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实验九 动物细胞培养. 一、实验目的. 掌握无菌操作； 掌握原代和传代细胞培养； 了解培养成纤维细胞的形态。. 二、实验原理. 原代培养 ：培养直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或 传代培养 。 细胞株 ：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 细胞系 ：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。. 三、实验器材与试剂. 1. 器具 显微镜、电热恒温水浴锅、天平、 CO2 培养箱、蒸汽灭菌器、超净工作台、解剖刀、 眼科剪、眼科镊、培养皿 、锥形瓶、容量瓶、纱布、培养瓶、移液枪。
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一、实验目的 • 掌握无菌操作； • 掌握原代和传代细胞培养； • 了解培养成纤维细胞的形态。
二、实验原理 • 原代培养 ：培养直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或传代培养。 • 细胞株：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 • 细胞系：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。
三、实验器材与试剂 • 1. 器具 • 显微镜、电热恒温水浴锅、天平、CO2培养箱、蒸汽灭菌器、超净工作台、解剖刀、 眼科剪、眼科镊、培养皿 、锥形瓶、容量瓶、纱布、培养瓶、移液枪。 • 2. 材料 • 9 - 12 日龄发育良好的鸭胚。
3. 主要试剂 • 双蒸水、Hank’s液、0.25%胰蛋白酶、EDTA、NaHCO3 、台盼蓝、洋红。 • 营养液：DMEM培养基（含8%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素）。 • 维持液： DMEM培养基（含5%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素）。
四、原代培养 • 1.酒精棉球消毒鸭蛋，剥出鸭胚，去头、翅、爪和内脏， 加Hank’s 液，剪碎为0. 5 -1mm3的小块， Hank’s 液洗涤2 - 3 次。 • 2. 组织块移入培养瓶，间距0.5cm摆放后倒置培养瓶，加少量营养液，保持湿润，37 ℃培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。 • 3. 定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天后更换培养液。 • 4 .倒置显微镜下观察拍照。 • 5.单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。
五、传代培养 • 当培养细胞接近汇合成片时，倾去培养液。 • 加入0. 25 %（含0. 02 %EDTA ）消化2-3分钟，倾去大部分消化液，留少量消化液浸润细胞。发现细胞层出现裂痕或空洞后，加入Hank’s 液洗去残留消化液，终止消化。 • 加适量营养液吹打分散，补加营养液后，1：2分装培养。 • 汇合后挑取少许细胞，染色，观察拍照。
传代培养的绍鸭成纤维细胞形态（DAPI染色） 凋亡细胞 正常细胞 分裂中期细胞
六、作业 • 1. 细胞培养过程中应该注意哪些事项？ • 2. 描绘培养成纤维细胞的形态（或提供照片）。
