Современный подход к лабораторной диагностики РРСС методом ИФА

1. Современный подход к лабораторной диагностики РРСС методом ИФА Докладчик Волков Илья Александрович, к.в.н , руководитель Отдела ветеринарного сервиса по свиноводству ООО «Интервет»

2. 4 основных шага по контролю РРСС Диагностика Технология Вакцинация Качество вакцинации

3. Методы диагностики • ИФА применяется в практике на 80% • ПЦР применяется в практике на 15% • ОРФ5(7) применяется в практике редко • Вирус выделение на культуре клеток очень редко • Вирусная гистология очень редко • Посев на средах, типизация бактериального возбудителя и постановка биопобы

4. Задачи ИфА диагностики Как это практически применить • В чистом хозяйстве: • Определяется чистота стада от инфекций • В этом случае ответом серологии может быть только «да» или «нет» • Для подобной диагностики достаточно только «качественных» тестов ИФА

5. Задачи ИфА диагностики Как это практически применить • В «грязном» хозяйстве: • Методом ИФА нужно определить эпизоотический профиль свинопоголовья • Нужно понять какие инфекции присутствуют • Нужно определить «уровень» инфекции • Нужно определить время инфицирования • Нужно определить время переболевания • Понять лучшее время для вакцинации

6. Задачи ИфА диагностики Как это практически применить • После вакцинации: • Нужно определить эффективность вакцинации • Измерить поствакцинальный иммунитет • Измерить качество адаптации • Для этого нужно использовать только «количественные» тесты которые позволяют измерить титр антител и научится правильно интерпретировать результаты

7. Задачи ИфА диагностики Как это практически применить • Основная проблема заключается в том, что в России на 90% можно найти только «качественные» тесты с ответом на вопрос только ДА или НЕТ • Поэтому в этом случае, вопросы правильной интерпретации ИФА диагностики имеют решающее значение!!!

8. Основные вопросы к ИФА • Достоверность исследований • Какое время занимают исследования • Подтверждение ПЦР или посевом

9. Интерпретация результатов • Основой интерпретации является подсчет среднего титра группы • А так же подсчет уровня гомогенности титра каждого образца по сравнению с средним титром в группе • По результатам СТ и CV должен быть построен график • Каждый набор ИФА должен по своему интерпретироваться

10. Доступный наборРРСС ИФА • IDEXX – X3 AB Test • Это качественный тест который отвечает на вопрос да или нет • Этот тест обнаруживает АТ в сыворотке крови, но не измеряет их! • Мы провели приблизительное тестирования данного теста с количественным тестом и получили следующие значения

11. Приблизительный подсчет титра антител

12. Ситуация 1 на примере эпизоотии РРСС на поголовье поросят (ранняя инфекция) 50 70 55 35 20 32 21 % CV

13. Ситуация 1 на примере эпизоотии РРСС на поголовье поросят (поздняя инфекция)

14. Ситуация 2 слабовирулентный вирус РРСС на поголовье поросят Средний СV Более 30%

15. Ситуация 3 не вирулентный вирус РРСС на поголовье поросят

16. Пример эффективной вакцинации поросятна 21 день жизни 40 70 22 27 32 25 27

17. Пример неэффективной вакцинации поросятна 21 день жизни 35 45 15 70 51 20 12

18. Иммунитет рем.свинок перед вводом в стадо 70 15 30 25 % СV

19. Титры на PCV-2при работе ифа набором Biochek • Уровень протективности 2500 • От 3000 до 4000 средние тиры защиты на вакцинированном поголовье • От 4000 до 6000 максимальные титры защиты на вакцинированном поголовье • 1 – 10% СV при условии высоких титров показатель клинической полевой инфекции • 10 -30%CV показатель качественной вакцинации • 30-70%CV показатель субклинической полевой инфекции или некачественной вакцинации.

20. Пример слабовирулентной субклиники PCV на не вакцинированном поголовье 77 46 63 47 87

21. Пример клинического проявления PCV на не вакцинированном поголовье 6580\12 108 60 51 3300\88%

22. Пример клиники PCV на вакцинированном поголовье 21% 56% 51% 50% 6500 5196

23. Пример эффективной вакцинации PCV 85 21 10 2028

24. Интерпретация АПП и Микоплазмы • Серология по АПП и Mhyo не является ключевым диагностическим приемом • Основной вид диагностики оценка легких на плевриты по методу SPES и Мадека • Но если построить график по количеству позитивны голов в каждой возрастной группе, можно делать приблизительные выводы

25. Присутствие АПП и Микоплазме на не вакцинированном стаде

26. Свободное от АПП и Микоплазмы стадо

27. Пример качественной вакцинации

28. Пример не качественной вакцинации

29. Пост убойная диагностика • Вентрокраниальные плевриты (слева) ассоциированы с M.hyo • Дорсокаудальые плевриты (справа) результат АПП

34. 3

37. Продолжение дискуссии о методах контроля РРСС Диагностика Технология Вакцинация Качество вакцинации

38. Технология при РРСС Компромисс между хорошей генетикой и контролем РРСС 1. Комплектация «чистым» от РРСС рем.поголовьем «грязного» по РРСС репродуктора, с эпизоотическим проявлением РРСС, как правило приводит к негативному результату 2. В этом случае адаптация и вакцинация полностью не решают проблемы 3. Только после полной стабилизации РРСС путем вакцинации на основном стаде Можно вводить небольшим объемом адаптированную и вакцинированную F1 свинку 4. Второй наиболее эффективный вариант – работа с прародителями 5. Третий наиболее эффективный вариант – работа с хряками и рем.свинкой выращенной в эпизоотических условиях основного стада + вакцинация.

39. Патогенез РРСС • Как правило при РРСС в основном стаде • - 80% маток с нормальным иммунитетом либо после клинического переболевания либо после вакцинации • 20% животных имеют менее напряженный иммунитет и являются потенциально восприимчивыми к заболеванию и могут потенциально являться вирусоносителями • При ежемесячном введении 3-5% «условно» защищенного ремонта в зону осеменения где нет пусто занято, где нельзя сделать нормальную дезинфекцию, это ремонт с высокой вероятностью может встретится с полевым вирусом и инфицироваться • После перевода в ожидание инфицированный ремонт будет выделять в окружающую среду большое количество полевого вируса что приведет к заболеванию 20% восприимчивых свиноматок основного сада.

40. Пример Пример: Для ремонта основного стада в 5000 голов в год необходимо как минимум 1500 новых ремонтных свинок, их можно привезти с плем фермы или купить В месяц в зону осеменения будет ставиться по 125 новых рем.свинок Зона осеменения это место где ни когда нет пусто занято, плохая санитария и помыть этот участок нормально не возможно. Именно здесь происходит инфицирование РРСС рем.свинок а заболевают они гораздо позже, в ожидании. Адаптация не спасает ситуацию так как передача инфекции от взрослого поголовья идет медленно Вакцинация спасает ситуацию на 80%- 99% это средняя эффективность вакцины Что мы можем сделать еще – ВЫРАЩИВАТЬ РЕМОНТНУЮ СВИНКУ В ЭПИЗООТИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ ОСНОВНОГО СТАДА !!!

41. Технология при РРСС • Закупать негативную к РРСС F1 рем свинку для РРСС позитивного хозяйства не рекомендуется • Выход: • Активная работа с прародителями • Активная работа с Хрякамипо методу крис - крос • Массовая вакцинация основного и ремонтного стада. • Пример: для получения 1500 голов F1 рем.свинки требуется 80 чистопородных свиноматок , ежемесячно всего 7 голов нового рем поголовья будут поступать в зону осеменения • 80 голов гораздо легче правильно адаптировать • Чистопородные хряки должны содержатся отдельно от репродуктора • Вывод для эффективного контроля РРСС нужны: • -Адаптация, вакцинация и подготовленное в «себе» рем.поголовье

42. Критерии влияющие на принятие решение вакцинировать или нет • Необходимо задуматься что РРСС реальная проблема в случае если: • Менее 10,5 % живорожденных • Более 0,7% мертворожденных • Более 1,5% абортов в год • Более 15% гнезд рожденных ранее 113 дня супоросности • Более 15% гнезд с 9 и менее отъемными поросятами • Более 15% свиноматок с повторной охотой • Более 5% гнезд с поздним опоросом

43. Анализ абортов свиноматок • 70 % абортов носят не инфекционный характер • Воспалительные процессы матки и мочевого пузыря • Токсикозное действие микотоксинов • Конкурентная среда обитания в супоросный период • Условия содержание ( высокая влажность, сквозняки и ХОЛОД) • 30 % абортов носят инфекционный характер • РРСС • И.др

44. Вакцинация • Почему живые вакцины лучше? • Наиболее эффективные схемы вакцинации • В зависимости от ситуации в хозяйстве • - чистое, условно чистое, грязное, после вакцинации • Вакцинация поросят? • Защищает ли маточная вакцинация поросят? • Чего ожидать от вакцинации? • Основныевопросы по эффективности вакцинации?

45. Преимущества вакциныПорцилис ПРРС Одна из самых безопасныхживых вакцин Вакцина разрывает эпизоотическую цепь РРСС Вакцина снижает вирулентность полевого штамма путем прекращения вирус выделения Вакцинный штамм это протектотип к европейскому вирусу РРСС Без вакцинации невозможно контролировать РРСС В РРСС+ хозяйствах с высоко вирулентным вирусом!!!

46. Техника вакцинации Примеры основных ошибок • Подкожное введение • Применение холодной инактивированной вакцины • Смешивание разных вакцин • Не правильный инструмент - работа одной иглой • Многократное использование флакона с вакциной, разогрев и охлаждение вакцины • Вакцинация больных животных • Неправильное хранение и перевозка

48. Технология IDALдля внутрикожных без игольных инъекция