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禽流感的实验室诊断. 第八组. 什么是禽流感 ?. 禽流感是禽流行性感冒的简称,它是一种甲型流感病毒的一种亚型(也称禽流感病毒) 引起的传染性疾病,被国际兽疫局定为甲类传染病. 高致病性禽流感 H5N1: 最严重,发病率高,死亡率高 . 低致病性禽流感 H9N2/H7N7 :呼吸道症状轻,食量减少,产蛋量下降 , 零星死亡 . 非致病性禽流感 :无症状, 仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。. 禽流感病毒图解.

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Presentation Transcript
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什么是禽流感?

禽流感是禽流行性感冒的简称,它是一种甲型流感病毒的一种亚型(也称禽流感病毒) 引起的传染性疾病,被国际兽疫局定为甲类传染病.

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高致病性禽流感H5N1:最严重,发病率高,死亡率高.
  • 低致病性禽流感H9N2/H7N7 :呼吸道症状轻,食量减少,产蛋量下降,零星死亡.
  • 非致病性禽流感 :无症状, 仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。
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如果要检验是否是高致病性禽流感病毒,在进行HA亚型鉴定之后,还需要进行细胞培养、动物试验或进行裂解位点的序列分析等进行判断。如果要检验是否是高致病性禽流感病毒,在进行HA亚型鉴定之后,还需要进行细胞培养、动物试验或进行裂解位点的序列分析等进行判断。
oie hpaiv
OIE判断HPAIV的标准是:
  • ①含流感病毒尿囊液,做l:10稀释,静脉内接种8只4~8周龄易感鸡,每只0.2ml,如在10天内死亡6只以上,则该流感病毒为HPAIV~
  • ②如果致死l一5只易感鸡,而且又不是H5或H7亚型,则将其接种鸡胚成纤维细胞(CEF)或MDCK细胞,在没有胰酶的情况下观察是否产生细胞病理变化,如不产生病理变化,该流感病毒就不是HPAIV;
  • ③对于所有的低致病性H5和H7亚型病毒和其他流感病毒,如果在没有胰酶的条件下在细胞培养能生长,则必须测定血凝素裂解部位的氨基酸顺序,如果相似于其他的HPAIV,存在多个碱性氨基酸序列,则该受检病毒被视为高致病性。
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1.样品采集
  • 样品采集的质量是进行禽流感检测的关键。应从死禽和处于急性发病期的病禽采集样品,样品要具有典型性。采样过程要注意无菌操作,同时避免污染环境。采样人员要按NY/丁7(38要求加强个人防护。样品的保存和运输也要按照有关的规定和要求进行。
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(1)病料样品  至少从5只病禽和病死禽中采集病料样品(发病群不足5只则全部采样)。样品应包括:泄殖腔(新鲜粪尿样)棉拭子和气管棉拭子(置于缓冲液中);气管和肺的混样;肠管及内容物的混样;肝、脾、肾和脑等其他组织样品(不能混样)。
  •     组织样品、气管棉拭子单独放人容器,容器中盛放含有抗生素(pH值为7.0~7.4)的PBS液。抗生素的选择应视当地情况而定,组织和气管拭子悬液中加入青霉素(20001U/ml)、链霉素(2mg/ml)或庆大霉素(50t~g/m1)。肠管及内容物、粪便样品和泄殖腔棉拭子所用的抗生素浓度应提高5倍(加入抗生素后PBS液的pH值应调至7.0-7.4)。
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2)血样 分别采集至少10个病禽的(急性发病期血清,如发病群不足10只则全部采样),并要求单独存放,不能混合。
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2.病毒的分离鉴定
  • 以无菌拭子采集气管或泄殖腔病料或病变组织,研磨制成10%悬液,经处理后接种9-11日龄SPF鸡胚,收获尿囊液测定血凝活性,若为阴性则应继续盲传2~3代。对具有血凝活性的尿囊液需先用ND抗血清做HI试验,以排除新城疫的可能,即使ND阳性也应采用中和法继续传代,看是否为ND与AIV混合感染。然后用免疫扩散等方法来检测特异性核心抗原NP或MP,然后用血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验鉴定A型流感病毒亚型。分离鉴定的同时,进行致病力试验,确定毒力的强弱。
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鸡胚培养法的优点 鸡胚的组织分化程度低,可选择适当途径接种,病毒易复制,感染病毒的膜和液体含大量病毒;鸡胚是个整体,有神经血管的分布及脏器的构造;来源充足,操作简单,通常是无菌的,对接种的病毒不产生抗体。3天可报告结果。病毒分离鉴定对AI的诊断比较确实,但操作程序繁杂,费用高,耗时费力。
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免疫荧光技术(IFT)诊断禽流感
  • 免疫荧光技术就是荧光抗体技术(FAT)。IFT最早用于病毒的鉴定和定位病毒感染细胞中特异性抗原,主要是核内荧光。用M1抗原的荧光抗体主要出现胞质荧光,核内也有部分荧光。