第 3 章复习重点

第3章复习重点 • 1、解释名词：热原质、菌落 • 2、简述细菌生长繁殖的条件、方式。 • 3、细菌根据其对氧气的需求不同可将分成哪几类？ • 4、细菌的代谢产物有哪些？并说明其医学意义。 • 5、培养基按物理性状不同可分为哪几类？细菌在培养基中表现的生长现象有哪些？

问题1：课程学习的目的是什么？ 认识微生物利用有益微生物控制有害微生物

问题2：如何控制有害微生物？ • 明天下午15：30在附属医院的手术室有一台阑尾切除手术，请利用你所学的消毒灭菌知识，做一份手术相关环节的消毒灭菌方案。

第四章消毒与灭菌

学习内容 • 基本概念 • 物理消毒灭菌法 • 化学消毒灭菌法 • 生物安全

学习要求 1．掌握消毒、灭菌、防腐、无菌、无菌操作的概念。 2．熟悉热力灭菌、紫外线杀菌、滤过除菌等方法的应用范围及注意事项。 3．了解：（1）常用化学消毒剂的种类、作用原理、使用对象和影响因素。（2）生物危害程度的分级、实验室生物安全防护设施。

消毒灭菌的原理及意义 • 微生物的生命活动极易受外界环境条件影响，如果环境适宜，可促进微生物的生长繁殖；剧烈的环境变化则可使微生物的生长受到抑制甚至死亡。 • 了解外界环境因素对微生物的影响，以便控制外界因素，达到利用或消灭微生物的目的。

基本概念 • 1、消毒（Disinfection）：用物理或化学方法杀死物体上病原微生物的方法。如注射前用2%的碘酒在局部皮肤涂擦；用75%的酒精棉球擦拭体温表等。用于消毒的化学药物称为消毒剂。 • 2、灭菌（ Sterilization ）：用物理或化学方法清除或杀灭物体上所有微生物（包括病原微生物、非病原微生物、繁殖体和细菌的芽胞）的方法。如高压蒸汽灭菌法灭菌用于外科手术的手术器械的方法，经灭菌后的物品将达到无菌状态。

基本概念 • 3、防腐：是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。用于防腐作用的化学药品称防腐剂。用于防腐的化学药品称为防腐剂。如在注射针剂中加入0.01%硫柳汞，防止杂菌生长。 • 4、抑菌（ Bacteriostasis ）：抑制人体内部或外部细菌生长繁殖的方法。常用的抑菌剂为各种抗生素，可在体内抑制细菌繁殖或在体外用于抑菌试验以检测细菌对抗生素的敏感性。

基本概念 • 5、无菌（ Asepsis ）：指物体上无活的微生物存在的状态。 • 6、无菌操作（ Antiseptic technique ）：防止微生物进入机体或物体的操作方法，称无菌操作或无菌技术。如外科手术，细菌接种等。 • 7、卫生清理：将微生物污染了无生命表面还原为安全水平的处理过程。如病人衣服换洗，用具、房间的卫生处理等。

第一节物理消毒灭菌法 一、热力消毒灭菌法二、辐射杀菌法三、滤过除菌法四、超声波灭菌法五、其他物理抑菌或杀菌法

温度对细菌有何影响? 适温：有利于微生物的生长繁殖，促进微生物的新陈代谢。多数微生物对低温具有很强的抵抗力。当微生物处于最低生长温度以下时，其代谢活动降低到最低水平，生长繁殖停止，但仍可长时间保持活力。常在低温下保存微生物种。低温：高温对微生物具有致死作用，常用于消毒和灭菌。高温对菌体蛋白质、核酸、酶系统等产生破坏作用，导致菌体死亡。高温：

一、热力消毒灭菌法 • 热力杀菌的原理：高温对微生物有明显的致死作用，其主要是通过变性蛋白、破坏细胞膜和降解核酸达到杀菌作用。一般细菌繁殖体在干燥状态下80℃～100℃经1h可被杀死，芽胞则需160℃～170℃经2h可被杀死。 • 方法（1）干热灭菌法（2）湿热消毒灭菌法在灭菌温度和时间相同的情况下，以湿热灭菌法效果为佳。

干热灭菌法 干热灭菌法焚烧----最彻底的灭菌方法焚烧----最彻底的灭菌方法烧灼----直接用火焰灭菌方法烧灼----直接用火焰灭菌方法干烤----加热160 ℃～180℃ 2小时干烤----加热160 ℃～180℃ 2小时（一）干热灭菌法 • 干热灭菌法需要更高的温度和较长的时间。灭菌物品主要限于玻璃器皿、油类制剂、粉剂等。有火焰灭菌和热空气灭菌二种。

（1）焚烧：仅用于废弃的污染物品或死于传染病的人或动物尸体的烧毁。在急用情况下，金属器械的灭菌，可放在糖瓷或金属盘中，倒入少许95%酒精，点烧燃烧后可达到的目的。（1）焚烧：仅用于废弃的污染物品或死于传染病的人或动物尸体的烧毁。在急用情况下，金属器械的灭菌，可放在糖瓷或金属盘中，倒入少许95%酒精，点烧燃烧后可达到的目的。（2）烧灼：直接用火焰灭菌，耐热的器皿可用烧灼法灭菌，如在微生物实验室中接种环、试管口等可在火焰中直接烧灼灭菌。（3）干烤：是利用密闭的电热干烤箱加热空气进行灭菌。干烤箱通电后，加热至160～170℃，维持2 ～ 3小时，可杀灭一切微生物包括芽胞。本法仅适用于玻璃器皿、油类制剂、粉剂等的灭菌。

烧灼 干烤

（二）湿热消毒灭菌法 （1）巴氏消毒法： 61.1-62.8℃经30min，或71.7℃经15-30秒钟，常用于消毒牛乳和酒类等。

（2）煮沸法： 水温100 ℃经5min能杀死一般细菌的繁殖体。芽胞要煮沸1-2h。2%的碳酸钠可提高水的沸点至105℃。手术器械、注射器、针头及食具等可用此法。 • （3）流通蒸气法： 10O ℃ ，蒸15-30min，可杀死细菌的繁殖体，但不能杀死芽胞。 • （4）间歇灭菌法：10O ℃ ，蒸15-30min，或75-80℃ 30-60min，每日一次，连续三日，也可达到灭菌的目的。用于不耐高温的培养基的灭菌。

（5）高压蒸气灭菌法 • 高压蒸汽灭菌法:即用高压蒸汽灭菌器进行灭菌的方法。是应用最广、最有效的灭菌方法。 • 原理：给高压蒸汽灭菌器加水、放入被灭菌物品、密闭、加热，蒸汽产生压力，随压力的增大水的沸点升高，温度也升至100℃以上，以提高灭菌的效果，缩短灭菌时间。 • 灭菌条件：常用1.02kg／cm2 （每平方英寸15磅）的压力，在12l.3℃温度下，维持15-20min，即可杀死所有微生物，达到完全灭菌的目的。 • 应用：常用于如培养基、溶液、器皿、器械、敷料、橡皮手套、工作服和小实验动物尸体等的灭菌。 • 灭菌注意：须充分排除灭菌器内原有的冷空气。

生产实践中是如何杀灭芽胞的？ • 若对肉类原料上的肉毒芽胞梭菌灭菌不彻底，它就会在成品罐头中生长繁殖并产生极毒的肉毒毒素，危害人体健康。已知它的芽孢在121℃下则仅需10min。这就要求食品加工厂在对肉类罐头进行灭菌时，应掌握在121℃下维持20min以上。 • 在外科器材灭菌中，常以有代表性的产芽孢菌——破伤风梭菌和产气荚膜梭菌这两种严重致病菌的芽孢耐热性作为灭菌程度的依据，即要在121℃灭菌10min或115℃下灭菌30min才可。 • 在实验室尤其在发酵工业中，灭菌要求更高。原因是在自然界经常会遇到耐热性最强的嗜热脂肪芽孢杆菌的污染，而一旦遭其污染，则经济损失和间接后果就十分严重。已知其芽孢在121℃下须维持12min才能杀死，由此就规定了工业培养基和发酵设备的灭菌至少要在121℃下保证维持15min以上。

高压蒸汽灭菌器

湿热与干热灭菌效果的比较 热型温度（℃）时间布层内的温度（℃）灭菌效果（h） 20层 40层 100层湿热 90-105.3 3 101 101 101.5 完全干热 130-140 4 86 72 70.5 不完全湿热比干热灭菌好的原因： 1 细菌蛋白质在有水的情况下易于凝固变性； 2 湿热穿透力强； 3 湿热蒸气有潜热存在，水蒸汽凝固成水释放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度；

二、辐射杀菌法 辐射按其性质不同分为：电离辐射和非电离辐射。其中非电离辐射包括太阳光、紫外线。 1.太阳光：是一种电磁波，分为可见光和不可见光。直射日光有强烈杀菌作用，是天然杀菌因素，紫外线是日光杀菌作用的主要因素。许多微生物在直射日光下，半小时到数小时即可死亡。芽抱的抵抗力强，经20h才死亡。 2.可见光：指在红外线和紫外线之间，肉眼可见的光线，波长400-800nm。可见光线只有微弱的杀菌作用。

（一）紫外线 • 机理：其波长在200-300nm有杀菌作用，其中以265-266nm最强，这与细菌 DNA吸收光谱一致。细菌DNA吸收紫外线后，使DNA一条链上两个相邻胸腺嘧啶共价结合成二聚体，改变了DNA的分子构型，干扰了DNA的复制和转录，导致细菌变异或死亡。 • 常用的紫外线杀菌灯波长为 253.7nm，杀菌力强而稳定。

人体细胞的切除修复系统 切补切封

紫外线 • 缺点：紫外线的穿透力不强，即使是很薄的玻璃也不能透过，所以只用物体表面消毒。 • 用途：用于不耐热物体表面和空气消毒。微生物实验室、无菌室、手术室、传染病房、种蛋室等的空气消毒。 • 注意事项：对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用时应注意防护。

（二）电离辐射 1.电离辐射：一切能引起物质电离的辐射总称，其种类很多，高速带电粒子有α粒子、β粒子、质子，不带电粒子有中子以及X射线、γ射线。 2.作用机理：其机制在于瞬间产生大量的自由基，破坏DNA的正常复制、损伤细胞结构而致细菌死亡。 3.作用特点和用途：α射线的电离辐射作用较强，穿透力弱， β射线穿透力强于α射线；X射线、γ射线的电离辐射微弱，而穿透力强。β、X 、γ射线穿透力强，用于消毒、食品保藏和育种等方面。

微波辐射灭菌器

（三）微波 是波长为1～1000mm的电磁波，可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物质，但不能穿透金属表面。热效应不均匀，灭菌效果不彻底。主要用于食品、非金属器械、检验室用品、无菌室和病室中的食品用具、药杯等的消毒。

三、滤过除菌法 通过机械阻留作用将液体或空气中细菌等微生物除去的方法，以达到无菌的目的。 1.用途：主要用于不耐热的含糖培养液、特殊培养基、血清、毒素、抗毒素、抗生素、维生素、氨基酸等的除菌和生物安全柜及空气的过滤除菌。 2.常用的滤器：有玻璃滤器、石棉滤器、薄膜滤器和空气颗粒滤器等。空气净化除菌:超净工作台、无菌隔离器、无菌操作室、实验动物室以及疫苗、药品、食品等生产中洁净厂房的空气过滤除菌。

超净工作台

四、低温与干燥 冷冻真空干燥法：在低温状态下真空抽去水分用途：保存菌种

第二节化学消毒灭菌法 一、杀菌的原理 1、使微生物蛋白质凝固与变性：致使细菌代谢发生障碍而死亡。如醇、酚以及重金属等。 2、干扰微生物酶系统和影响其代谢：如氧化剂、酚类、表面活性剂等。 3、损伤微生物膜结构：细胞细胞膜是一种半渗透性膜，控制菌体与环境间物质的正常交换。如醇类、酚类、表面活性剂等损伤细菌细胞膜，引起细胞膜的渗透性改变，导致细菌死亡。

二、适用范围 由于化学消毒剂对细菌和人体均有毒性作用，因此只能用于人体体表（皮肤及粘膜伤口）、医疗器械、排泄物及周围环境的消毒。

三、消毒剂的主要种类、浓度及用途 1 醇类：作用机制：损伤细胞膜，使菌体蛋白变性，灭活酶类浓度：乙醇70%-75% 用途：主要用于皮肤的消毒和体温计等的浸泡。 2 酚类：作用：高浓度使菌体蛋白凝固，低浓度破坏细菌的细胞膜，使胞质内容物渗出。浓度：石炭酸为2%-5 % 、来苏尔为2% 用途：地面、器具表面和皮肤的消毒。

3 表面活性剂： 机制：（1）损伤细胞（2）灭活酶类（3）蛋白质沉淀种类和用途：（1）0.05%-0.1%新洁尔灭，皮肤粘膜消毒、浸泡手术器械（2）0.05%-0.1%杜灭芬，伤口冲洗，金属器械、塑料、橡皮类消毒

4 氧化剂： 机制：（1）靠氧化作用，灭活酶类（2）使蛋白质变性种类和用途：（1）0.1%高锰酸钾：皮肤、尿道、水果等（2）3%过氧化氢：创伤、皮肤粘膜消毒（3）2%-2.5%碘酒：皮肤消毒（4）0.2ppm-0.5ppm氯：饮水和游泳池消毒（5）10%-20%漂白粉：地面、厕所与排泄物的消毒

5 重金属盐类： 作用机制：（1）使细菌发生变性和沉淀（2）使细菌的酶活性丧失种类、浓度与用途：（1）1%硝酸银：新生儿滴眼预防淋球菌感染（2）2%红汞：用于皮肤、粘膜和小创伤消毒（3）0.05-0.01%升汞：非金属器皿的消毒

四、消毒剂的应用 1、病人排泄物与分泌物：粪便、尿液、脓液和痰液等，一般多用含有氯的消毒液作用1h，搅拌均匀后，作用2h后再处理。常用的有次氯酸钠、漂白粉等。 2、皮肤：2.5%碘酒、70%乙醇、2%红汞等。 3、粘膜：口腔粘膜可用3%过氧化氢，尿道、阴道、膀胱等冲洗用0.01%-0.1%氯已定或0.1%高锰酸钾,新生儿预防淋病性眼结膜炎可用1%硝酸银或2%蛋白银滴眼。 4、手：预防性洗手—用肥皂和流动水经常并正确的洗手是预防许多病原微生物感染的有效方法；当被病原体污染后，一般用2%来苏尔消毒；当怀疑有乙肝病毒污染时，可用0.2%-0.4%过氧乙酸浸泡1-2min后，流水冲洗。

5、空气：常用福尔马林加热法，但可针对不同的病原体选择不同的消毒方法，消毒后注意通风。5、空气：常用福尔马林加热法，但可针对不同的病原体选择不同的消毒方法，消毒后注意通风。 6、房间、地面、墙壁、门窗：可用0.2%～0.5%过氧乙酸200ml/M330～60min，房间无人时喷洒,注意药物的腐蚀性。 7、饮水：自来水可用氯气，少量饮用水可用漂白粉。 8、厕所、阴沟：可用生石灰，其有效成分是氢氧化钠。

五、影响消毒剂作用的因素 种类菌龄消毒剂细菌浓度种类作用时间环境酸硷度有机物温度

选择适当的消毒剂 低破坏低毒有效方便价廉易贮藏

重大医院感染案例 • 1998年4月至5月，深圳市妇儿医院发生了严重的医院感染暴发事件。该院1998年4月3日至5月27日，共计手术292例，至8月20日止，发生感染166例，切口感染率为56.85%。事件发生后，深圳市妇儿医院未及时向上级卫生行政部门报告，在自行控制措施未果、感染人数多达30余人的情况下，才于5月25日报告深圳市卫生局。深圳市卫生局对有关责任人进行了严肃处理，院长陈一臻被免去院长职务，直接责任人主管药师何莹被开除公职，其他有关人员由医院进行处理。 • 此次感染是以龟型分枝杆菌为主的混合感染，感染原因是浸泡刀片和剪刀的戊二醛因配制错误未达到灭菌效果。

在生产手术室无菌工作衣 医生查房

第三节生物安全（了解） 一、实验室生物安全（laboratory biosafety）是指在从事病原微生物实验活动的实验室中避免病原微生物对工作人员和相关人员的危害，对环境的污染和对公众的伤害，为了保证试验研究的科学性还要保护被试验因子免受污染。

第 3 章 复习重点