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临床常用免疫学检查

临床常用免疫学检查. 华中科技大学同济医学院 同济医院诊断学教研室 钟 强. 临床常用免疫学检查. 血清免疫球蛋白 （ immunglobulin ， Ig ） 测定 血清补体测定 细胞免疫检测 感染免疫检测 自身免疫检查 肝炎病毒标志物检测 肿瘤标志物检测. 血清免疫球蛋白分类. Ig 通常是指具有抗体活性和（或）抗体样结构的球蛋白。 应用免疫电泳与超速离心分析可将 Ig 分 5 类： IgG 、 IgA 、 IgM 、 IgD 、 IgE 。

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临床常用免疫学检查

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  1. 临床常用免疫学检查 华中科技大学同济医学院 同济医院诊断学教研室 钟 强

  2. 临床常用免疫学检查 • 血清免疫球蛋白（immunglobulin，Ig）测定 • 血清补体测定 • 细胞免疫检测 • 感染免疫检测 • 自身免疫检查 • 肝炎病毒标志物检测 • 肿瘤标志物检测

  3. 血清免疫球蛋白分类 • Ig通常是指具有抗体活性和（或）抗体样结构的球蛋白。 • 应用免疫电泳与超速离心分析可将Ig分5类： IgG、IgA、IgM、 IgD、 IgE。 • IgG：含量最多或最主要的Ig（75%），唯一能够通过胎盘的Ig。主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞合成与分泌。 • IgA：约占10%，SIgA在局部免疫中起重要作用。主要由肠系淋巴组织中的浆细胞产生。

  4. 血清免疫球蛋白 • IgM：分子量最大，由5个IgM单体通过J链连接。是最早出现的Ig，是抗原刺激后最早出现的抗体，其杀菌、溶菌、溶血、促吞噬以及凝集作用比IgG高500~1000倍。 • 测定方法：单向免疫扩散法（RID）或免疫比浊法。

  5. 血清免疫球蛋白测定参考值 • 参考值：IgG：7.6~16.6g/L （RID法） IgA：710~3350mg/L IgM ：0.48~2.12 g/L

  6. . • 临床意义 免疫球蛋白增高 多克隆增高:常见于各种慢性感染、慢性肝病、肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎等。 单克隆增高:主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨隋瘤、原发性巨球蛋白血症等。

  7. 免疫球蛋白降低：常见于各类先天性免疫缺陷病、获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的病人。免疫球蛋白降低：常见于各类先天性免疫缺陷病、获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的病人。 • 血清IgD测定 免疫扩散法：0~62mg/L 已发现有些抗核抗体、抗基底膜抗体、抗甲状腺抗体和抗“O”抗体等均属IgD，但活性甚低。

  8. 血清IgE：主要由鼻咽部、支气管、胃肠道等粘膜固有层的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，能与肥大细胞、嗜碱性粒细胞膜上的FceR结合，产生I型变态反应。血清IgE：主要由鼻咽部、支气管、胃肠道等粘膜固有层的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，能与肥大细胞、嗜碱性粒细胞膜上的FceR结合，产生I型变态反应。 ELASA：0.1~0.9mg/L 临床意义： 1. I型变态反应 2. IgE型骨髓瘤、寄生虫感染等 3. 慢性肝炎、SLE、类风湿性关节炎等。

  9. 血清M蛋白测定（M protein，monoclonal immunoglobulins） • 是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的IgG分子或片段，一般不具有抗体活性。 • 参考值：蛋白电泳法，免疫电泳法：阴性 • 意义：1.多发性骨髓瘤（MM），占35%~65%，其中IgG型占60%左右； IgA型占20%左右； 轻链型占15%左右； IgD、 IgE型罕见。2.巨球蛋白血症。3.重链病（HCDs）。4.半分子病。5.恶性淋巴瘤。6.良性M蛋白血症。

  10. 血清补体测定 • 补体是具有酶活性的一种不耐热球蛋白，分3组：9种补体成分（C1~C9）；B、D、P、H、I 因子；补体调节蛋白，如C1抑制物、C4结合蛋白、促衰变因子等。 • 总补体溶血活性（CH50）测定 • 参考值 试管法：50000~100000U/L 意义：增高 见于急性炎症、急性组织损伤、恶性肿瘤及妊娠。降低 见于急性肾小球肾炎、自身免疫性疾病、亚急性感染性心内膜炎、慢性肝病、肝硬化、AIDS、严重烧伤等。

  11. 血清补体测定 • 血清C3：主要由巨噬细胞和肝脏合成，在经典激活途径与旁路激活途径中发挥重要作用。 参考值：免疫比浊法0.85~1.70g/L 增高 作为急性时相蛋白，在急性炎症、传染病早期、急性组织损伤、恶性肿瘤、抑制物排斥反应时增高。降低 补体合成能力降低；合成原料不足；消耗或丢失太多；先天性补体缺乏。

  12. 血清补体测定 • 血清C4测定：由肝脏、吞噬细胞合成，参与补体的经典激活途径。 • 参考值：单向免疫扩散法：0.197+/-0.109/L。 • 临床意义基本与C3相似，降低还见于多发性骨髓瘤、IgA肾病、遗传性C4缺乏症等。

  13. 血清补体测定 • 补体C1q测定 • 参考值：0.179±0.04g/L • 临床意义：与C3相似，降低还见于活动性混合性结缔组织病、重度营养不良、肾病综合征、重度联合免疫缺陷病等。 • B因子测定-C3激活剂前体

  14. 细胞免疫检查 • 淋巴细胞表面标志物检测 • ㈠ T淋巴细胞表面标志物检测：E玫瑰花形成试验、免疫荧光法（IFA）、荧光激活细胞分类法（FACS）、免疫金银法以及免疫酶染色法等。 • E玫瑰花形成试验 SRBC+CD2 • 参考值 Et 64.4%±6.7% • 免疫荧光法

  15. T淋巴细胞表面标志物检测 • 意义 可用于T淋巴细胞计数， T淋巴细胞亚群的分类以及判断T淋巴细胞的活化程度。 • CD3分子表达于所有成熟T淋巴细胞的表面，是总T淋巴细胞的重要标志，CD3+ 常见于甲状腺功能亢进、淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力以及器官移植后排斥反应。 CD3+ 主要见于免疫缺陷病，如AIDS、先天性胸腺发育不全综合征以及联合免疫缺陷病等。亦可见于恶性肿瘤、SLE、免疫抑制剂治疗等。

  16. T细胞分化抗原测定 • 白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD） • CD3代表总T淋巴细胞，CD4是辅助、诱导T细胞的标志，CD8是抑制、杀伤性T细胞的标志。应用单抗和荧光标记二抗反应在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD的百分率。 • 参考值 ：免疫荧光法（IFA）： CD3为63.1%±10.8%； CD4为42.8%±9.5%；CD8 19.6%±5.9%；CD4 /CD8为（2.2±0.7）/1。流式细胞术：CD361%~85%；CD4 28%~58%；CD8 19%~48%；CD4 /CD80.9~2.0/1。

  17. T细胞分化抗原测定 • 临床意义 • CD3 • CD4+T细胞下降 常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、MCV、严重创伤、全身麻醉、大手术、应用免疫抑制剂等； 升高见于类风湿性关节炎活动期。 • CD8+ T细胞下降常见于类风湿性关节炎、Sjogren综合征、重症肌无力、DM（II型）以及膜型肾小球肾炎等； 升高见于传染性单核细胞增多症急性期、MCV以及慢性乙肝。 • CD4 +/CD8+比值下降，常见于AIDS、瘤型麻风病、恶性肿瘤进行期和复发时。也见于部分感染性疾病如传染性单核细胞增多症、MCV、血吸虫病等；增高见于类风湿性关节炎活动期、SLE、Sjogren综合征、重症肌无力、膜型肾小球肾炎以及器官移植后排斥反应等。

  18. 淋巴细胞功能检测 • T细胞转化试验 • 形态学法： T细胞转化率60.1%±7.6% • 3H-TdR掺入法：培养淋巴细胞用液体闪乐烁仪测量，记录每分钟脉冲数（cpm）。 • SI（刺激指数）=PHA刺激管cpm均值/对照管cpm均值 • SI＞2为有意义，＜2为淋巴细胞转化率降低。

  19. T细胞转化试验 • 临床意义 • 判断机体细胞免疫功能水平，降低常见于细胞免疫缺陷或细胞免疫功能低下者，如恶性肿瘤、淋巴瘤、重症结核、肝硬化等。增高常见于Down综合征。 • 估计疾病的疗效与预后

  20. B淋巴细胞表面标志物检测 • 表面抗原：CD19、CD20、CD21、CD22和CD40等 • 表面受体：B细胞抗原受体（BCR）、细胞因子受体（CKR）、补体受体（CR）与Fc受体等。 • B细胞表面免疫球蛋白（BCR，SmIg）是B细胞的特征性表面标志。将荧光标记的抗不同类型Ig的单克隆抗体进行检测，可将B细胞分为SmIgG、SmIgM、 SmIgA、 SmIgD、 SmIgE。

  21. B淋巴细胞表面标志物检测 • 参考值：免疫荧光法（羊抗人）（以携带该标志的细胞百分数表示） • SmIg+细胞总数：均值21%（16%~28%） • SmIgG+ 细胞：均值7.1%（4%~13%） • SmIgM+细胞：均值8.9%（7%~13%） • SmIgA+细胞： 均值2.2%（1%~4%） • SmIgD+细胞： 均值6.2%（5%~8%） • SmIgE+细胞： 均值0.9%（0%~1.5%）

  22. B淋巴细胞表面标志物检测 • 临床意义 • SmIg+细胞增高 ：常与B细胞恶性增殖有关，主要见于慢淋、毛细胞白血病以及巨球蛋白血症等。 • SmIg+细胞减低：主要与体液免疫缺陷有关，常见于性联丙种球蛋白缺乏症、严重联合免疫缺陷病等。

  23. B淋巴细胞表面标志物检测 • B细胞分化抗原CD19、CD20、CD21、CD22测定 • 参考值：FACS：CD19+细胞 11.74%±3.73% • 临床意义 CD19为全部B细胞共有的表面标志，增高见于B细胞系统的恶性种瘤，减低见于体液免疫缺陷病。

  24. NK细胞活性测定 • NK细胞能直接杀伤效应细胞，具有抗肿瘤、抗感染和和免疫调节等功能，亦参与移植物排斥反应、自身免疫病和超敏反应的发生。 • LDH释放法 • 参考值细胞毒指数：27.5%~52.5% • 51Cr释放法 • 参考值 NK细胞活性（自然杀伤率）：47.6%~76.8%

  25. NK细胞活性测定 • 临床意义 • 活性升高 常见于病毒感染的早期，Down综合征，接受器官移植、骨髓移植的患者等及免疫增强剂治疗患者。 • 活性降低 常见于恶性肿瘤、重症联合免疫缺陷病，AIDS和免疫抑制剂治疗者等。 • 肿瘤疗效观察及预后评价 • 免疫调节功能NK细胞可释放INF-γ、INF-β和GM-CSF等细胞因子。

  26. 乙型肝炎病毒血清标记物检测 • HBsAg，Anti-HBs或抗HBs • HBeAg，Anti-HBe或抗Hbe • HBeAg，Anti-HBc或抗Hbc 测定方法：ELASA，RIA

  27. 乙型肝炎病毒血清标记物检测 • HBsAg（+）表示肝中有HBV 见于：乙型肝炎潜伏期和急性期。 慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎，肝硬化，肝癌。 慢性HBsAg携带者。 Anti-HBs或抗HBs：中和抗体

  28. 乙型肝炎病毒血清标记物检测 • HBeAg：有乙型肝炎，是病毒复制活跃，传染性强的指标；持续阳性易转变为慢性肝炎； HBeAg+和 HBsAg+可垂直传播。 • Anti-HBe或抗Hbe：出现于急性感染的恢复期，持续时间较长。意味着HBV部分被清除或抑制，复制减少，传染性降低。

  29. 乙型肝炎病毒血清标记物 • Anti-HBc或抗HBc：反映肝细胞受到HBV侵害的一种指标，主要包括IgM、IgG、IgA。 • 抗HBc IgM阳性是最早出现的特异性抗体，是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示病人的血液有强传染性。也见于慢性活动性肝炎。 • 抗HBc IgG 其阳性滴度高，表明患有乙型肝炎，指正在感染；低滴度为既往感染指标，体内时间长。

  30. 乙型肝炎病毒血清标记物 • HBV-DNA定性和定量测定：目前定量测定范围为102 ~108拷贝/ml。 • 与血清免疫学结果的综合评价 HBsAg和Anti-HBs HBeAg，Anti-HBe ，Anti-HBc 5项标志物的变化和联合检测的临床意义

  31. 丙型肝炎病毒标志物检测 • 抗-HCV（ELISA） • 抗-HCV IgM阳性 常见于急性HCV感染，是诊断丙肝的早期敏感指标；是HCV活动的指标，是判断HCV传染性的指标。 • 抗-HCV IgG • HCV-RNA测定 • 测定方法 逆转录巢式PCR法，荧光定量PCR法 • （第三代试剂抗原包括C、NS3、NS4、NS5；丙肝病毒易发生变异，抗-HCV阳转时间差异较大）

  32. 血清抗链球菌溶血素“O”测定 • 参考值： 乳胶凝集法（LAT）：＜500U • 意义：增高 常见于A组溶血链球菌感染相关疾病，如扁桃腺炎、感染性心内膜炎、风湿热、链球菌感染后肾小球肾炎等。 • ASO 在A组溶血链球菌感染后1周开始升高，4~6周达高峰，可持续几个月或几年。 • 假阳性与假阴性

  33. 伤寒、副伤寒沙门菌免疫测定 • 肥达（Widal）反应 • 参考值 • O凝集价＜1：80 • 伤寒H凝集价＜1：160 • 副伤寒A、B、C凝集价＜1：80 • 伤寒、副伤寒沙门菌抗体IgM测定 • 参考值 ELASA法：阴性或滴度＜1：20。

  34. 伤寒、副伤寒沙门菌免疫测定 • 临床意义 • O升高，H正常 • H正常，O升高 • O升高，H升高 • O升高，A、B、C任何一项升高

  35. 血清C-反应蛋白（CRP）测定 • C-反应蛋白是一种由肝脏合成的，能与肺炎双球菌C多糖体起反应的急性时相反应蛋白，具有激活补体，促进吞噬和免疫调理作用。 • 参考值：＜8.2mg/L（免疫比浊法） • 意义 组织损伤，如大手术，严重创伤，烧伤，心肌梗死等，发病后数小时迅速增高，病情好转后又迅速下降。又复升高提示继发感染或深部静脉血栓形成。 • 风湿热活动期，可达200mg/L以上。 • 细菌性感染常明显升高，病毒性感染升高不明显或轻度升高。 • 恶性肿瘤，器官移植后排斥反应，妊娠等可见明显升高可在发病后数小时迅速增高，病情好转后又迅速下降至正常。

  36. 肾综合征出血热病毒抗体检测 • 参考值 • IFA，ELASA：阴性 • 特异性IgM-感染后2~3天检出，7~10天达高峰。特异性IgG感染后两周出现，可持续多年。

  37. 艾滋病血清学检查 • 检测抗HIV（I型或II型）是AIDS诊断的一个主要指标。抗原为HIV感染的T细胞株的病毒抗原（HLA-DR抗原污染可出现假阳性） 。 • 方法：初筛试验ELASA ，乳胶凝集法，免疫印迹法，斑点免疫渗透法。 确认试验 可选用蛋白印迹试验（WB）， PCR法检查HIV病毒DNA。 • HIV抗原检测 P24抗原（病毒衣壳蛋白，具群特异性）。 HIV核酸检测 DNA-PCR；RNA-PCR

  38. 梅毒血清学检查 • 是由梅毒螺旋体梅毒亚种所致的一种性传播疾病。 • 梅毒螺旋体抗体检测：非密螺旋体抗原试验和密螺旋体抗原试验，前者为筛选试验和治疗效果监测，后者为确诊诊断。 • 暗视野显微镜检查 • 梅毒螺旋体PCR检测

  39. 甲胎蛋白（AFP）测定 • 参考值CLIA，RIA，ELASA：血清＜25μg/L • 临床意义 • 原发性肝癌明显升高，AFP＞300 μg/L • 病毒性肝炎、肝硬化患者不同程度AFP升高但常＜ 300 μg/L。 • 生殖腺胚胎性肿瘤血清AFP升高 • 妊娠小扁豆凝集素（LCA）结合型AFP≥25%提示原发性肝癌。

  40. 自身抗体检查 • 自身免疫性疾病（AID） • AID-器官特异性和非器官特异性（抗原为细胞核或胞浆成分）及中间型。 • 抗核抗体（ANA）：是以细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称。间接免疫荧光检查有四种荧光图谱：均质型（抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体）；周边型（抗dsDNA抗体）；斑点型或颗粒型（抗U1-RNP、抗Sm、抗Scl-70、抗SS-B/La、抗SS-A/Ro等）；核仁型（核糖体、U3-RNP、RNA聚合酶）。

  41. 自身抗体检查 • 抗核抗体（ANA）检查：抗各种细胞核成分（脱氧核糖核蛋白-DNP、DNA、可提取的核抗原-ENA和RNA等）。 • 参考值：IFA法阴性，血清滴度＞1：40为阳性 • 见于SLE（80%~100%）、MCTD（100%）、原发性胆汁性肝硬化95%~100%）、DM （30%~50%）、RA等。

  42. 自身抗体检查 • 抗DNA抗体分为：抗ds-DNA、抗ss-DNA、抗z-DNA 抗z-DNA 对SLE有特异性，检出率在90%以上。 • 抗dsDNA抗体测定的临床意义 • 见于SLE活动期，阳性率70%~90%。特异性教高（95%）敏感性较低-诊断与治疗监控。另外参与SLE发病机制。 • 抗Sm抗体测定：为SLE所特有，疾病特异度达99%，且能反应疾病活动的程度，灵敏度较低，平均为20%。与CNS、肾病、肺纤维化及心膜炎有一定关系。

  43. 自身抗体检查 • 抗组蛋白抗体（AHA）测定 • 临床意义：50%~70%的SLE及95%以上的药物诱导性狼疮可出现，主要靶抗原为H2A-H2B –DNA复合物，与SLE活动有关。 • 抗核糖核蛋白（RNP）抗体测定 • 临床意义：抗U1-RNP抗体主要与MCTD相关，在30%~40%的SLE病人中可检测到，并常与Sm抗体相伴出现。常与下列临床表现有关，肾脏较少累及、雷诺现象、手肿胀、食管运动不良等。

  44. 自身抗体检查 • 抗SS-A/Ro抗体测定 • 干燥综合征有三种不同的自身抗体：SSA、SSB、SSC（RANA），前两者仅见于原发性干燥综合征，后者见于伴类风湿性关节炎的继发性干燥综合征。 • SS-A/Ro抗体见于干燥综合征（SjS）（灵敏度88%~96%），RA（3%~10%），SLE（24%~60%）。其他疾病：亚急性皮肤性狼疮（70%~90%），新生儿狼疮（＞90%），补体C2/C4缺乏症（90%）。

  45. 自身抗体检查 • 抗SSB抗体（抗 La抗体、抗Ha抗体）测定 • 多数情况下与SS-A/Ro抗体同时出现。干燥综合征（71%~87%），新生儿狼疮综合征（75%）伴先天性心脏传导阻滞（30%~40%）。 • 抗Scl-70抗体测定 抗Scl-70抗体识别的抗原是DNA拓扑异构酶I，该酶参与超螺旋DNA的解螺旋。 • 临床意义 特异性地出现于系统性硬化症（PPS）的病人，并提示预后不良。

  46. 自身抗体检查 ⒈自身抗体的检测 ⑴抗核抗体谱：ANA滴度达1：80或以上者需考虑CTD的可能，再进一步检查ds-DNA、抗组蛋白、抗ENA抗体谱的检查。 结缔组织病的抗核抗体谱 SLE： ANA、抗（ds-DNA）、 抗组蛋白、抗Sm 、抗SSA 。 pSS： 抗SSA、抗SSB。 DM/PM ： 抗合成酶（jo-1，PL-7，PL-12）、抗SRP、抗Mi-2。 SSc：ACA（抗着丝点）、抗Scl-70、抗核仁抗体。 MCTD：ANA 、抗RNP。

  47. 自身抗体检查 • 类风湿因子（RF）：靶抗原为变性IgG的Fc部分，有IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五种类型。 • 测定方法：速率散射法或速率比浊法。 • RIA，ELISA法 • 90%RA患者呈阳性，IgA-RF与骨质破坏有关，早期升高提示病情严重，预后不良。IgE-RF升高时已属病情晚期。

  48. 自身抗体检查 • 抗线粒体抗体（AMA） • 抗心肌抗体（AHA） • 抗平滑肌抗体（ASMA） • 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） 抗磷脂抗体：有抗心脂抗体、狼疮抗凝物、假阳性梅毒反应等。主要出现在SLE和pSS，并与血小板减少、狼疮脑病、血管栓塞、习惯性自发性流产有关。 HLA-B27

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