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枸杞 GGPS 基因的克隆及功能验证

枸杞 GGPS 基因的克隆及功能验证. 报告人：贾翠翠 学 号： 2012220002 指导教师：季静教授. 2013 . 9. 27. 1. 2. 3. 4. 目 录. 研究背景. 技术路线. 目前研究成果及下一步计划. 5. 时间安排. 研究背景.

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枸杞 GGPS 基因的克隆及功能验证

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Presentation Transcript

  1. 枸杞GGPS基因的克隆及功能验证 报告人：贾翠翠 学 号：2012220002 指导教师：季静教授 2013 . 9. 27

  2. 1 2 3 4 目 录 研究背景 技术路线 目前研究成果及下一步计划 5 时间安排

  3. 研究背景 牦牛儿基牦牛儿焦磷酸( GGPP) 是生物界普遍存在的重要中间代谢产物. 在植物中, GGPP参与叶绿素、类胡萝卜素、赤霉素、质体醌、维生素E、单萜和苯醌等产物的合成, 对植物光合作用、生长发育和产品品质等有重要影响. 当GGPP缺乏时, 赤霉素合成被抑制, 植株呈现矮小的现象. 该产物由牦牛儿基牦牛儿焦磷酸合成酶( GGPPsynthase, GGPS) 直接催化合成. 编码GGPS酶的基因已从番茄、辣椒、白羽扇豆、长春花、拟南芥、白芥中得到克隆.

  4. 类胡萝卜素代谢途径

  5. 研究目的 通过克隆牦牛儿基牦牛儿焦磷酸合成酶基因，并对其进行功能验证，进而为解明类胡萝卜素代谢的研究，诠释维生素A原的合成奠定基础。 研究意义 β-胡萝卜素是动物和人体内维生素A的合成前体物质，维生素A对机体的生长发育和新陈代谢有重要的作用，维生素A缺乏（VAD）是全球性公共卫生，在很多的非洲国家非常严重，主要是由于主食如玉米、水稻和小麦中的维生素A原的含量非常低，VAD病患者免疫系统薄弱，常伴有夜盲症、角膜瘢痕等疾病，大大增加了婴儿的传染病发病率和死亡率。 通过克隆类胡萝卜代谢途径中的关键酶基因，并把这些基因转入到玉米或者水稻等作物中，使之在作物中过量表达，从而直接提高类胡萝素含量，使人们远离VAD的困扰。

  6. 技术路线

  7. 实验结果 • 枸杞总RNA的提取

  8. 900bp 克隆枸杞GGPS基因 枸杞GGPS基因中间片段PCR产物的电泳图 3‘RACE PCR产物的电泳图 5’末端PCR产物的电泳图

  9. GTGGGGGGGAAGATTATTTGTAATACTTTATTTTTCAGGCTTGTGATTTGAATCTTGATTTAACAAGTGAAAATGAAAGGTGATTTGTTACTGTGGGGGGGAAGATTATTTGTAATACTTTATTTTTCAGGCTTGTGATTTGAATCTTGATTTAACAAGTGAAAATGAAAGGTGATTTGTTACT TAACCAATTTCTATTGTTAGAAATTGGATGTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA 推测氨基酸序列

  10. 烟草转基因

  11. 转基因烟草的检测

  12. 1.Southern杂交 2.实时定量PCR 3.HPLC 4.生理指标的测定 下一步计划

  13. 2012-09～2012-12 试验材料筛选；枸杞RNA的提取；反转录拿到基因 2012-12～2013-03 对已得数据进行整理，对基因进行生物信息学分析 2013-03～2013-08 烟草转基因及烟草的培育； 2013-08～2014-07半定量和RT-qPCR表达分析，HPLC类胡萝素含量检测 2014-07～2014-11 转基因烟草T1相关类胡萝素含量的检测，撰写及发表论文； 2014-12～2015-03 补充试验、试验结果的整理； 2015-03～2015-06 论文的撰写及答辩阶段。 时间安排

  14. Thanks for your attention

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