Theoretical Applied Genetics 2003

1. Molecular markers closely linked to fusarium resistance genes in chickpea show siginificant alignments to pathogenes-related genes located on arabidopsis chromosomes 1 and 5 Theoretical Applied Genetics 2003 Benko-Iseppon, A.M.; Winter, P.; Huettel, B.; Staginnus, C.; Kahl, G.

2. Marcadores moleculares ligados a genes de resistência a fusarium em grão-de-bico mostram alinhamentos significativos a genes relacionado à patogênese localizados em cromossomos 1 e 5 de arabidopsis Luiz Nali Isaac Farias Ferreira Neto

3. Resumo Alinhamento significativo (cromossomo 1 e 5 de Arabidopsis) Populações resistentes e suscetíveis (F7-F8) SCAR Seleção de primers (DAF +BSA) Busca de Homologia Excisão Clonagem Seqüenciamento Produto amplificado BLAST-X

4. Introdução • Importância econômica • Distribuição geográfica do Grão-de-bico • Fatores limitantes de produção • Situação atual do melhoramento e perspectivas

6. Objetivo Mapeamento genético direcionado a regiões de resistência a fusarium em populações de grão-de-bico através de análise de bulks segregantes

7. Material e Métodos • ICC-4978 (parental resistente) X Cicer reticulatum PI489777 (parental suscetível) • 131 plantas de populações F7-F8 (RILs) • Extração e quantificação de DNA

8. Análise de bulks segregantes (BSA)

9. Amplificação de DNA 35 ºC 95 ºC

10. Análise de ligações

11. Isolamento e clonagem Qiaquick Kit Vetor pGEM -T E. Coli DH10-B, DH5-α ou SURE Eletroporação Seleção de plasmídeos

12. Seqüenciamento dos fragmentos

13. Análise das seqüências (BLAST-X e BLAST-N)

14. Resultados 2ª Etapa 174 primers Parentais 7RI 7SI 24 primers 19 primers selecionados (Grupo de ligação 2 do Foc-4 e foc-5) 1ª Etapa (12 indivíduos) 432 primers BSA + DAF BR Bs 174 primers polimórficos

15. Primers selecionados

16. BLAST-X de seqüências clonadas

17. Mapa de ligação (Mapmaker)

18. Primers SCAR derivados de marcadores DAF a partir do PRIMER 3

19. Conclusões • Os marcadores produzidos aumentaram a densidade de marcas nos flancos do gene de resistência Foc-4; • O fragmento oriundo do primer OP-P15-3 obteve similaridade à proteína N-hidroxicinamol/benzotransferase (regulador de fitoalexina) encontrado no cromossomo 5 na A. thaliana; • Encontrou-se no fragmento do primer OP-P15-3 uma pequena seqüência com função similar a uma proteína de resistência (semelhante a um retrotransposon) presente em A. thaliana e Tabacum as quais são ricasem seqüências de leucina; • O fragmento oriundo do primer OP-M20-3 possui similaridade ao gene de reparo MutS2 existente no cromossomo 5 da A. thaliana;

20. Alguns marcadores moleculares presentes no mesmo grupo de ligação do gene de resistência ao Fusarium, apresentaram alinhamentos significativos a genes relacionados a patogenicidade localizados nos cromossomos 1 e 5 da A. thaliana; • Por outro lado, não foi possível localizar nenhum marcador suficientemente próximo aos loci de resistência (Foc-4 e Foc-5) para permitir uma clonagem baseado no mapa.

21. Etapas futuras Está sendo gerado uma biblioteca de BAC para mapeamento físico com utilização de SCARs, onde irá permitir a clonagem dos genes de resistência.

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