1 / 24

ILHAMUDDIN 20508045

ENZIM ALANIN TRANSFERASE (ALT/SGPT). FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG 2008. ILHAMUDDIN 20508045. Enzim Alanin Transaminase. Penamaan 3-4 Mekanisme Reaksi 5-8 Pengendalian Reaksi 9

garren
Download Presentation

ILHAMUDDIN 20508045

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. ENZIM ALANIN TRANSFERASE (ALT/SGPT) FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG 2008 ILHAMUDDIN 20508045

  2. EnzimAlaninTransaminase • Penamaan 3-4 • MekanismeReaksi 5-8 • PengendalianReaksi 9 • Isolasi, Purifikasi, & Karakterisasi10-13 • Cara PenentuanAktivitas14 • MaknaBiomedis15-22

  3. PenamaanEnzim ALT KelasEnzim NC -IUBMB E C 1. Oksidoreduktase E C 2. Transferase E C 3. Hidrolase E C 4. Liase E C 5. Isomerase E C 6. Ligase EC 2.6.1.2 ALANIN TRANSAMINASE 2: Kelastransferase (transfer gugustertentu) 6: subkelas (transfer gugus nitrogen) 1: subsubkelas (transfer gugusamin) 2: urutan Sinonim: AlaninAminotransferase (AlaAT/AAT/ALAT), Serum GlutamatPiruvatTransaminase (SGPT/GPT), alaninalfaketoglutarataminotransferase, alaninpiruvataminotransferase, piruvattransaminase, piruvatglutamattransaminase, dll

  4. EnzimologiKlinik PenamaanEnzim ALT • Enzim Plasma Fungsional • Enzim Plasma Nonfungsional • - Enzim Plasma NonfungsionalSekretori • sepertiamilasedan lipase • - Enzim Plasma NonfungsionalIntraselulerSejati • seperti , , aspartattransaminase, ataulaktatdehidrogenase alanintransaminase

  5. MekanismeReaksiEnzim ALT • Namasistematik: L-Alanin:2-oxoglutarat aminotransferase. • Ko-Enzim: Piridoksalposfat (Vitamin B6) • Substrat: L-alanindan 2-oxoglutarat • Produk: Piruvatdan L-glutamat • Mekanismekinetik: ping-pong bi bi mechanism

  6. MekanismeReaksiEnzim ALT

  7. MekanismeReaksiEnzim ALT

  8. MekanismeReaksiEnzim ALT R1-CH(NH3+)-COO- ALT—PL-P R2-CH(NH3+)-COO- ALT—PL-M R2-CO-COO- R1-CO-COO- Enzim Substrat Produk Glutamat Piruvat αKetoglutarat Alanin L-Asam amino 1 αAsamKeto 2 L-Asam amino 2 αAsamKeto 1

  9. PENGENDALIAN REAKSI ENZIM ALT INHIBITOR • Padamanusia: Vigabatrin • Strukturnya analog dengan GABA danobatantiepilepsi • Inhibisi+80% aktivitasenzimdengankonsentrasi 1 mMsecarainvitro • Inhibisi 30—40% aktivitasenzimsetelahpemberian 1—2 jam. • PadaChlamydomonasreinhardtii(Lain-Guelbenzu et al., 1991) menunjukkansubstrattidakberperansebagai inhibitor. • PadaSusscrofa: D-alaninkompetitifvs L-alanin • PadaOryctolaguscuniculus: 2-oxoglutarat inhibisipada pH netral, tidakpada pH 8,8 AKTIVATOR • Padaakar barley: • - Keadaanhipoksiadapatmenginduksi ALT. • - Analisis RNA blot padajaringanakar peningkatan 4-fold band single Ala AT2 • mRNA setelah 12—24 jam stress hipoksik. • - Konsentrasi protein AlaAT2 meningkatsepoladenganaktivitasAlaAT. • (Muenchdan Good, 1994). • PadaorganismeHordeumvulgare: • Peningkatan 1,5 fold aktivitasenzimdidapatkanpadakondisihipoksia.

  10. ISOLASI, PURIFIKASI, DAN KARAKTERISASI ENZIM ALT • Isolasi, purifikasidankarakterisasi ALT telahdilakukanpadaberbagaiorganisme. Tipereaksi, kodesekuens, ko-faktor/ko-enzim, nilai Km danKi, inhibitor danaktivator, turnover number, pH/temperaturpadakeadaan optimum/stabil, sumberjaringan, lokasidalamsel, beratmolekul, jumlahasam amino, jumlah subunit, daninformasilainnyapadaberbagaiorganismedapatdilihatpadaThe Comprehensive Enzyme Information System, BRENDA.

  11. ISOLASI, PURIFIKASI, DAN KARAKTERISASI ENZIM ALT EkstraksiselArchaeonpyrococcusfuriosushipertermofilikdengankromatografimultistep: • Massa molekul93,5 kDa (berdasarkan gel filtration) • Terdiriatasduasubunit yang identik, 46 kDa (sodium dodecylsulfate- • polyacrylamidegel elektroforesisdansekuensi gen). • Memilikispesifisitasterhadapsubstrat yang luasdibandingkandenganseleukariot, • yaitualanin, glutamate, aspartat yang aktivitasnyasignifikandengan 2-oxoglutarat • ataupiruvatsebagaiakseptoramin. • Aktivitasnyaoptimal pada pH 6,5—7,8 dansuhu 950C. • Sekuensasam amino N-terminal yang dipurifikasitelahditentukandandigunakan • untukidentifikasi gen encoding enzimini (aat) dalam genome database P. furiosus. • Gen inijugadiekspresikanpadaE. coli,enzimrekombinannyatelahdipurifikasi. • pH, temperatur, beratmolekul, dan parameter kinetikdarirekombinannyatakdapat • dibedakandenganenzim native. • Nilaikcat/Km untukbentukalanindanpiruvatadalah 41 dan 33 s-1 mM-1. • AnalisisNorthern mengidentifikasisatutranskrip 1,2-kb untuk gen aat. Ekspresi gen • ini, juga gen gdh (encoding glutamate dehidrogenase), diinduksiolehpiruvat. • (Ward et al., 2000)

  12. ISOLASI, PURIFIKASI, DAN KARAKTERISASI ENZIM ALT Gambaranenzim ALT padahatitikusselamamasapuasa: • Suatuglikoproteindenganmassamolekullebihrendah, yaitu 17,7 kD • Titikisoelektrik4,2 • glutamine sebagairesidu N-terminalnya. • Spesifisitassubstratlebihkecildengannilai Km untukalanin 0,51 mMdanuntuk 2-oxoglutarat 0,12 mM. • Dari studispektroskopidaninhibisimenunjukkanketerlibatanpiridoksalfosfatdangugus –SH bebasdalamproseskatalisis. • Piridoksalfosfatmengaktifasienzimdengannilai Km 0,057. (M. Vedavathi et al., 2006)

  13. ISOLASI, PURIFIKASI, DAN KARAKTERISASI ENZIM ALT Padamanusia: • Ditemukanduabentukisoenzim, tetapihanyasatu gen yang • telahdikloning (gpt). • Yang RZ et al. (2002) mengkloning homolog gpt (dinamai gpt2) • danberhubungandengan ALT2. • Gen gpt2 mengkode 3,9 kb mRNA, terdiridari 12 exon, sekitar • 50 kb genom, danterletakdikromosom 16q12.1. • ALAT1 memiliki 496 residuasam amino denganberatmolekul • 54.637 Dadan ALAT2 523 residuasam amino, 57904 Da. • NilaiKm padasubstrat 2-oxoglutarat danalaninmasing-masing • 0,19 dan 5,1 dimitokondria, dannilai Km padasubstratalanindi • sitosoladalah 21. • Enzimini optimum pada pH 7,8 dansuhu 300C.

  14. CARA PENENTUAN ENZIM ALT • Penentuan ALT dilaboratoriumkimiaklinikmenggunakan serum sebagaisampel. • Reaksipenentuanenzim ALT sebagaiberikut: L-alanin + α-ketoglutarat → piruvat + L-glutamat Piruvat + NADH + H+ → L-laktat + NAD+ • Penurunan NADH berbandinglurusdenganaktivitasenzim ALT yang diukurabsorbansinyadenganspektrofotometer. • Pengukuranaktivitas ALT dalam unit per liter (U/L).

  15. MAKNA BIOMEDIS ENZIM ALT • Berperandalammetabolismeasam amino (AA kesiklusasamsitrat) • Transaminasi: asam amino rangkakarbon alanine aminotransferase(ALT = GPT) aspartate aminotransferase(AST = GOT)

  16. MAKNA BIOMEDIS ENZIM ALT • Berperanpadasikluscori • (alanin-piruvat) • Melibatkanototdanhepar • Puasaglukosadarahrendah • glukoneogenesis (alaninmenjadi • piruvatdihati)  glukosadarah • Kerjaototanaerobikpada • olahragaberlebihan banyak • terbentukalanin konversi • menjadiglukosa.

  17. MAKNA BIOMEDIS ENZIM ALT • Termasukenzim plasma nonfungsionalintraselulersejati • Banyakterdapatdisitoplasma • Banyakditemukandiselhepar, jugaadadiotot, jantung, otak, ginjal, danjaringanadiposa • Digunakansebagaipemeriksaanpenunjang • Peningkatankadarnyadi plasma berhubungandengankerusakanjaringanhepar, utamanya hepatitis. • Dapatjugameningkatpadaalkohol/nonalkoholiksteatohepatitis, fatty liver, sirosishepatis, hepatotoksikobat, kolelithiasis, danhepatomaataupunkarsinomahepatoseluler.

  18. MAKNA BIOMEDIS ENZIM ALT • Enzim-enzim yang termasuktesfungsihati: • ALT/SGPT, AST/SGOT, GLDH, LDH (kerusakan /integritashepatosit) • gamma GT, alkali fosfatase(gangguankolestasis) • CHE (gangguanfungsisintesis) • Pemeriksaanenzim-enziminidigunakanuntuk: • mendeteksikelainanhatidiagnosis • mengetahuiberatringannyapenyakit • mengikutiperjalananpenyakit • menilaihasilterapi

  19. MAKNA BIOMEDIS ENZIM ALT

  20. MAKNA BIOMEDIS ENZIM ALT • Hepatitis akut: • ALT danAST meningkat 10 x, • bahkandapat 100 kali . • Peningkatan ALT > AST (rasio • DeRitis, AST/ALT < 0,7). • Penurunansekitar50% pada • minggukedua • Dapatnormal > 3 bulansetelah • timbulnyapenyakit (fase • penyembuhan) • Hepatitis kronik: • Setelah 6 bulantetapmeninggi • Kadar AST lebihtinggi • dibandingkandengan ALT • (AST/ALT > 1).

  21. MAKNA BIOMEDIS ENZIM ALT • Penyakithati yang lain: • Gangguanhatiolehhalotan GLDH, AST meningkatdan gamma-GT normal. • Kerusakanhatiakibatobatkontarasepsi ALT, AST dan alkali fosfatase • sedikitmeningkat. • Perlemakanhati enzimtransaminasemeningkat2—3 kali dari normal. • Tumor hati alkali fosfatasedan gamma GT meningkat. • KonsentrasiALT dan AST padapermulaankarsinomahepatoselulertidak • memperlihatkankenaikan. • Tumor makinbesardankerusakanhatimakinhebat AST/ALT > 4. • Info tambahan: Sebelumditemukannyapemeriksaanantibodidenganmetode ELISA, American Red Crossmenggunakanpemeriksaan ALT sebagaitesscreening (belumadatesspesifik) untukmenerima donor darah yang dikaitkandengankemungkinaninfeksi hepatitis virus C.

  22. MAKNA BIOMEDIS ENZIM ALT PenderitaSirosisHepatis

  23. DAFTAR PUSTAKA Akbar, Nurul. (2007). KelainanEnzimpadaPenyakitHatidalamHepatobilierBuku Ajar IlmuPenyakitDalam. PusatPenerbitanDepartemenIlmuPenyakitDalamFakultasKedokteranUniversitas Indonesia. Amiruddin, Rifai. (2007). FisiologidanBiokimiawiHatidalamHepatobilierBuku Ajar IlmuPenyakitDalam. PusatPenerbitanDepartemenIlmuPenyakitDalamFakultasKedokteranUniversitas Indonesia. Giboney, Paul T. Mildly Elevated Liver Transaminase Levels in the Asymptomatic Patient, American Family Physician. AlanineTransaminase, Wikipedia. Hadi, Sujono. (2002). HatidalamGastroenterologi. PT Alumni Bandung. Lain-Guelbenzu B., et al. (1991). Purification and Properties of L-alanineAminotransferase from Chlamydomonasreinhardtii. Eur J. Biochem. 202(3): 881-7 Ward, DE., et al. (2000). Purification and Characterization of the AlanineAminotransferase from the HyperthermofilicArchaeonpyrococcusfuriosus and Its Role in Alanine Production. J. Bacteriol. 182(9): 2559-66. Vedavathi, M., et al. (2006). A Novel Low Molecular Weight AlanineAminotransferase from Fasted Rat Liver. Biochem (Mosc). 71 Suppl 1: S105-12. Yang RZ, et. al. (2002). cDNA Cloning, Genomic Structure, Chromosomal Mapping, and Functional Expression of a Novel Human AlanineAminotransferase. Genomic 79(3):445-50. IUBMB 2005 The The Comprehensive Enzyme Information System, BRENDA

  24. Selainmestimenjawabsoalsusahnya Bu Fida, kitajugamestibisamempertanggungjawabkannikmatenzim yang kitagunakan BRO! Ya Allah, thanks berat. Karenanikmatenzim-Mu, kamimasihdapatmenikmatiindahnyahidup TerimaKasih

More Related