Lip z enzimaktivt s m r se
Download
1 / 11

- PowerPoint PPT Presentation


  • 94 Views
  • Uploaded on

Lipáz enzimaktivtás mérése. Lipidek. Vegyületek heterogén csoportja Vízoldhatatlan Organizmusokban általában fehérjékkel (lipoproteinek), szénhidrátokkal (liposzaharidok) képzett vegyületei fordulnak elő A lipidek nagy része triglicerid formájában kerül a talajba

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about '' - ellema


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript

Lipidek
Lipidek

  • Vegyületek heterogén csoportja

  • Vízoldhatatlan

  • Organizmusokban általában fehérjékkel (lipoproteinek), szénhidrátokkal (liposzaharidok) képzett vegyületei fordulnak elő

  • A lipidek nagy része triglicerid formájában kerül a talajba

  • A lebontás első lépését a lipáz (triglicerid-acilhidroláz) enzim végzi

  • A reakció során zsírsavak és glicerin szabadul fel


Zs rsavak
Zsírsavak

  • Hosszú szénláncú karbonsavak

  • Lehetnek telített-, telítetlen-, keto-, hidroxi-, epoxi-, elágazó szénláncú, vagy gyűrűs, savak.

  • A leggyakoribbak a telítetlen zsírsavak cisz izomerjei


Zs rsavak bont sa
Zsírsavak bontása

  • Aerob környezetben

    • β-oxidáció: 2 szénatomos darabok lehasadásával bomlanak, melynek végterméke CO2 és víz

    • Ritkább esetben α-, vagy σ-oxidáció megy végbe. Ez esetben az oxidáció nem teljes

  • Anaerob környezetben a zsírsavak feldúsulnak a környezetben



Az elj r s alapelve
Az eljárás alapelve

  • A talajt 4-metil-umbelliferon-heptanoáttal (4- MUH) inkubáljuk 10 percen át 30°C-on.

  • A talaj lipáz aktivitására a felszabaduló, fluoreszcens 4-metil-umbelliferon (4-MU) mennyiségéből következtethetünk.

  • Szükséges anyagok és felszerelések:

    • Fluoriméter

    • Rázó vízfürdő

    • Centrifuga, centrifuga csövek (10 ml)

    • Erlenmeyer lombikok (25 ml)


Sz ks ges vegy letek oldatok
Szükséges vegyületek, oldatok

  • Etilén-glikol-monometil-éter

  • 4-MUH (10mM)

    • Oldjunk fel 58 mg 4-MUH-t 10 ml etilén-glikol-monometil-éterben, majd töltsük fel ugyanezzel az oldószerrel 20 ml-re (tárolás -20°C-on). Az oldatot naponta készítsük el!

  • TRIS (2-amino-2-hidroximetil-propán-1,3-diol) puffer (0,1 M, pH 7,5)

    • 12,11 g TRIS-t oldjunk fel 700 ml desztillált vízben, 0,1M sósavval állítsuk a pH-t 7,5-re, majd töltsük fel 1000 ml-ig desztillált vízzel

  • 4-MU standard oldat

    • 176 mg MU-t feloldunk 70 ml etilén-glikol-monometil-éterben, , majd feltöltjük ugyanezzel az oldószerrel 100 ml-re. Az oldat 4 °C-on több napig eláll.


Az elj r s
Az eljárás

  • Helyezzünk 0,1 g nedves talajmintát 25 ml-es Erlenmeyer lombikba, adjunk hozzá 4,5 ml TRIS puffert, zárjuk le és inkubáljuk 30°C-on rázó vízfürdőben 10 percig

  • Adjunk hozzá 0,5 ml 4-MUH szubsztrátot, rázzuk jól össze, zárjuk le és ismét inkubáljuk 30°C-on rázó vízfürdőben 10 percig

  • Ezután jeges vízbe helyezve a lombikot, hűtsük le a mintákat

  • Kontroll minta készítéséhez adjuk a szubsztrátodatota talaj szuszpenzióhoz amint a lombikot hűteni kezdjük

  • Ezután 2°C-on 4000 g-n centrifugáljuk a mintákat

  • Spektrofluorimetriával vizsgáljuk a felülúszóban a felszabadult 4-MU mennyiségét (gerjesztési hullámhossz: 340 nm, emissziós hullámhossz: 450 nm)


Kalibr ci s g rbe
Kalibrációs görbe

  • Hígítsuk a desztillált vízzel a 4-MU standard oldatot (1:100)

  • Helyezzünk 0,1 g talajmintát Erlenmeyer lombikba és adjunk hozzá 4,5 ml TRIS puffert, illetve 0; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 és 0,5 ml 4-MU standard oldatot

  • Adjunk 0,5; 0,4; 0,3; 0,2; 0,1 és 0 ml desztillált vizet az oldatokhoz, hogy kiegészítsük 5 ml-re

  • Folytassuk „Az eljárás” dián leírtak szerint

  • A standardekkoncenjtrációja 0, 10, 20, 30, 40, 50 nM

  • A kalibrációs görbét minden talajmintához külön kell elkészíteni


Sz m t s
Számítás

  • Korrigáljuk az eredményeket a kontroll minta alapján

  • Számítsuk az enzimiaktivtást a a következő képlet alapján:Ahol U az enzimaktivitás (nM×g-1×dwt-1×10 min-1), MU a mért 4-MU koncentráció nmol/l-ben, dwt a 1 g talajminta száraz tömege, 0,1 a felhasznált talajminta száraz tömege.


Forr s
Forrás

  • Alef, K.; Nanniperi, P.: Methods in Applied Soli Microbiology and Biochemistry, 1995


ad