1 / 25

Ayu Puspitasari 20510036 KIMIA-MIPA ITB

L- Rhamnose Isomerase. Ayu Puspitasari 20510036 KIMIA-MIPA ITB. PENDAHULUAN. L - Rhamnose Isomerase ( L - RhI ) memiliki nomor Enzim 5.3.1.14 Termasuk dalam : kelas : Isomerase sub kelas : intramolecular oxidoreductase subsub kelas : aldosa-ketosa isomerisasi

ghada
Download Presentation

Ayu Puspitasari 20510036 KIMIA-MIPA ITB

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. L-RhamnoseIsomerase AyuPuspitasari 20510036 KIMIA-MIPA ITB

  2. PENDAHULUAN • L-RhamnoseIsomerase(L-RhI) memilikinomorEnzim 5.3.1.14 • Termasukdalam : kelas : Isomerase sub kelas : intramolecularoxidoreductase subsubkelas : aldosa-ketosaisomerisasi • Nama Lain : L-rhamnosealdose-ketose-isomerase

  3. BerasaldariberbagaimikroorganismesepertiAerobacteraerogenes, Escherichia coli,Lactobacillusplantarum, Mycobacterium smegmatis, Pseudomonas stutzeri,Bacilluspallidus, Thermoanaerobacteriumsaccharolyticum NTOU1, dll. • Umumnyadigunakandalammetabolismefruktosadanmanosa. Kemudianbanyakberperandalamproduksirare sugar dalamjumlahbesar. • SubstratUtamaadalahL-Rhamnosayaitusuatuturunandarimanosa. Banyakterdapatsebagaiglikosidaditumbuhan,hewan, danbakteri.

  4. KARATERISTIK • L-RhIdariEschericia coli hanyaspesifikpadasubtratL-Rhamnosa. Efektifitasnyapadareaksidengansubtrat lain sangatrendah • L-RhIdariPseudosomonasstutzerimempunyaispesifisitassubstrat yang luasantara lain L-Rhamnosa, L-Manosa, L-Lyxose, D-Ribosa, D-Alosadalamreaksiisomerisasialdosa-ketosa.

  5. L-RhIdariBacillus pallidusY25 jugamempunyaispesifisitassubstrat yang luasantara lain L-Rhamnosa, L-Manosa, L-Lyxose, D-Ribosa, D-Alosatetapilebihtahanpanasdaripada L-RhIdariPseudosomonasstutzeridandariEscherichia coli. • L-RhIdariT. saccharolyticum NTOU1 mempunyaispesifisitassubstrat yang luasantara lain L-Rhamnosa, L-Manosa, L-Lyxose, D-Ribosa, D-Alosatetapilebihtahanpanasdaripada L-RhIdariPseudosomonasstutzeri , Escherichia coli danBacillus padillus. • Specific activities darirekombinanL-RhIterhadapberbagaisubstratberbedasesuaidengankarateristikrekombinanL-RhI.

  6. ISOLASI DAN PENENTUAN ENZIM • Gen L-rhidiklondari DNA bakterimenggunakan PCR kemudiandiekpresikanpadaE. coli. • Sel yang mengekspresikanL-RhIkemudiandimurnikandengan : 1. French press disruptor 2. Heat Treatment 3. Centrifuge 4. Dialisis / KromatografiPenukar Ion • L-RhIdianalisadenganSDS-PAGEdanSpektrofotometer Massa

  7. STRUKTUR ACTIVE SITE L-RhIdariPseudosomonasstutzeri • 2 ion zinc terikatpadapusatactive site. • Zn1 terikatpada O2&O3 dariL-Rhamnosa,jugapada Asp254, His281, Glu219, Asp327. Zn1 terikatlebihkuatkebagianaktifdibanding Zn2. Berperanpadapengikatansubstrat • Zn2 terikatpada O1, Asp289,His257, dan 2 molekul air. Berperanpadaproseszwitterion • Terdapatmolekul air disekitar atom C4, C5,C6 substrat

  8. Terdapatbanyakruangpadasubstrat-binding site untukmengakomodasibanyakjenissubstrat • Substrat yang lain yaituL-manosa, L-lyxose, D-ribosa, danD-alosajugamempunyaistrukturdaninteraksiikatanhidrogen yang serupadenganL-rhamnosasehinggacocokuntukmenjadisubstratbagienzimL-RhIdariPseudosomonasstutzeri. • Terdapatjaringanikatanhidrogendisekitarsubstrat-enzim yang berperanpentingpadareaksienzimatis.

  9. MEKANISME REAKSI ENZIMATIS • SaatSubstratterikatdenganenzim, akandiikutidenganprosesisomerasi. • Terjadimekanismeperantarazwitterion yang terdiridari transfer dua proton dansuatu transfer hidrida. • Proton pertamaditransferdarisubstratke Asp327 danberikutnya proton ditransferdari Lys221 kesubstratmenghasilkanmuatanpositifpada C1 danmuatannegatifpada O2.

  10. Kemudiansuatu transfer hidridadari C2 ke C1 akanmenghasilkanprodukyaitu isomer darisubstrat. • Yang berperandalamprosesenzimatisadalah C1 dan C2. • Inhibitor yang mungkinadalah Ag+, Ba2+, Ca2+, EDTA, Fe2+, Ni2+, dll SPESIFISITAS SUBSTRAT • PadaL-RhIdariE. coli terdapatsuatukantunghidrofobik yang unikpada C4, C5, dan C6 padasubstrat yang diikatnya. SedangkanpadaL-RhIdariP. stutzeritidakadakantunghidrofobiktersebut. Hal ini yang membuatspesifisitassubstratpadaL-RhIdariP. stutzerilebihtinggidaripadaL-RhIdariE. coli

  11. METABOLISME FRUKTOSA DAN MANOSA

  12. Suatumetilpentosa • BM 182.17 • Sumberadalahhewan, tumbuhandanbakteri • Digunakandalamindustrimakanan, memberikan aroma buahdanjugatermasuk aroma daging. L-Rhamnosa

  13. REAKSI ISOMERISASI ALDOSA-KETOSA

  14. ACTIVE DOMAIN

  15. SUBSTRATE-BINDING SITE

  16. SPECIFIC ACTIVITIES

  17. PENDAHULUAN KARATERISTIK ENZIM ISOLASI DAN PENENTUAN ENZIM STRUKTUR ACTIVE SITE MEKANISME REAKSI ENZIMATIS

  18. Selesai

More Related