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血清（浆）脂类及脂蛋白测定

血清（浆）脂类及脂蛋白测定. —— 董雷鸣. 血脂的组成：. 甘油三酯 ( 少量甘油二酯和甘油一酯 ) 磷脂 胆固醇和胆固醇酯 非酯化脂肪酸（游离脂肪酸）等. 血脂的运输形式 — 脂蛋白. 1 、定义： 指 血浆脂质与载脂蛋白组成的可溶性的生物大分子。. 2 、结构：. 磷脂 胆固醇 载脂蛋白. 表面. 脂蛋白微粒. 甘油三酯 胆固醇酯. 核心. 3 、分类. (1) 按密度不同. HDL LDL IDL VLDL CM. CM. β-LP. 前 β-LP. α -LP. ＋. CM. LDL. VLDL.

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血清（浆）脂类及脂蛋白测定

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Presentation Transcript

  1. 血清（浆）脂类及脂蛋白测定 ——董雷鸣

  2. 血脂的组成： 甘油三酯(少量甘油二酯和甘油一酯) 磷脂 胆固醇和胆固醇酯 非酯化脂肪酸（游离脂肪酸）等

  3. 血脂的运输形式—脂蛋白 1、定义： 指血浆脂质与载脂蛋白组成的可溶性的生物大分子。

  4. 2、结构： 磷脂 胆固醇 载脂蛋白 表面 脂蛋白微粒 甘油三酯 胆固醇酯 核心

  5. 3、分类 (1)按密度不同 HDL LDL IDL VLDL CM

  6. CM β-LP 前β-LP α -LP ＋ CM LDL VLDL HDL (2)按电泳时区带的泳动位置不同 α -LP 前β-LP β-LP CM

  7. 临床血脂测定的常见项目：

  8. 实验51： 磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）

  9. 实验原理： 提取HDL 测定胆固醇

  10. 提取HDL的方法： 超速离心法 层析法 电泳法 ☆沉淀法

  11. 沉淀↓ ApoB + 多阴离子化合物 沉淀法原理：

  12. 多阴离子（polyanion）化合物 硫酸葡聚糖--Mg2+ 肝素--Mn2+ 磷钨酸--Mg2+

  13. 胆固醇测定（酶法）： 过氧化物酶 胆固醇 + O2胆甾烯酮 + H2O2 H2O2 + 酚 + 4-氨基安替比林 亚胺醌+ H2O

  14. 试剂： 沉淀剂 酶试剂 参考血清（TC测定用的定值血清）

  15. 操作步骤： 1、提取HDL 取血清和沉淀剂各200μl，充分混匀，置室温放置10min后，2500r/min，15min，吸取上清液按表进行操作。

  16. 2、测定胆固醇 混匀，37℃水浴15min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。

  17. 计算： 定值血清胆固醇浓度 测定管吸光度 5.17 × HDL-C (mmol/L) = 标准管吸光度 2 参考值： 0.9~2.0mmol/L

  18. 注意事项： 1、血清标本要及时测定 ——（在室温条件下，各型脂蛋白之间会发生脂质交换）； ——（游离的胆固醇会不断酯化）。 2、离心过程中防止温度过高（室温15~25℃），离心后放置时间不能过长。 ——（温度过高使沉淀不完全）。

  19. 临床意义： 具有抗动脉粥样硬化作用，是冠心病的保护因素。

  20. 实验49： 磷酸甘油氧化法测定血清甘油三酯（TG）

  21. 甘油三酯(TG)的结构：

  22. 甘油三酯测定的方法： 化学法 酶法

  23. 化学法 （KOH） （过碘酸） 抽提 甘油 甲醛 显色 皂化 氧化

  24. 甘油 甲醛 甘油三酯 紫红色 变色酸

  25. ☆酶法（磷酸甘油氧化酶法） LPL 甘油三酯 甘油+ 脂肪酸 GK + ATP 3-磷酸甘油 + ADP O2 、H2O + GPO 磷酸二羟丙酮 + H2O2 +酚、4-氨基安替比 POD 亚胺醌+ H2O

  26. 试剂： 酶试剂 2.26mmol/L的三油酸甘油酯标准液

  27. 操作： 37℃水浴10min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。

  28. 计算： TG (mmol/L) 测定管吸光度 = × 标准液浓度 标准管吸光度 2.26mmol/L 参考值： 0.56~1.70mmol/L

  29. 临床意义： 增高: 与动脉粥样硬化关系密切、家族性的脂代谢紊乱、糖尿病等。 降低: 营养不良、消化吸收综合征、消耗性疾病等。

  30. 注意事项： 标本： 标本要求是餐后12-14h的空腹血液 ——（血清TG易受饮食影响）。 标本存放不宜超过3天 ——（避免TG水解而释放出甘油）。 试剂： 酶试剂应4℃避光保存，出现红色不可再用 。

  31. 实验53： 免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A1和载脂蛋白B

  32. 原理： ApoA1 ApoB ApoA1抗体 ApoB抗体 抗原 + 抗体 抗原抗体复合物 比色

  33. 临床意义： ApoA1 与高脂血症、冠心病呈负相关； ApoB 与高脂血症、冠心病呈正相关。

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