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创新实践. -基因工程提高酵母甘油产量的研究. 甘油是一种重要的工业原料,具有重要的应用价值。甘油可以通过化工合成,也可以通过微生物(如酵母等)发酵生产。在自然界中,有一种重要的咸水藻 — 盐藻,可以产生和累积大量的甘油。控制盐藻中甘油合成的关键基因已经被上海市能源作物育种及应用重点实验室克隆,因此有望通过这个基因来提高酵母发酵产甘油的能力。然而,这个基因能否在酵母中正常表达,以及表达后是否能够提高甘油的产量,这些还有待进一步的研究。本研究就是要验证上述的科学问题,并希望通过这一研究,利用基因工程,获得高甘油产量的新酵母菌株。. 实验构想. 什么是盐藻?.
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创新实践 -基因工程提高酵母甘油产量的研究
甘油是一种重要的工业原料,具有重要的应用价值。甘油可以通过化工合成,也可以通过微生物(如酵母等)发酵生产。在自然界中,有一种重要的咸水藻—盐藻,可以产生和累积大量的甘油。控制盐藻中甘油合成的关键基因已经被上海市能源作物育种及应用重点实验室克隆,因此有望通过这个基因来提高酵母发酵产甘油的能力。然而,这个基因能否在酵母中正常表达,以及表达后是否能够提高甘油的产量,这些还有待进一步的研究。本研究就是要验证上述的科学问题,并希望通过这一研究,利用基因工程,获得高甘油产量的新酵母菌株。甘油是一种重要的工业原料,具有重要的应用价值。甘油可以通过化工合成,也可以通过微生物(如酵母等)发酵生产。在自然界中,有一种重要的咸水藻—盐藻,可以产生和累积大量的甘油。控制盐藻中甘油合成的关键基因已经被上海市能源作物育种及应用重点实验室克隆,因此有望通过这个基因来提高酵母发酵产甘油的能力。然而,这个基因能否在酵母中正常表达,以及表达后是否能够提高甘油的产量,这些还有待进一步的研究。本研究就是要验证上述的科学问题,并希望通过这一研究,利用基因工程,获得高甘油产量的新酵母菌株。 实验构想
什么是盐藻? 盐藻广泛分布于盐湖、海洋、盐土等盐浓度较高的环境中,尤其在高盐水域中,盐藻为主要种群。盐藻是最耐盐的真核生物,能在低至50mM高至接近饱和盐浓度的环境中生存。盐藻具有十分惊人的渗透调节能力,最大可以耐受3-4倍的渗透压变化。如果通过梯度改变渗透压,则细胞可以耐受到7倍以上的渗透压的变化。 而盐藻应对外界渗透压变化的最主要机制就是细胞体内的甘油快速合成机制。
甘油3-磷酸脱氢酶(GPDH) 在盐藻中,甘油3-磷酸脱氢酶(GPDH)是控制合成甘油的关键酶。它催化磷酸二羟丙酮(DHAP)和甘油-3-磷酸(G3P)之间的相互转化。G3P再通过磷酸甘油磷酸酶(GPP)的催化转化成为甘油。 盐藻如何合成甘油? 研究发现,导入甘油合成关键酶GPDH,甘油产量可以增加20倍的得率。
实验操作思路 1 带有DvGPDH1和DvGPDH2的酵母表达载体的制备(已制备好) 2 利用酵母热激转化法将带有目的基因的载体转入野生型酿酒酵母中(10days) 3 转化后的酿酒酵母细胞总甘油测定(8days) 甘油标准曲线的制作 酵母总甘油的测定
转化好的酵母 甘油标准曲线