1 / 11

רקומביננטי DNA

רקומביננטי DNA. הכנה ושיבוט DNA רקומביננטי. שימוש בסמני ברירה. סימני הברירה בפלסמיד pBR322. לפלסמיד זה שני גנים המקנים לעמידות לשני סוגי אנטיביוטיקה ampicillin ו tetracyclin . ה DNA הזר הוחדר באתר החיתוך S al l . הפלסמיד הוחדר לחיידקים (טרנפורמציה).

chiquita-arama
Download Presentation

רקומביננטי DNA

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. רקומביננטיDNA

  2. הכנה ושיבוט DNA רקומביננטי

  3. שימוש בסמני ברירה

  4. סימני הברירה בפלסמיד pBR322. • לפלסמיד זה שני גנים המקנים לעמידות לשני סוגי אנטיביוטיקה ampicillin ו tetracyclin. • ה DNA הזר הוחדר באתר החיתוך Sall. • הפלסמיד הוחדר לחיידקים (טרנפורמציה). • חיידקים שקיבלו את הפלסמיד ללא ה DNAהזר היו עמידים לשני סוגי האנטיביוטיקה. • חיידקים שקיבלו את הפלסמיד עם ה DNAהזר היו עמידים כנגד ampicillinולא נגד tetracyclin.

  5. תוצאות הזריעה בצלחת המכילה ampicillinוסובסטרט X-gal (bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside). • פרוק סובסטרט זה ע"י האנזים lacZמקנה צבע כחול למושבה. חיידקים עם פלסמיד רקומביננטי חיידקים ללא פלסמיד רקומביננטי

  6. בקטריופאג'ים משמשים כנשאים של DNA

  7. זיהוי המושבה בעזרת גלאי probe הדפס של המושבות המכילות את הפלסמיד עם הרצף המבוקש אינקובציה של הגלאי ושטיפה. יצירת הדפס של המושבות ע"ג נייר הוספת הגלאי חשיפה לנייר צילום. גידול חיידקים הרקומביננטיים בצלחת פטרי. מקום מושבות שפלטו קרינה ליזיס של החיידקים ודנטורציה של ה DNA.

  8. זיהוי גן בעזרת תוצר • גם לאחר שמוצאים את החיידקים שקיבלו את הפלסמיד הרקומביננטי, יש עוד מקום לבדוק האם הגן מתבטא בחיידק? • תהליך זה יכול להיעשות ע"י זיהוי התוצרים. • תיאור השיטה: • יוצרים הדפס של המושבות ע"ג נייר ניטורצולוז. החלבונים נספחים לנייר. • מדגירים את הנייר עם נוגדן כנגד החלבון. • שטיפה. • מדגירים עם נוגדן שניוני מסומן רדיואקטיבית. • שטיפה. • בדיקה באוטורדיוגרפיה.

  9. תהליך של דנטורציה – רנטורציה של DNA

  10. שימוש בגלאיProbe לזיהוי DNA Radioactiveprobe (DNA) Mix with single-stranded DNA fromvarious bacterial(or phage) clones Single-strandedDNA Base pairingindicates thegene of interest

  11. הכלאה של חומצות גרעין

More Related