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体外分析技术

体外分析技术. 仁济医院核医学科 朱翠英. 体外分析技术 主要用来测定患者血清或其他体液样品内的激素和其他生物活性物质及药物浓度等。. 体外分析以放射免疫分析为代表 1959 年 Berson 和 Yalow 建立 1979 年 Yalow 获 诺贝尔奖. 放射免疫的发展. 1 、建立和推广免疫放射分析技术 2 、发展了非放射性标记免疫分析技术 化学发光分析 酶放大发光分析 电化学发光分析 荧光时间分辨分析. 酶放大发光分析. 电化学发光. 时间分辨荧光分析. 化学发光分析. 一、放射免疫分析. 原理

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  1. 体外分析技术 仁济医院核医学科 朱翠英

  2. 体外分析技术主要用来测定患者血清或其他体液样品内的激素和其他生物活性物质及药物浓度等。体外分析技术主要用来测定患者血清或其他体液样品内的激素和其他生物活性物质及药物浓度等。

  3. 体外分析以放射免疫分析为代表 1959年Berson和Yalow建立 1979年Yalow获诺贝尔奖

  4. 放射免疫的发展 1、建立和推广免疫放射分析技术 2、发展了非放射性标记免疫分析技术 化学发光分析 酶放大发光分析 电化学发光分析 荧光时间分辨分析

  5. 酶放大发光分析

  6. 电化学发光

  7. 时间分辨荧光分析

  8. 化学发光分析

  9. 一、放射免疫分析

  10. 原理 1、以放射性标记抗原为示踪剂 2、以非标记抗原（标准抗原或待测抗原）为检测对象 3、共同与限量的特异性抗体进行竞争性免疫结合反应，以定量分析被测定之抗原

  11. 放射免疫分析基本反应式 *Ag+Ab *Ag.Ab + AgFB Ag . Ab 因Ag（变量）与*Ag .Ab（自变量）间存在着逆函数关系，而可定量

  12. 60 样本1 *Ag•Ab ( B/ T %) 50 40 样本2 30 20 10 10 50 100 Ag（ug/L; nmol/L) 图 6-2 RIA 剂量反应曲线

  13. 建立放免分析的四大要素 1、高纯度的抗原 2、高特异的抗体 3、高比度的标记抗原 4、高效的分离技术

  14. 建立放免分析的四大要素 （一）高纯度的抗原 抗原纯度直接影响方法学的特异性和灵敏度 1、放射性标记物纯度高 2、抗体抗原结合好 3、标准品定量准确

  15. （二）高特异的抗体 1、特异性强 （指被测物的类似物的交叉） 2、亲和力高 （指抗体-抗原结合能力） 3、稀释度大 （指抗体的最佳稀释度）

  16. （三）高比度的标记抗原 1、常用核素：125I、3H 2、比放度高：灵敏度高。 （要求保持原有理化性质，生化特性，免疫活性）

  17. （四）高效的分离技术 分离抗原抗体复合物（B）和游离的标记抗原（F） 理想的分离技术： 1. 分离完全 2. 不干扰原有的结合反应 3. 非特异结合率低 4. 简便，快速，外界影响少

  18. 放射免疫分析的优点 1、灵敏度高 2、特异性强 3、重复性好 4、用血量少 5、应用范围广 6、易规格化 7、无辐射损伤，孕妇婴幼儿皆宜

  19. 二 免疫放射分析（Immunoradiometric assay IRMA） 1968 Miles和Hales建立 非竞争性放射免疫分析

  20. IRMA的主要特点 1 标记物为Ab 2 反应物Ab为过量 基本反应式为：Ag+*Ab=Ag.*Ab+*Ab

  21. IRMA和RIA曲线形态比较 RIA IRMA 结合率（%） Ag剂量

  22. IRMA和RIA的比较

  23. IRMA的主要优点稳定性好、灵敏度佳 1、标记抗体稳定性比标记抗原好 2、可以检测到10-15/g 3、温育的影响小

  24. IRMA应用的主要限制 1、不适宜测定小分子物质 2、需要大量的抗体，直到单克隆抗体的产生才得以普及推广

  25. 三、质量控制 基于试剂物质和被测物质都是活性物质，所以质量控制极为重要，且极为艰巨，需十分注意。 主要指标为：稳定性、精密度、灵敏度、准确度 作为临床实验室来说主要是稳定性和精密度

  26. 四、标记免疫分析的发展 （一）非放射性标记技术 化学发光分析常采用吖啶酯作为发光物质 酶放大发光分析用金刚烷作为发光物质 电化学发光分析用三丙胺替代放射性核素 时间分辨荧光分析则采用镧系元素铕作标记原子。

  27. （二）自动化分析 方便、快速，减少因手工操作所致的误差。 尤适宜于临床大样本的测定。

  28. 下丘脑－垂体－甲状腺轴测定

  29. （一）血清甲状腺激素水平的测定 甲状腺是人体的重要内分泌器官 主要功能： 合成分泌甲状腺激素（甲状腺素T4,三碘甲状腺原氨酸T3）。 分泌过多或过少： 即出现甲状腺机能亢进症或甲状腺机能减退症。

  30. 血清中T3T4的代谢水平和活性之比较

  31. 参考正常值 TT3 1.0~3.0 nmol/L TT4 50~170 nmol/L FT3 2.5~7.0 pmol/L FT4 10~30 pmol/L γT3 0.5~1.2 nmol/L

  32. 临床应用 （1）甲亢 TT3 TT4 /FT3 FT4平行增高 早发甲亢时TT3/FT3升高早于TT4/FT4 治疗缓解时TT4/FT4下降先于TT3/FT3 T3型甲亢仅见TT3/FT3升高 T4型甲亢仅见TT4/FT4升高

  33. （2）甲减 先见TT4的下降TT3/FT3可正常或稍见升高。 严重时TT4/FT4。TT3/FT3均见下降。 治疗缓解后均见回升。

  34. （3）低T3综合征 见于长期体衰和慢性晚期。 如：肾衰竭、肝硬化、心肌梗死、糖尿病、恶性肿瘤等。 TT3/FT3下降，但无甲减症状，TSH正常。 TT4/FT4亦下降示病情更为严重 其时γT3上升，这是机体的生理性保护机制。

  35. （4）注意事项： TT3、TT4测定值均受TBG影响。如有TBG影响因素存在，应测定FT3、FT4 TBG上升：妊娠、雌激素、奋乃静、肝炎、先天性TBG增高等 TBG下降：肾病综合征、肝衰竭低蛋白血症、强的松雄激素、水杨酸、先天性TBG低下等

  36. （二）促甲状腺激素（TSH）测定 原理： TSH系垂体前叶分泌，作用于甲状腺，促进甲状腺激素的合成和分泌。下丘脑分泌之促甲状腺激素释放激素可促进TSH之分泌，但又受甲状腺激素的负反馈抑制。甲亢时明显降低，原发性甲减时明显增高。

  37. 参考正常值： sTSH-IRMA 0.3~5.0 mlu/L

  38. TSH的临床应用 （1）为甲状腺功能测定的首选检查 （2）甲状腺疾病的TSH恢复正常，是病情缓解/痊愈的重要指标。

  39. 甲状腺机能体外诊断程序 升高 甲亢 需测甲状腺功能者 低下 FT4 正常 FT3 亚临床甲亢 正常 TSH 正常 正常甲状腺机能 （IRMA) 升高 FT4 正常 亚临床甲减 降低 原发性甲减

  40. 三、甲状腺自身免疫性抗体 近年来研究已证实慢性甲状腺炎、甲亢、甲减多为自身免疫性疾病。目前可供临床测定的为： 甲状腺球蛋白抗体 TGAb 甲状腺过氧化酶抗体 TPOAb TSH受体抗体 TRAb

  41. 正常参考值： TGAb <34 IU/L TPOAb <35 IU/L TRAb <5 IU/L 注：国内尚有采用TGAb，TMAb结合率法，其阳性率较低

  42. 临床应用： 1、TGAb、TPOAb主要用于慢性淋巴性甲状腺炎的诊断。 2、TRAb主要用于Graves甲亢的诊断和Graves甲亢治疗估价和停药判断。

  43. 肿瘤标志物测定 肿瘤标志物:凡可以特异于癌细胞产生的物质

  44. 人类常见的肿瘤

  45. 主要肿瘤标志物分类 癌胚抗原类 甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA）胰肿癌胚胎抗原（POA） 糖类抗原类 carbohydrate antigen（CA） CA19-9 CA125 CA15-3 CA72-4CA50CA21-1 CA 242

  46. 其他肿瘤相关抗原类 组织多肽抗原（TPA） 甲状腺球蛋白（TG） 前列腺特异抗原（PSA） 鳞状上皮癌抗原（SCC） 同功酶类 神经系统特异烯醇化酶（NSE） 前列腺酸性磷酸酶（PAP ）

  47. 激素和其他类 HCG ACTH 降钙素 泌乳素 胃泌素 胰岛素 胰高糖素 唾液酸 多肽 宿主反应标志物类 铁蛋白 β2微球蛋白（β2M）

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