IgY 抗體生產、純化與分析

IgY抗體生產、純化與分析 指導教授:台灣師範大學生命科學系王玉麒教授指導老師:詹豐碩、陸一麟老師研究生:一誠徐啟端、陳妘、黃承勛

報告大綱 • 研究目的 • 應用價值 • 免疫試劑檢測原理 • 研究方法、步驟 • 實驗結果 • 心得分享

抗體的應用 • 醫學 • 毒品檢測 • 驗孕 • 癌症檢驗-大腸癌(糞便潛血)

何謂抗體 • 又稱為「免疫球蛋白」 • 具保護、防禦功能 • 為Y形單體構造(重鍊、輕鍊) • 哺乳類抗體可分為5種:IgD、IgE、IgG、IgA和IgM • 鳥類體內有:IgA、IgM、IgY

何謂IgY • 鳥類血液中含量最多的抗體 • 蛋黃中唯一存在的抗體 • IgY可視為哺乳類IgG的先祖

抗體的結合方式 • 抗原抗體之間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測 • 識別特定外來物的一個獨特特徵該外來目標被稱為抗原。

ELISA(酵素免疫分析法) • 將抗原吸附於96孔盤後，洗去未吸附之抗原 • 加入待測檢體，含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結 • 加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結 • 洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色測定塑膠盤中的吸光值

加入抗原 (人類血紅素) 加入一級抗體加入帶有酵素二級抗體加入酵素受質

未免疫注射 (對照組) 免疫注射 (實驗組) 1 0.01 ug/ml 10 0.1 0.01 0 0 10 1 0.1

抗體來源的比較雞 vs.兔 因此，我們選用雞隻作為抗體的生產來源

雞隻較易產生辨識人類血紅素的抗體 Hemoglobin(x2)+(x2)  chain blast  chain blast

IgY的好處 • 雞蛋數量多 • 蛋黃中IgY含量多 • 能有效減少動物用量

抗體生產—動物免疫注射 實驗動物：白色來亨雞抗原：人類血紅素劑量：0, 250, 500, 1000 g 注射方式：肌肉注射

蛋黃IgY收集 • 取出蛋黃 • 粗萃取 • 局部純化 • 抗原管柱純化

蛋白質電泳 負極正極

蛋黃IgY純化後的純度分析 1標準品 IgY 5.抗原管柱純化 3. 粗萃取液 4. 局部純化 2 蛋黃蛋黃粗萃取液局部純化 IgY (重鏈) 抗原管柱純化 IgY (輕鏈)

抗體專一性分析-不同動物的血紅素 血紅素血紅素人雞豬羊牛兔定量結果實驗組對於不同動物血紅素，抗體對人類血紅素辨識能力較佳對照組

抗體專一性分析-功能類似的蛋白質 myo Hb myo Hb myo Hb 肌紅素定量結果血紅素實驗組血紅素對照組儘管遇上與血紅素相同功能的抗原，抗體仍能清楚辨識

抗體比較免疫注射 vs.一般抗體 實驗組對照組蛋黃粗萃液稀釋10000倍，仍然能有效的辨識抗原。

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