1 / 43

Phaûn öùng KHAÙNG NGUYEÂN – KHAÙNG THEÅ

Phaûn öùng KHAÙNG NGUYEÂN – KHAÙNG THEÅ. Phaïm Huøng Vaân. Phaûn öùng tuï AGGLUTINATION. KN daïng haït. Khaùng theå. TUÏ TRÖÏC TIEÁP (DIRECT AGGLUTINATION).

ethan-chase
Download Presentation

Phaûn öùng KHAÙNG NGUYEÂN – KHAÙNG THEÅ

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Phaûn öùng KHAÙNG NGUYEÂN – KHAÙNG THEÅ Phaïm Huøng Vaân

  2. Phaûn öùng tuïAGGLUTINATION

  3. KN daïng haït Khaùng theå TUÏ TRÖÏC TIEÁP (DIRECT AGGLUTINATION) Tuï tröïc tieáp Hoaù mieãn dòch ñònh type/group huyeát thanh cuûa vi khuaån Huyeát thanh hoïc tìm khaùng theå ñaëc hieäu vi khuaån (Widal, Weil-Felix…)

  4. Khaùng theå KN hoaø tan gaén leân beà maët hoàng caàu TUÏ HAÏT (PARTICLE AGGLUTINATION)TUÏ HOÀNG CAÀU THUÏ ÑOÄNG (PASSIVE HEAMAGGLUTINATION) Tuï haït Huyeát thanh hoïc tìm khaùng theå ñaëc hieäu (TPHA, PHA tìm khaùng theå khaùng F1 dòch haïch…)

  5. Maãu thöû coù KN muoán tìm KT ñaëc hieäu KN muoán tìm Phöùc hôïp KN-KT HC ñaõ gaén KN HC khoâng tuï KT ñaëc hieäu KN muoán tìm KT coøn töï do HC ñaõ gaén KN HC tuï laïi TUÏ HAÏT (PARTICLE AGGLUTINATION)NGAÊN TUÏ HOÀNG CAÀU (HAEMAGGLUTINATION INHIBITION) Maãu thöû khoâng coù KN muoán tìm Ngaên tuï hoàng caàu Huyeát thanh hoïc tìm khaùng nguyeân ñaëc hieäu (HCG…)

  6. Haït latex (polystyrene 0.81µm) gaén khaùng theå ñaëc hieäu khaùng nguyeân Khaùng nguyeân hoaø tan Haït latex tuï laïi TUÏ HAÏT (PARTICLE AGGLUTINATION)TUÏ LATEX (LATEX AGGLUTINATION) Tuï latex Phaùt hieän khaùng nguyeân hoaø tan (Meningitex, Rotalex…)

  7. Thöøa khaùng nguyeân KHOÂNG TUÏ Khaùng nguyeân/khaùng theå töông xöùng TUÏ Thöøa khaùng theå KHOÂNG TUÏ PHAÛN ÖÙNG TUÏHIEÄN TÖÔÏNG TIEÀN VUØNG (PROZONE)

  8. Phaûn öùng tuûaPRECIPITATION

  9. KHAÙNG THEÅ MAËT KEÁT TUÛA KHAÙNG NGUYEÂN TUÛA TRONG OÁNG (OUDIN) Tuûa trong oáng Ñònh type vi khuaån döïa vaøo khaùng nguyeân nang

  10. Treân baûn thaïch (agarose, agar noble), khoan 2 gieâng, 1 gieâng cho KN, moät gieáng cho KT KN KT Trong thôøi gian uû (To PTN, hoäp aåm), KN vaø KT khueách taùn vaøo chung quanh gieáng trong thaïch Söï keát hôïp KN vaø KT seõ hình thaønh vaïch keát tuûa thaáy ñöôïc giöõa hai gieáng trong thaïch TUÛA TRONG THAÏCH (OUCHTERLONY)

  11. a b KN B b b a a b KN A c b a OUCHTERLONYÖÙng duïng phaân tích söï ñoàng nhaát a Söï ñoàng nhaát c d b KN A KN A Khoâng ñoàng nhaát c KN B KN B b b d a KT a a b b KN A KN B Ñoàng nhaát hoaøn toaøn KN A KN B b b b b KT a a KN A KN B Ñoàng nhaát moät phaàn KT

  12. Quan heä noàng ñoä Quan heä troïng löôïng phaân töû (MW) mwKN = mwKT cKN = cKT cKN > cKT mwKN > mwKT cKN < cKT mwKN < mwKT OUCHTERLONYÖÙng duïng phaân tích quan heä noàng ñoä vaø MW

  13. ÑIEÄN DI MIEÃN DÒCHIMMUNO-ELECTROPHORESISNguyeân taéc Duøng ñieän di ñeå taùch bieät caùc khaùng nguyeân protein ñònh vò treân nhöõng vò trí khaùc nhau treân baûn thaïch ñieän di, sau ñoù phaùt hieän caùc khaùng nguyeân naøy baèng phaûn öùng mieãn dòch keát tuûa. Baûn thaïch ñieän di laø baûn thaïch agarose hay agar noble pha trong dung dòch ñieän di laû ñeäm veronal pH 8.6

  14. Daây noái cöïc döông maùy caáp ñieän cho ñieän di Daây noái cöïc aâm maùy caáp ñieän cho ñieän di + - Baûn thaïch ñieän di Dung dòch ñieän di:ñeäm Veronal pH 8.6 Caàu noái:giaáy loïc daøy Ñieän cöïc döông: daây baïch kim Ñieän cöïc aâm: daây baïch kim ÑIEÄN DI MIEÃN DÒCHCaáu taïo moät buoàng ñieän di naèm

  15. Huyeát thanh thöû _ + Huyeát thanh chöùng Löïc noäi ñieän thaåm thaáu Löïc ñieän tröôøng ÑIEÄN DI MIEÃN DÒCHkhaùng nguyeân protein trong huyeát thanh ngöôøi Alb----- 1---- 2--- -- -

  16. _ +   2 1 Alb Sau khi hoaøn taát ñieän di, cho vaøo raõnh caùc loaïi khaùng theå khaùng khaùng nguyeân protein huyeát thanh ngöôøi ÑIEÄN DI MIEÃN DÒCHkhaùng nguyeân protein trong huyeát thanh ngöôøi

  17. HT thöû HT chöùng   2 1 Alb Neáu cho vaøo raõnh khaùng theå khaùng taát caû thaønh phaàn khaùng nguyeân protein huyeát thanh ngöôøi ÑIEÄN DI MIEÃN DÒCHkhaùng nguyeân protein trong huyeát thanh ngöôøi Phaùt hieän söï baát thöôøng treân huyeát thanh thöû nhôø so vôùi huyeát thanh chöùng, caàn thöïc hieän ñieän di mieãn dòch tieáp ñeå phaùt hieän baát thöôøng treân khaùng nguyeân protein naøo cuûa huyeát thanh thöû

  18. HT thöû HT chöùng   2 1 Alb Cho vaøo raõnh khaùng theå IgG ngöôøi, nhìn thaày roõ söï baát thöôøng laø ôû thaønh phaàn IgG trong huyeát thanh thöû ÑIEÄN DI MIEÃN DÒCHkhaùng nguyeân protein trong huyeát thanh ngöôøi

  19. Caùc noàng ñoä chuaàn KNC1/10 C1/20 C1/40 C1/80 C1/160 Treân baûn thaïch (agarose, agar noble)coù pha saün khaùng theå, khoan hai haøng gieáng, moät haøng cho caùc noäng ñoä chuaån cuûa khaùng nguyeân, moät haøng cho caùc khaùng nguyeân thöû ñeå bieát noàng ñoä. KN phaûi ño noàng ñoäT1 T2 T3 T4 T5 d3 d5 d1 d2 d4 Trong thôøi gian uû, KN khueách taùn vaøo trong thaïch. Söï keát hôïp KN vôùi khaùng theå trong thaïch seõ hình thaønh nhöõng voøng keát tuûa xung quanh gieáng. Ñöôøng kính voøng keát tuûa tyû leä thuaän vôùi noàng ñoä KN coù trong gieáng dT1 dT2 dT3 dT4 dT5 MANCINISingle radical immuno diffusionNguyeân taéc

  20. Log2 C d3 d5 d1 C1/10 d2 d4 C1/20 T4 C1/40 T3 T5 dT1 dT2 dT3 dT4 dT5 C1/80 C1/160 Coù theå tính ñöôïc noàng ñoä cuûa T1 vaø T2 khoâng? d5 d4 dT3 d3 d2 d1 dT5 dT4 Dmm MANCINIÖÙng duïng ñònh löôïng noàng ñoä KN

  21. Treân baûn thaïch ñieän di (agarose, agar noble), khoan 2 gieâng, 1 gieáng cho KN (gaàn cöïc [-]), moät gieáng cho KT (gaàn cöïc [-]) - - + + KN KT Trong thôøi gian ñieän di (22.5V/cm chieàu daøi, hay 7-8mA/cm chieàu roäng), KN di chuyeån veà cöïc +, KT di chuyeån veà cöïc - Söï keát hôïp KN vaø KT seõ hình thaønh vaïch keát tuûa thaáy ñöôïc giöõa hai gieáng trong thaïch ÑIEÄN DI MIEÃN DÒCH ÑOÁI LÖUCounter current immuno-electrophoresis ÖÙng duïng: Phaùt hieän khaùng nguyeân hoaø tan caùc vi khuaån gaây VMNM, Rotavirus, HBsAg…

  22. Phaûn öùng keát hôïp boå theåCOMPLEMENT FIXATION

  23. KT ñaëc hieäu muoán tìm Phöùc hôïp KN-KTtieâu thuï heát boå theå HCC-HCC HC coøn nguyeân veïn KN ñaëc hieäu KT muoán tìm KN ñaëc hieäu KT muoán tìm Boå theå Boå theå Boå theå khoâng bò tieâu thuï HCC-HCC bò boå theå taán coâng, HCC bò ly giaûi HCC-HCC HEÄ THOÁNG THÖÛ HEÄ THOÁNG CHÆ THÒ Maãu thöû khoâng coù KT ñaëc hieäu muoán tìm ÖÙng duïng: Tìm khaùng theå giang mai (BW), ñònh type virus…

  24. Phaûn öùng trung hoaøNEUTRALISATION

  25. Tuï hoàng caàu (KN cuùm, arbovirus…) Ly giaûi hoàng caàu (KN Streptolysin O…) Khaùng nguyeân gaây hieäu quaû sinh hoïc Khaùng nguyeân gaây hieäu quaû sinh hoïc Khaùng nguyeân khoâng bò KT trung hoøa Gaây cheát chuoät (Caùc ñoäc toá) Huyû hoaïi teá baøo(Virus, ñoäc toá…) Maãu thöû khoâng coù khaùng theå ñaëc hieäu

  26. Ngaên tuï hoàng caàu (HI [+]) Hoàng caàu khoâng bò ly giaûi (ASO [+]) Hieäu quaû sinh hoïc cuûa khaùng nguyeân bò trung hoøa Maãu thöû coù khaùng theå ñaëc hieäu Khaùng nguyeân gaây hieäu quaû sinh hoïc Khaùng nguyeân bò KT trung hoøa Baûo veä chuoät khoâng bò cheát (LD50) Baûo veä caáy teá baøo(CPE50)

  27. Phaûn öùng mieãn dòch huyønh quangIMMUNO-FLUORESCENT

  28. Khaùng nguyeân daïng haït (vi khuaån, virus…) muoán tìm hay muoái ñònh type, group huyeát thanh Khaùng theå ñaëc hieäu ñaùnh daáu huyønh quang (HQ) Khaùng theå baùm vaøo khaùng nguyeân, laøm khaùng nguyeân bò ñaùnh daáu HQ Thaáy ñöôïc khaùng nguyeân phaùt HQ khi xem qua kính hieån vi HQ MDHQ TRÖÏC TIEÁPDirect immuno-fluorescent ÖÙng duïng Hoaù mieãn dòch hoïc ñònh type hay group huyeát thanh vi khuaån, virus…; Tìm vi khuaån, vi rus tröïc tieáp töø beänh phaåm

  29. Khaùng nguyeân daïng haït (vi khuaån, virus, teá baøo caáy virus…) ñaõ bieát ñaëc hieäu KT muoán tìm Maãu thöû coù KT ñaëc hieäu muoán tìm Khaùng theå baùm vaøo khaùng nguyeân Coäng hôïp: Khaùng theå gaén HQ ñaëc hieäu loaøi khaùng theå muoán tìm Thaáy ñöôïc khaùng nguyeân phaùt HQ khi xem qua kính hieån vi HQ Coäng hôïp gaén vaøo khaùng theå ñaëc hieäu laøm phöùc hôïp KN-KT bò ñaùnh daàu HQ MDHQ GIAÙN TIEÁPIndirect immuno-fluorescent ÖÙng duïngHuyeát thanh hoïc tìm khaùng theå ñaëc hieäu (vd: KT giang mai, KT khaùng Chlamydia…

  30. Phaûn öùng mieãn dòch haáp phuï gaén menENZYME LINKED IMMUNO SORBENT ASSAY

  31. Coäng hôïp laø khaùng theå gaén men vaø ñaëc hieäu KN muoán tìm Cô chaát sinh maøu (TMB, OPD…) Maãu thöû chöùa KN muoán tìm Gieáng ELISA gaén KT ñaëc hieäu KN muoán tìm KN bò KT ñaëc hieäutoùm baét treân gieáng Coäng hôïp gaén vaøo KN nhôø vaäy ñaùnh daáu men phöùc hôïp KN-KT Xuaát hieän maøu, nhôø vaäy coù theá phaùt hieän vaø ñònh löôïng ñöôïc KN döïa vaøo trò soá OD ELISA toùm baét khaùng nguyeânAntigen capture ELISA

  32. Coäng hôïp laø khaùng theå gaén men vaø ñaëc hieäu loaøi KT muoán tìm Cô chaát sinh maøu (TMB, OPD…) Maãu thöû chöùa KT muoán tìm Gieáng ELISA gaén KN ñaëc hieäu KT muoán tìm KT gaén vaøo KN vaø bòtoùm baét treân gieáng Coäng hôïp gaén vaøo KT nhôø vaäy ñaùnh daáu men phöùc hôïp KN-KT Xuaát hieän maøu, nhôø vaäy coù theá phaùt hieän vaø ñònh löôïng ñöôïc KN döïa vaøo trò soá OD ELISA phaùt hieän khaùng theåAntibody detection ELISA Tuyø coäng hôïp ñaëc hieäp lôùp khaùng theå naøo (IgG hay IgM…) maø coù theå phaùt hieän KT ñaëc hieäu muoán tìm laø thuoác lôùp naøo, nhôø vaäy coù theå phaân bieät ñöôïc beänh laø ñang maéc hay laø ñaõ maéc…

  33. Coäng hôïp laø khaùng theå gaén men vaø ñaëc hieäu loaøi KT muoán tìm Cô chaát sinh maøu (TMB, OPD…) Maãu thöû chöùa KT muoán tìm Dung dòch chöùa KT ñaõ bieát khaùc loaøi ñaëc hieäu KN Gieáng ELISA gaén KN ñaëc hieäu KT muoán tìm KT muoán tìm caïnh tranh vôùi KT ñaõ bieát ñeå gaén vaøo KN vaø bòtoùm baét treân gieáng Coäng hôïp gaén vaøo KT nhôø vaäy ñaùnh daáu men phöùc hôïp KN-KT Xuaát hieän maøu, nhôø vaäy coù theá phaùt hieän vaø ñònh löôïng ñöôïc KN döïa vaøo trò soá OD COMPETETIVE ELISA ELISA caïnh tranh phaùt hieän khaùng theå Tuyø coäng hôïp ñaëc hieäp lôùp khaùng theå naøo (IgG hay IgM…) maø coù theå phaùt hieän KT ñaëc hieäu muoán tìm laø thuoác lôùp naøo, nhôø vaäy coù theå phaân bieät ñöôïc beänh laø ñang maéc hay laø ñaõ maéc…

  34. PLATELISA M. PNEUMONIAE IgG72776 PLATELISA M. PNEUMONIAE IgM72777 ELISA phaùt hieän IgM vaø/hay IgG trong huyeát thanh beänh nhaân ñaëc hieäu M. pneumoniae CHAÅN ÑOAÙN PHAÙT HIEÄNMycoplasma pneumoniae

  35. ELISA phaùt hieän IgM vaø/hay IgG trong huyeát thanh beänh nhaân ñaëc hieäu C. pneumoniae CHLAMYDIA PNEUMONIAE IgM EIA ThermoLabsystem 61 11 320 CHLAMYDIA PNEUMONIAE IgG EIAThermoLabsystem 61 11 300 CHAÅN ÑOAÙN PHAÙT HIEÄNChlamydia pneumoniae

  36. Phaûn öùng saéc kyù mieãn dòchIMMUNO-CHROMATOGRAPHY(Immuno-lateral flow)

  37. Khaùng theå ñôn doøng ñöôïc gaén haït vaøngtheå keo vaø ñaëc hieäu khaùng nguyeân Carbohydrate C cuûa S. pyogenes PHAÙT HIEÄN KHAÙNG NGUYEÂNVd: Phaùt hieän S. pyogenes trong quyeät hoïng Khaùng theå ñaëc hieäu khaùng nguyeân Carbohydrate C cuûa S. pyogenes Khaùng theå ñaëc hieäu khaùng theå chuoät

  38. Nhaïy caûm 50 – 90%Ñaëc hieäu 95%

  39. Khaùng nguyeân HBSAg gaén haït vaøng theå keo PHAÙT HIEÄN KHAÙNG THEÅVd: Phaùt hieän HBSAb trong huyeát thanh Khaùng theå ñaëc hieäu loaøi khaùng theå HBsAb (anti-human IgG) Khaùng theå ñaëc hieäu HBsBg

  40. Nhaïy caûm 50 – 90%Ñaëc hieäu 95%

  41. ÖÙng duïng phaûn öùng KN-KTtrong phaùt hieän taùc nhaân VSV gaây nhieãm truøng • Huyeát thanh hoïc (serology) Phaùt hieän khaùng theå ñaëc hieäu VSV trong huyeát thanh beänh nhaân • Hoaù mieãn dòch (immuno-chemical) Phaùt hieän khaùng nguyeân ñaëc hieäu cuûa VSV trong beänh phaåm

  42. Bieän luaän keát quaûHUYEÁT THANH HOÏC • Keát quaû luoân ñònh löôïng (hieäu giaù, trò soá OD..) • Ñöôïc goïi laø [+] khi giaù trò ñònh löôïng cao hôn giaù trò caét • Keát quaû [+] chöa theå coi laø ñang mang maàm beänh, maø phaûi döïa vaøo Ñoäng hoïc KT cuûa huyeát thanh keùp Giaù trò ñònh löôïng cuûa KT xuaát hieän sôùm (IgM)

  43. Bieän luaän keát quaûHOAÙ MIEÃN DÒCH • Keát quaû coù theå khoâng ñònh löôïng hay ñònh löôïng (hieäu giaù, trò soá OD..) • Ñöôïc goïi laø [+] khi giaù trò ñònh löôïng cao hôn giaù trò caét, hay keát quaû phaân bieät roõ vôùi chöùng [-] • Keát quaû [+] coù theå coi laø ñang mang maàm beänh neáu khaùng nguyeân phaùt hieän ñöôïc laø ñaëc hieäu cao

More Related