220 likes | 417 Views
第 21 章 高效液相色谱法 High-Performance Liquid Chromatography,HPLC. 分析化学. 70年代迅速发展 不挥发有机物约占70% 80年代以来 HPLC 文献量 21%(89年) 仪器销售量 25%(12 亿)(89年) 应用领域 拓展(化工、环保、临床、药品、生命) 超过 GC. 第 21 章 高效液相色谱 法 High-Performance Liquid Chromatography,HPLC.
E N D
第21章 高效液相色谱法 High-Performance Liquid Chromatography,HPLC 分析化学
70年代迅速发展 不挥发有机物约占70% 80年代以来HPLC 文献量 21%(89年) 仪器销售量 25%(12 亿)(89年) 应用领域拓展(化工、环保、临床、药品、生命) 超过 GC
第21章 高效液相色谱 法High-Performance Liquid Chromatography,HPLC 21-1 高效液相仪 21-2 固定相和流动相 21-3 色谱峰扩展及其影响因素 21-4 高效液相色谱法和主要分离类型 21-5 超临界流色谱
第21章 高效液相色谱 法High-Performance Liquid Chromatography,HPLC 1 高效液相色仪 2 固定相和流动相 3 高效液相色谱法和主要分离类型 4 超临界流体色谱
第21章 高效液相色谱 法21-1 高效液相色谱仪 1、仪器结构
第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪1、仪器结构 单柱塞泵结构示意图
HPLC与GC比较 a. 柱长:10—50cm 内径:2—5mm 微柱 ◎填充柱 微 HPLC 柱0.5~1.0 m m 毛细管 HPLC 柱100~500 μm 纳级 HPLC 柱10~100 μm ◎拉制 HPLC 柱 50~200μm ◎开管 HPLC 柱 5~10μm 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪2、掌握要点
微柱的优越性: 1、消耗少(样、流动相、固定相) 2、灵敏(溶质在柱上稀释比下降) 3、分离效率高(可装长柱) 4、操作条件易选择 5、其它分离联用易 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪2、掌握要点
b、检测系统 常用UV光度检测(包括它的现代方法) 引人注目:荧光检测 选择性 10-9~10-11g/ml 质谱检测 通用性 10-8g/ml 蛋白质分析 生物质谱 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪2、掌握要点
C、梯度林洗装置 作用: 让流动相的组成随时间而改变,以调节流动相的极性、离子强度或pH,使样品组分的相对保留值得以改变,从而提高分离效率。 与GC的程序升温技术比较 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪2、掌握要点
1、固定相分类 材料的刚性 ( 刚性固体、硬质凝胶) 固相填料的疏松(薄壳型微珠载体,全多孔型载体) 形状(球形、无定形) 2、流动相 选择溶剂要求 第21章 高效液相色谱 法21-2 固定相和流动相
1 分配色谱(LLC) 2 吸附色谱 (LSC) 3 键合相色谱 4 离子交换色谱 5 离子对色谱 6 凝胶渗透色谱 分离原理 分离类型选择 正相色谱与反相色谱的概念 第21章 高效液相色谱 法21-3 高效液相色谱法的主要分离类型
阴离子交换色谱 : X-+R+Y- Y- + R+X- 第21章 高效液相色谱 法 21-3 高效液相色谱法的主要分离类型 4 离子交换色谱 阳离子交换色谱中 : X++ R-Y+ Y++ R-X+
离子交换的平衡式可用下式表达: R-Br + A R-Ar + B 第21章 高效液相色谱 法 21-3 高效液相色谱法的主要分离类型 4.离子交换色谱 B为流动相-洗脱离子 和离子交换剂相结合的洗脱离子B 溶液中的试样组分离子 平衡常数或分离系数: Kd = { [B][Ar]} / {[A][Br]} A为溶液中的试样组分离子
A+水相+B-水相 =(A+B-)有机相 第21章 高效液相色谱 法 21-3 高效液相色谱法的主要分离类型 5 离子对色谱 配对阴离子 溶质组分 萃取平衡常数 KAB=[A+B-]有机相/ {[A+]水相[B-]水相} k=[A+B-]有机相/ [A+]水相=KAB [B-]水相 溶质的分配系数
正相离子对分配色谱: 水溶液作为固定 液,对离子存在于含水固定相中, 有机溶剂为流动相. 第21章 高效液相色谱 法 21-3 高效液相色谱法的主要分离类型 5.离子对色谱 反相离子对分配色谱: 有机溶剂作为固定液,对离子存在于含水流动相中.
1、超临界流体 指物质在高于临界点,即高于其临界压力和临界温度时的一种物态。 相图 S L G 第21章 高效液相色谱 法21-4 超临界流体色谱
第21章 高效液相色谱 法 21-4 超临界流体色谱 2、超临界流体色谱(SFC)特点 超临界流体的特点超临界流体的密度、扩散系数和粘度等性质刚好介于气体和液体之间 物态 密度ρ粘度η扩散系数D (g﹒ml-1) (Pa﹒S) (cm2﹒s-1) 气体, (0.6-2.0)×10-3 (1-3)×10-5 0.1-0.4 0.1MPa, 15-30℃ 超临界流体,0.2-0.5 (1-3)×10-5 0.7×10-3 Tc, Pc 液体, 0.6-1.6 (0.2-3)×10-3 (0.2-2)×10-5 15-30℃
超临界流体色谱(SFC)特点 ※比HPLC具有更高的分离效率。 ※SFC使用温度较低,可以分离热稳定性差、高分子量的化学物。 ※SFC还可以与GC和HPLC的大多数的通用型或选择型的检测器相匹配。 第21章 高效液相色谱 法 21-4 超临界流体色谱
3、仪器 第21章 高效液相色谱法 21-4 超临界流体色谱
3、应用 超临界流体的特殊性,使得它有自己特点,是GC和HPLC 的重要补充,它可以分离分析气相色谱和高效液相色谱难以分离检测组分,或使分离分析更为方便和有效。 超临界流体色谱法被广泛地应用于聚合物、油脂类物质、环境样品、天然产物、药物等物质的分离分析。 第21章 高效液相色谱 法 21-4 超临界流体色谱