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Praktikum Spezielle Proteinchemie Aufreinigung von FGF-2 2. Teil

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Praktikum Spezielle Proteinchemie Aufreinigung von FGF-2 2. Teil - PowerPoint PPT Presentation


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Praktikum Spezielle Proteinchemie Aufreinigung von FGF-2 2. Teil. Diafiltration. Cut-off: 3 kD Aufkonzentrieren, entsalzen Kühlung (4 °C) 2 Schritte. Vivaspin 20 centrifugal concentrators: http://ecx.images-amazon.com/images/I/41oReyDPNtL._SL500_AA300_.jpg. Anionenaustauschmembran.

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Presentation Transcript
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Praktikum Spezielle Proteinchemie

Aufreinigung von FGF-2

2. Teil

diafiltration
Diafiltration
  • Cut-off: 3 kD
  • Aufkonzentrieren, entsalzen
  • Kühlung (4 °C)
  • 2 Schritte

Vivaspin 20 centrifugal concentrators:

http://ecx.images-amazon.com/images/I/41oReyDPNtL._SL500_AA300_.jpg

anionenaustauschmembran
Anionenaustauschmembran
  • Reinigung der FPLC-Anlage mit Salz & Ethanol
  • Durchfluss wird aufgegangen – gereinigtes FGF-2
  • Bradford: 824 mg

Anionenaustauschmembran:

http://www.sartorius.com/en/product/product-detail/93iexq42db-12-v/

endotoxin assay
Endotoxin-Assay
  • Limulus Amöbozyten Lysat
  • Empfindliche Reaktion auf Endotoxine
  • Präzipitieren, färben, Photodetektion

Wikipedia: Limulus

ergebnis
Ergebnis

http://www.criver.com/SiteCollectionDocuments/qc_ra_d_pts_system_brochure.pdf

Resultat: weniger als 5 Endotoxin-Units / mL, entsprechend weniger als 5 EU auf 824000 µg FGF-2.