1 / 24

制作人： 张志峰

发育生物学实验. 制作人： 张志峰. 目 录. 实验一 海胆的受精作用和早期发育 实验二 海胆卵的结构 实验三 斑马鱼的早期胚胎发育. 实验一 海胆的受精作用和早期发育. 配子的获得 受精作用 胚胎发育 凝集和受精作用 自主创造性实验. 实验内容. 一、配子的获得. KCl 诱导海胆排放生殖细胞 操作方法： 用注射针管取 1-3 ml 0.5M KCl ，由海胆口面围口膜处注入体腔中（可分多个点注射） 将注射后的海胆反口面朝上放于盛有海水的培养皿中，数分钟后，生殖细胞将由反口面的生殖孔处排出，辨别雌雄后（卵子为橙黄色，精液为乳白色）.

glora
Download Presentation

制作人： 张志峰

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 发育生物学实验 制作人： 张志峰

  2. 目 录 实验一 海胆的受精作用和早期发育 实验二 海胆卵的结构 实验三 斑马鱼的早期胚胎发育

  3. 实验一 海胆的受精作用和早期发育 • 配子的获得 • 受精作用 • 胚胎发育 • 凝集和受精作用 • 自主创造性实验 实验内容

  4. 一、配子的获得 • KCl诱导海胆排放生殖细胞 • 操作方法： • 用注射针管取1-3 ml 0.5M KCl，由海胆口面围口膜处注入体腔中（可分多个点注射） • 将注射后的海胆反口面朝上放于盛有海水的培养皿中，数分钟后，生殖细胞将由反口面的生殖孔处排出，辨别雌雄后（卵子为橙黄色，精液为乳白色）

  5. 将雌海胆反口面朝下置于烧杯口上，杯内事先加入海水以收集卵子（水深以刚好浸没雌性生殖孔为宜），卵子至少需洗涤2次（过滤海水）以除去水中的体腔液和其他杂质将雌海胆反口面朝下置于烧杯口上，杯内事先加入海水以收集卵子（水深以刚好浸没雌性生殖孔为宜），卵子至少需洗涤2次（过滤海水）以除去水中的体腔液和其他杂质 • 雄海胆反口面朝下置于预冷的烧杯口处，当大滴的白色精液滴入烧杯内后，移去海胆，用保鲜膜密封培养皿，低温（5-10℃）保存精液

  6. 分别观察未受精卵结构和精子悬液（10ml海水中加入1滴精液），确定精子的活力分别观察未受精卵结构和精子悬液（10ml海水中加入1滴精液），确定精子的活力

  7. 二、受精作用 • 将几滴洗过的卵子悬液加入盛有100ml海水的容器中，然后再加入1滴稀释过的精子悬液，轻轻混匀 • 立即吸取精卵混悬液于凹玻片上，加盖玻片后，于镜下观察 • 记录受精膜起始举起和完全举起的时间

  8. 三、胚胎发育 • 培养方法：室温（15-20 ℃）；正常过滤海水；换水（1-2次/天，1/3/次） • 棱柱幼虫后开始投喂单细胞饵料，投喂量以水色为淡藻色为宜，2次/天（早晚各1次） • 观察：定期于镜下观察并记录达到各主要发育阶段的时间

  9. 四、凝集和受精作用 • 卵水可激活海胆精子并引起精子凝集 • 卵水的制作：将未受精卵放入盛有一定海水的试管里，塞住试管口，激烈摇动以去除未受精卵外的胶膜，过滤得滤液即为卵水 • 取少量卵水与胚胎手术皿中，按照精子悬液和卵水1:3（体积比）的比例使二者混合 • 1min后可见混合液中出现颗粒状或凝絮状，显微镜下精子凝集成从，且精子的头部都集中于中心 • 或者滴加卵水于在玻片上，加1滴精子悬液，立即于显微镜下可直接观察到精子凝集的过程

  10. 五 自主创造性实验 • 外界因子对海胆早期胚胎发育的影响 要求： • 自行确定环境因子，每个因子设定不同的梯度（4-6个为宜） • 按前述方法培养 • 观察分析结果（胚胎颜色，发育速度，存活率，畸形率等）

  11. 实验二 海胆卵的结构 一、从一个分离的分裂球发育成完整的 胚胎 二、原肠外凸 三、人工单性生殖

  12. 一、从一个分离的分裂球发育成完整的胚胎 • 按前述实验方法获得卵子和精液 • 将一些卵子加入盛有一半过滤海水的试管中，加1滴精子稀释液，塞住试管口。倒转试管1次，以混合精子和卵子 • 待加入精子1min后，用力持续振摇试管2-3min，以使受精膜破裂 • 将试管内容物倒入胚胎手术皿中，定时观察，待第1次卵裂刚刚完成，用吸管吸一定量海水用力吹打胚胎数次，待胚胎停顿下来，镜下检查分开的分裂球 • （也可使用无钙人工海水处理刚刚开始分裂的卵子，当卵裂完成后再用海水吹打，待细胞分离后，将细胞移入正常海水中

  13. 转移分离的分裂球于小烧杯中，按前述方法培养至长腕幼虫转移分离的分裂球于小烧杯中，按前述方法培养至长腕幼虫 • 比较正常胚胎或幼虫与分离卵裂球发育的胚胎或幼虫的大小

  14. 二、原肠外凸 • 不同化学试剂可以使海胆胚胎“动物化”或“植物化” • 氯化锂（LiCl）使海胆原肠外凸 • 按照前述实验方法获得配子和人工受精 • 分别于受精后4h，24h，36h吸取胚胎，并将其加入不同LiCl浓度的海水中 • 镜下观察记录原肠外凸现象并与正常胚胎比较期发育速度

  15. 三、人工单性生殖 • MgCl2、KCl、蔗糖、尿素等能引起海胆卵子激活和卵裂 • 实验方法： • 高渗液的配制（正常海水、海水的1.5倍、2倍和4倍） • 按照实验一方法获得未受精卵 • 将未受精卵移入盛有不同浓度海水的手术皿中，处理5分钟，倒掉高渗水，用正常海水洗卵3次 • 镜下观察（是否有受精膜举起，卵裂是否发生）

  16. 实验三 斑马鱼的早期胚胎发育 一、斑马鱼性腺促熟和产卵调控 二、斑马鱼早期发育活体观察 三、自主创造性实验 实验内容

  17. 一、斑马鱼性腺产卵控制 • 将光周期调控为10h光照，14h黑暗，再次亮灯后不久雌鱼便产卵 • 雌雄鱼须置于一网孔大于1mm的繁殖网中或者用上述网孔大小的隔板分割亲鱼与卵 ♀ ♂

  18. 二、斑马鱼早期发育活体观察

  19. 三 自行创造性实验 • 外界因子对斑马鱼早期胚胎发育的影响 要求： • 自行确定环境因子（环境理化因子，污染物，药物等） • 每个因子设定不同的梯度（4-6个为宜） • 按前述方法培养 • 观察分析结果（胚胎颜色，发育速度，存活率，畸形率等）

More Related