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分 子 生 物 学 实 验

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dugan
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分 子 生 物 学 实 验

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Presentation Transcript

  1. 分 子 生 物 学 实 验

  2. 分子生物学实验综合规程 • 分子生物学实验常用仪器设备 • 分子生物学基本技术 • 实验准备

  3. 分子生物学实验综合规程 • 上课时间提前5分钟进入实验室;不迟到、不早退,无故旷课累计3次没成绩; • 请假须医院病假条或班主任签字的假条; • 上课时需穿实验服,不许在实验室内吃东西,不背着书包做实验,不穿拖鞋进实验室; • 实验课期间不许打闹、闲聊等,不大声喧哗,保持课堂纪律,实验过程中,至始至终需全组同学一起完成,任何人中途不得缺席。 • 必须做到课前认真预习,课间做好实验记录、课后详细总结实验结果并按时提交实验报告;

  4. 公用试剂不得污染!每次都必须用新枪头。公用台上公用试剂不得私自拿到自己实验台上;公用试剂不得污染!每次都必须用新枪头。公用台上公用试剂不得私自拿到自己实验台上; • 不得私自拿走或乱放别人的实验物品、实验产品; • 不得擅自使用实验室中非本实验仪器、试剂。 • 实验废液不随便倾倒,随时保持实验台的整洁; • 爱护实验器材,实验器材损坏必须按规定赔偿; • 实验前按仪器性能与要求,进行仪器预热; • 实验完成后检查电源插座,用完仪器后必须复位,仪器清洁干净 、摆放整齐;每组实验物品齐全,需教师验收,枪量程要归位,发现问题及时报修;

  5. 每位同学负责自己实验台面和柜体的卫生,值日生负责公用实验台、地面等处卫生;每位同学负责自己实验台面和柜体的卫生,值日生负责公用实验台、地面等处卫生; 每次轮到打扫卫生的小组,要认真做好值日工作,离开实验室须向教师声明; 同学与老师之间、同学与同学之间、实验班与实验班之间一定要互相协作配合保持公用房间卫生,注意门窗水电的安全。 遵守通用的实验室规则。 违反上述任何一条规则责任自负,并要扣分,造成损失要照价赔偿。

  6. 实 验 成 绩 实验技能 20分 实验报告 20分 实验态度 15分 实验室常识 15分 实验实施 30分

  7. 参 考 书 • 分子生物学实验教程 自编 • 分子生物学实验指导魏群 高等教育出版社 • 分子生物学实验指导 刘进元 清华大学出版社

  8. 实验一 分子生物学实验的基本知识和基本技能培训 实验二 大肠杆菌感受态细胞的制备 实验三 质粒DNA的转化 实验四 碱裂解法提取质粒DNA 实验五 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 实验六 PCR基因扩增 实 验 内 容

  9. 分子生物学实验综合规程 • 分子生物学实验常用仪器设备 • 分子生物学基本技术 4 实验准备

  10. 样品、试剂和材料等的保存 温度控制系统--冰箱:4℃、-20℃、-70℃

  11. 纯 水 器

  12. 恒温培养箱 • 细菌平板的培养

  13. 恒温空气摇床 菌体的培养

  14. 灭菌器 培养基、试剂、耗材等的灭菌

  15. PCR 仪 PCR 扩增、保温实验等

  16. 恒温水浴及微量加热器 保证实验温度的恒定

  17. 电 泳 仪 电泳时提供电压和电流

  18. 电泳槽 核酸或蛋白质的电泳定性分析时的凝胶支架

  19. 凝胶成像系统 电泳结果的定性和定量分析

  20. 紫外分析仪 电泳结果的定性分析

  21. 台式高速冷冻离心机 样品的分离

  22. 落地式高速冷冻离心机 样品的分离

  23. 分光光度计 样品的定量测定

  24. 超净工作台 提供洁净工作环境

  25. 电子天平 样品、试剂等的称量

  26. pH 计 精确的pH值测定

  27. 液体试剂的精确取量 移 液 器

  28. 制冰机

  29. 分子生物学实验综合规程 • 分子生物学实验常用仪器设备 • 分子生物学基本技术 3.1实验规范训练-仪器的操作 3.2实验规范训练-量程的选择 3.3实验规范训练-标签 3.4实验规范-实验操作 4 实验准备

  30. 3.1 实验规范训练-仪器的操作 要求:仪器在未经培训前,不得擅自使用 严格按操作规程使用仪器, 有些仪器必须有教师在场时才能使用,并由教师操作 违反规定的使用者,造成的后果由使用者承担

  31. 3.2 实验规范训练-量程的选择 天平 烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶--不同规格

  32. 量程的选择-移液器

  33. 3.3 实验规范训练-标签 • 所用的器皿上一定要做标记 • 标签一定要贴到固定的位置 • 标签上应包括具体的名称、组别、实验班、日期

  34. 3.4 实验规范-实验操作 • 详细记录和分析实验结果并按时提交实验报告 • 实验中一定要处处用心、勤动手,多问为什么 • 仔细操作和观察 • 保留好每一步的实验样品,在确准的情况下才能当废液扔掉

  35. 分子生物学实验综合规程 • 分子生物学实验常用仪器设备 • 分子生物学基本技术 • 实验准备 4.1 清点和熟悉常用玻璃器皿、耗材等 4.2 洗涤本学期实验用玻璃器皿 4.3 配制试剂 4.4 高温灭菌

  36. 4 实验准备 4.1 清点和熟悉常用玻璃器皿、耗材等 4.1 洗涤本学期实验用玻璃器皿 4.3 配制试剂 1) 0.1 mol/L CaCl2 100 mL 2) 5 mol/L NaOH 100 mL 胶塞 3) LB液体培养基 100 mL 胰蛋白胨(typtone) 1g 酵母提取物(yeast extract) 0.5g NaCl 1g 加部分水溶解后加20μL 5 mol/L NaOH,定容到100 mL

  37. 4) 10%(w/v)SDS储液 50 mL ,室温保存 5) 1 mol/L Tris 200 mL 6) 2 mol/L HCL 100 mL 7) 0.5 mol/L EDTA 100 mL 80 mL水中加18.61g EDTA-Na2H2O,用NaOH调 pH 8(约需2g NaOH),后定容至100 mL 8) 5xTAE 1000 mL 9) 70%乙醇 500 mL 10) Amp :100 mg/ mL 20ml,分装每管 1 mL,-200C保存

  38. 4.4 高温灭菌 • LB液体培养基 • 1.5mL离心管 2瓶/组 • 枪头/1组 : 1mL 1盒,200uL 1盒 • 培养皿 12套/组 • 无菌水 100 mL /班 • 0.1 mol/L CaCl2