Download
1 / 15
200 likes | 1.36k Views
HPLC – 방부제 분석. 2 학년 A 반 류정미. 1. 학습 목표. 액체 크로마토 그래피의 원리에 대하여 설명할 수 있다 . 액체 크로마토 그래피의 기기 구성 역할과 조작법을 정확하게 설명할 수 있다 . 액체 크로마토 그래피를 이용하여 성분을 분석하고 화장품분석 응용에 있어서의 중요성을 알 수 있다. 2. HPLC 에 대해서. 혼합물속 의 성분이 2 가지의 상인 이동상과 , 고정상에 분배에 의해 분리되는 물리적인 분리 법으로 크로마토그램을 그려내는 시스템이다 .
E N D
HPLC – 방부제 분석 2학년 A반 류정미
1. 학습 목표 • 액체 크로마토그래피의 원리에 대하여 설명할 수 있다. • 액체 크로마토그래피의 기기 구성 역할과 조작법을 정확하게 설명할 수 있다. • 액체 크로마토그래피를 이용하여 성분을 분석하고 화장품분석 응용에 있어서의 중요성을 알 수 있다.
2. HPLC에 대해서 • 혼합물속 의 성분이 2가지의 상인 이동상과, 고정상에 분배에 의해 분리되는 물리적인 분리 법으로 크로마토그램을 그려내는 시스템이다. • 높은감도로 쉽고 정확하게 정량할 수 있고, 비휘발성 성분 또는 열적으로 불안정한 물질을 쉽게 분리 할 수 있다.
3. HPLC 의 hardware 구성 이동상 시료용액을 컬럼에 주입하면 이동상은 시료를 이동시킨다. 펌프 용매를 흡입하여 전 기기에 전달해주는 역할을 한다. 시료주입기 분석물질을 용매의 흐름에 연결시켜주는 역할을 한다. 검출기 충진물, 시료, 용매의 상호 작용에 의해 혼합물 속의 분석 대상물질을 분리한다. 데이터 장치 분석대상물질을 시간 간격에 따라 기기적으로인지하여 전기적 신호로 바꾸어 준다.
4. 조작법 • 펌프의 전원을 키고 메뉴에서 FLOW를 맞추고 유속을 정한 후 RUN을누른다. • 시료주입기와 검출기의 전원을 키고 컴퓨터 시스템을 작동시킨다. • 검출기에서 분석하고 자는 물질의 파장을 정하고 AUTO ZERO를 눌러 변하지 않으면 분석을 시작한다. • 분석하기 전에 펌프에 연결된 용매의 흐름을 확인한다.
5. 방부제 분석 • 실험방법 - 0.1%표준용액: 주사기로 2㎛이하를 취해 분석한다. (시료를 주입한 후 injection방향으로 돌려 준다.) - 혼합용액, 시료용액 : 주사기로 40㎛이상을 취해 분석한다. - 시료주입기 세척 : 용액을 시료주입부에 주입한 후 Load방향으로 돌려서 주입주사기를 이용하여 메탄올로 10~20번 정도 세척한다. 유속 : ml/min 분석시간 : 10분 이동상 : 70% 메탄올컬럼: c18 파장 : 254 분석조건 : isocratic
5. 방부제 분석 • 0.1% MP, EP, PP, BP 표준용액 만들기 - 비이커에 방부제를 0.1g을 정밀하게 달아 메탄올로 녹여주면서 100ml용량 플라스크에 넣어준다. 비이커에 남아있는 방부제가 없도록 표시선까지 계속 헹구어주면서 넣는다. 각각 해당하는 방부제도 같은 방법으로 표준 용액을 만들어 준다. - 0.1% 표준 용액을 만들어 방부제의 피크가 어느 부분에서 나오는지 확인하고,0.1% 표준용액을 희석시켜 0.001%, 0.003%, 0.005%, 0.007% 혼합용액을 만들어 분석시간을 단축시킨다.
5. 방부제 분석 • 0.001% MP, EP, PP, BP 혼합용액 만들기 • - 각각 방부제의 0.1%표준용액 1ml를 취하여 100ml 용량플라스크에 넣고 메탄올로 표시선까지 채운 다음 잘 혼합되도록 섞어준다. • 0.003%, 0.005%, 0.007% 혼합용액도 같은 방법으로 만들어 준다. MV = M’V’ 0.1% × xml = 0.001% × 100ml
5. 마사지크림 방부제 분석 - 100ml 용량플라스크에 제품 2g을 주사기로 취한다. (벽면에 묻지 않게 주의한다) 메탄올로 채운 다음 흔들어 제품과 잘 섞이게 한다. 잘 섞이지 않을 경우 메탄올을 표시선까지 채워 sonication을 시켜준다. 제품과 메탄올이 적당히 섞이면 마이크로 실린지로 시료용액을 두·세번 정도 걸러 준다. • 시료용액 만들기 * 마사지 크림 : MP 함량 0.2% PP함량 0.1% 제품의 방부제함량 구하는 방법 방부제함량 = (g) / 시료를 취한 양(g)× 100
HPLC에서 정성분석과 정량분석 • 정성분석 - 분리된 화합물의 머무름 시간과 표준물질의 머무름시간의 일치를 확인하여 같은 화합물임을 확인 • 정량분석 - 표준화합물의 농도를 다르게하여 얻은 피크의 면적과 농도와의 관계식(검량선식)을 구하고 분석용액의 크로마토그램에서의 같은 머무름시간의 피크면적을 구하여 검량선식으로 농도를 계산하여 분석시료의 농도를 알 수 있다.
