部防护 • 储存在冰箱内的容器应标明内装物品的名称，日期和储存者 • 不能放置易燃物品 • 应当保存一份冻存物品的清单

27. 常用仪器使用的注意事项 超净工作台 • 提前30分钟开台内紫外灯杀菌后，再提前20分钟开风机 • 工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流正常流动，不受干扰

28. 常用仪器使用的注意事项 微波炉 • 运转时，人需保持1米以上的距离，切忌用眼睛观察运转情况，以免受到微波等的损害 • 加热结束，戴好防护手套再取出加热后的物品 • 不可将金属容器和带金银边的器皿放入炉中加热，应选择耐热玻璃制品、陶瓷制品或微波炉专用盛器

29. 注意：请遵守执行 • 带回实验室的动物应及时处理，不得长时间留在实验室，严格防止实验动物逃出 • 使用一次性注射器，用过的针头禁止折弯、剪断等，禁止用手直接操作 • 感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合 • 细胞培养房废弃物应及时处理 • 废弃物应经过高压灭菌后在其他地方焚烧后再处理，或在指定垃圾场掩埋 • 污染的器械应完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中 • 生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板 • 操作有毒物品应在通风橱中进行

30. 注意：请遵守执行 • 工作期间必须穿专用白大褂、戴防护手套，必要时 戴穿防护服、防护镜、头部保护罩等 • 实验结束后收拾、清洁台面，洗手 • 不得将实验室有毒（或可疑有毒）物品带入办公室，不得戴手套在办公室接听电话，使用电脑等 • 不得在实验室进食 遇到问题，不知如何处理时，一定立即向知情同学请教或老师汇报，不能擅自处理

31. Thank you！