三、微生物检验

5. 三、微生物检验 • (一)标本直接检查 • 1．抗原检查 • (1)免疫荧光技术：取病人唾液、尿沉 • 渣、角膜印片及皮肤切片(含毛束)， • 用荧光抗体染色检查狂犬病病毒抗 • 原。此法快速、敏感、特异性高。

6. (2)快速免疫酶联技术 • 取病人的脑组织、脑脊液、唾液腺、 • 唾液等标本检测狂犬病病毒核蛋白。 • 定量法是指标本光密度≥阴性对照 • 值+0．08为阳性。定性法为肉眼观 • 察阴性对照无色，检测标本出现黄 • 色为阳性。此法快速、敏感，阳性 • 率与荧光抗体检测法相近。

7. 2．核酸检查 • 运用RT-PCR法检测标本中狂犬病病 • 毒RNA。此法敏感、快速，特异性高。 • 有条件的实验室可推广应用。

8. 3.分离培养 • 取病人唾液、脑脊液或死后脑组 • 织接种动物，分离病毒，经中和试验 • 鉴定可确诊。但该法时间长，阳性率 • 低。

9. 4.抗体检测 • 检测抗体可采用中和试验、补体结合试 • 验、血凝抑制试验、快速免疫荧光试验、 • 酶联免疫吸附试验等。国内多采用酶联 • 免疫吸附试验进行检测。将待检血清以 • 1：50稀释，其OD值达阴性对照OD值3倍 • 以上，即P／N ≥ 3为阳性。此法多用 • 于流行病学调查，也可用于确诊。但 • 感染者抗体在临床症状出现后才能测出。

10. 5.捕捉动物观察 • 人被犬或其它动物咬伤后，检查动 • 物是否患有狂犬病，对采取防治措 • 施极为重要。一般不宜立即杀死， • 应隔离观察710天，如不发病，则没 • 有患狂犬病。如发病，应取脑海马 • 回组织切片查内基氏小体。

15. 三、微生物检验 • 1．核酸分析 • 原位滤膜杂交或点杂交。从细胞样 • 品中提取DNA，变性后用打点法吸附在 • 滤膜上，用同位素、酶或生物素标记 • 的特异性探针与滤膜上的病毒DNA杂交 • 后，用放射自显影或显色法检测杂交信 • 号。此法可检测到50个基因拷贝。

16. 2.原位杂交 • 适用于经甲醛溶液固定过的组织 • 标本，每个细胞中含10-15个病毒 • 基因拷贝方可检测到。一般使用 • 共有序列或特异性探针。

17. 3．DNA印迹 • 细胞DNA经限制性内切酶消化后，电泳分 • 离，变性，转移至尼龙膜上，在严谨条 • 件下与已知型别的标记病毒探针进行杂 • 交。一般在非严谨条件下，检测一个HPV • 拷贝需10— 100个细胞。该法是最为可靠 • 的诊断方法。

18. 4．聚合酶链式反应(PCR) • 采用直接酶标引物扩增特异性DNA序 • 列，用探针杂交法检测扩增产物。 • 该法需样品少、速度快、特异性高。

19. 第三节 细小病毒B19 • 与儿童镰刀细胞性贫血所致的造血障 • 碍、流行性红斑病、胎儿畸形及免疫 • 抑制病人的慢性感染、关节炎等有关。 • 呈小球形、无包膜的正或负链单链DNA • 分子、直径约为26nm，有VP1及VP2两 • 种衣壳蛋白，后者壳总蛋白量的95％ • 左右。

20. 微生物检验 • 检测病毒是诊断再生障碍性贫血的有效指 • 标。在病毒循环及排出结束后的数天，病 • 人出现红疹及关节痛，此时是检测细小病 • 毒B19IgM抗体最佳时间。可用ELISA测定。 • 以病毒基因中 2420～3091位核苷酸(1.4kb) • 表达的融合蛋白为抗原，检测IgG及IgM抗 • 体，也用合成的VP2检测抗体。

21. 检测病毒可用电子显微镜、对流免疫 • 电泳、RIA或EIA及核酸杂交等方法； • 也可用原位杂交、PCR等技术检测组 • 织中的细小病毒B19的DNA。