Sottoprogetto Bioumorale

1. Sottoprogetto Bioumorale ALBIOS – AlbuminItalianOutcomeSepsis Roberto Latini, MD / SergeMasson, PhD Istituto Mario Negri, Milano

2. Obiettivi Identificare i possibili meccanismi con i quali l’utilizzo di albumina per il rimpiazzo volemico potrebbe essere vantaggioso in pazienti con sepsi severa o shock settico Creare una banca bioumorale centrale con l’inclusione di campioni di plasma ottenuti sequenzialmente da pazienti arruolati nello studio

3. Marcatori • Infiammazione / infezione • Proteina C-reattiva (CRP) • Procalcitonina (PCT) • Pentraxina-3 (PTX3) • Funzione cardiaca • Peptide natriuretico (BNP) • Coagulazione • PAI-1 • Eritropoietina(EPO) • Citochine pro/anti-infiammatorie, stress ossidativo

4. Studio osservazionale prospettico, 525 pazienti con diagnosi di sepsi ammessi in Pronto Soccorso, Confronto del valore prognostico di uno score clinico (MEDS), procalcitonina e proteina C-reattiva, Outcome: mortalità precoce (5 giorni) e a 6-30 giorni. La combinazione di un score clinico con un marcatore biomorale (PCT) migliora l’accuratezza prognostica nella sepsi.

6. ¿ Procalcitonina per la diagnosi ? • Procalcitonin cannot reliably differentiate sepsis from other non-infectious causes of systemic inflammatory response syndrome in critically ill adult patients. • The findings do not lend support to the widespread use of the procalcitonin test in critical care settings. • Procalcitonin represents a good biological diagnostic marker for sepsis, severe sepsis, or septic shock, difficult diagnoses in critically ill patients. • Procalcitonin is superior to C-reactive protein. • Procalcitonin should be included in diagnostic guidelines for sepsis and in clinical practice in intensive care units.

7. Brain natriuretic peptide (BNP) in 22 patients with septic shock, 11 patients with severe sepsis, and 20 healthy volunteers. • Blood collection on admission and on days 1, 2, and 4 • Increased plasma levels of BNP may reflect not only the severity of myocardial depression but also the disease severity and could be of prognostic value in patients with septic shock.

8. 252 pazienti con sepsi severa o shock settico in PS BNP misurata fra 0-72 ore Outcome: mortalità intraospedaliera, 28 gg, 60 gg e 1 anno nonsurvivors survivors I quartili di BNP a 24 ore correlano con la severità della sepsi e funzione cardiaca

9. Iron-deficiency anemia Sepsis w/o renal failure • L’aumento della produzione di EPO come risposta fisiologica alla diminuzione di emoglobina è attenuata in pazienti con sepsi, possibilmente per gli effetti inibitori di citochine infiammatorie.

10. Plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1) is a 50-kd glycoprotein of the serine protease inhibitor family. • PAI-1 inhibits tissue- and urokinase-type plasminogen activators (t-PA/u-PA). • PAI-1 also acts as an acute-phase protein during acute inflammation. • In patients with sepsis, PAI-1 is positively related to poor outcome, increased severity of disease, and increased levels of various cytokines, acute-phase proteins, and coagulation parameters. PAI-1

12. Stress ossidativo Aorta • Modello murino di shock settico da LPS, • Infusione di albumina umana (HSA), salina, o nessun fluido, • Valutazione reattività vascolare (acetilcolina) e stress ossidativo (EPR / immunostaining) • Albumina umana migliora la disfunzione endoteliale, l’infiammazione e lo stress ossidativo in un modello sperimentale di shock settico. Cuore Polmone Radicale superossido O2• (spin trapping EPR)

13. Stato dell’arte Evidenze sul ruolo diagnostico e/o prognostico di alcuni marcatori circolanti in pazienti con sepsi severa/shock settico;Poco/nessun dato sull’effetto dell’albumina (rimpiazzo volemico) su questi marcatori.

14. Originalità del sottoprogetto bioumorale Studio di intervento(vs. osservazionale) Studio multicentrico(vs. monocentrico) Molteplicità dei meccanismi bioumorali indagati (infiammazione, infezione, funzione cardiaca, eritropoiesi, coagulazione, stress ossidativo) Costituzione di una banca plasma per altri marcatori

15. Obiettivi • Costituire una banca plasma da almeno 700 pazienti con sepsi severa / shock settico reclutati in circa 50 Centri di Terapia Intensiva

16. Tempi prelievi • Due prelievi ematici previsti: • Giorno 1 • Giorno 7, o dimissione dalla Terapia Intensiva se avviene prima del settimo giorno

17. Attrezzature / materiale richiesti • Centrifuga per vacuette da 6 mL, preferibilmente refrigerata a 4°C (se no, a temperatura ambiente) • Congelatore preferibilmente a –70°C (se no, a -20°C) • Ghiaccio per raffreddare i campioni • Kit per il prelievo ematico (fornito) • Scatole per archivio campioni plasmatici (fornite) • Protocollo per eseguire il prelievo ematico (fornito)

18. K-EDTA K-EDTA ALBIOS- Prelievo Ematico per il Laboratorio Centrale (giorno 1; giorno 7 o dimissione dalla Terapia Intensiva se avviene prima del settimo giorno) Sangue Sodio citrato Sodio citrato 2 x 3,5 mL 2 x 9 mL Centrifugare a 2000 g per 15 min. a 4°C (o temperatura ambiente) BNP, CRP, EPO, PCT, PTX3, riserva Coagulazione (PAI-1) Plasma 1326 1326 1326 1326 1326 1326 1326 1326 1326 1326 3 x 1 mL plasma sodio-citrato (tappo verde) 7 x 1 mL plasma EDTA (tappo rosso) CONGELARE al più presto a -70°C (o -20°C)

19. Identificazione dei prelievi Provette anonime ! (codice numerico) Indispensabile e semplice: digitare il codice prelievo (4 cifre) del kit sulla scheda raccolta dati elettronica Compilare le altre informazioni (data e ora prelievo)

20. Identificazione dei prelievi ALBIOSMateriale per il prelievo bioumorale IMPORTANTE: il codice numerico (4 cifre) sottostante va obbligatoriamente digitato nella scheda elettronica, nella parte riguardante l’identificazione del prelievo bioumorale. ALBIOS 1035 Codice unico per ogni kit !

21. Identificazione dei prelievi

22. Identificazione dei prelievi

23. I prelievi vengono ritirati periodicamente dai Centri con trasporto in ghiaccio secco, I dosaggi sono eseguiti sotto la responsabilità del Laboratorio Centrale (Istituto Mario Negri)