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早上好！

早上好！. 许冰莹, Tel:0871-65922837； 13769175605 Email:bingying_xu@126.com. 昆明医科大学法医学院. 第十章 血清型 （ serum types ）. 教学内容和目的要求： （ Teaching contents and requirements ）. ＊ 1. 熟悉血清型的概念、分类、分型原理、法医学意义 。（ Serum type of concept, classification, typing principle, Significance of forensic medicine ）

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Presentation Transcript

  1. 早上好！

  2. 许冰莹, Tel:0871-65922837；13769175605Email:bingying_xu@126.com 昆明医科大学法医学院

  3. 第十章 血清型（serum types）

  4. 教学内容和目的要求：（Teaching contents and requirements） ＊1.熟悉血清型的概念、分类、分型原理、法医学意义。（Serum type of concept, classification, typing principle, Significance of forensic medicine） 2.了解HP的生化性质及生物学功能。 (Understanding of HP of biochemical properties and biological functions) ＊3.熟悉Hp分型原理、方法。 (Familiar with Hp typing principle and method)

  5. 第十章 血清型（serum types） 第一节 概 述 (Overview of serum types) 第二节 结合珠蛋白型 （Haptoglobin,Hp）

  6. 第一节 概 述(Summary) ＊一.血清型的概念(Concept of serum types) 二.血清型的分类与命名 (classification and naming of Serum type ) ＊三.分型原理(typing principle) ＊四.法医学意义（ Significance of forensic medicine ）

  7. 血清型的发现历史 1900年Landsteiner发现了第一个血型系统ABO血型 ↓ 1958年法国科学家Dausset从输血中发现了白细胞抗原 ↓ 20世纪60年代用电泳技术检测血清型及酶型 ↓ 20世纪70年代，等电聚焦技术应用

  8. ＊一.血清型的概念(Concept ofserum types) 人类某些血清蛋白具有遗传多态性，表型 有个体差异，称之为血清型。

  9. 一.血清型的概念 人类发现的第一个血清型遗传标记是结合珠蛋白。 在法医物证学鉴定中应用的血清型主要有： • 结合珠蛋白（HP） • 维生紊D结合蛋白（GC） • αl-抗胰蛋白酶（PI） • 转铁蛋白（Tf）

  10. 二.血清型的分类与命名 （Classification and naming） 分型依据：分型原理 两大类：同种异型遗传标记 血清蛋白电泳多态性遗传标记

  11. 二.血清型的分类与命名（Classification and naming） 1.同种异型遗传标记(Allotypes of Genetic marker） 同一种属不同个体免疫球蛋白抗原性的 差异，用免疫学方法测定。 免疫球蛋白Gm,Km, Am等。

  12. 二.血清型的分类与命名 2.血清蛋白电泳多态性遗传标记（血清型） 不同个体血清蛋白的电泳特性的差异。 原因：血清蛋白多肽链中部分肽链或个别 氨基酸不同，引起电泳迁移率发生变化构 成的多态性，用电泳技术分型。

  13. ＊三. 分型原理（Principle of Typing） 1.免疫学方法（Immunological methods） 同种异型遗传标记的分型。 以特异性抗体检测同种异型抗原，确定遗 传标记的型别。

  14. ＊三. 分型原理（Principle of Typing） 2.凝胶电泳技术（Gel electrophoresis Technology） • 在法医学鉴定中常用。 用凝胶电泳技术分析血清蛋白，获得血清 蛋白多态性遗传标记。

  15. ＊三. 分型原理（Principle of Typing） 2.凝胶电泳技术（Gel electrophoresis Technology） 原理：同一种血清蛋白不同表型的蛋白分子一级 结构存在差异，分子量和等电点不同，在一定pH 的凝胶中和一定的电场条件下，电泳迁移率不 同，依据蛋白谱带位置进行分型。

  16. ＊三. 分型原理（Principle of Typing） 3.DNA分型技术（DNA typing Technology） 原理：人类基因组编码DNA序列的差异。--- 不同个体血清蛋白表型的差异。

  17. 四.法医学意义(Forensic significance) DNA分型有诸多优势，并已逐步取代传统血 型，但血清型与DNA遗传标记相比，基因重组率 低，突变率低，在亲子鉴定中仍有应用价值。

  18. 第二节 结合珠蛋白型 （Haptoglobin,Hp） 一.Hp的生化性质与生物学功能 二.等位基因结构与命名 三.群体遗传学调查结果 ＊四.Hp分型原理、方法及法医学应用评价

  19. 一.Hp的生化性质及生物学功能(biochemical properties and biological functions of Hp) 1.生化性质(biochemical properties ) • 产生:肝脏合成，属α2球蛋白(占α2球蛋白 总量的1/4)。 • 分子结构:糖蛋白，含糖量约19.8%，由两条 α链和两条β组成。Hpl型与Hp2型 之间α链不同，β链相同。

  20. 一.Hp的生化性质及生物学功能 2.生物学功能( biological functions ) (1) Hb中的铁得以再利用(iron of Hb to reuse) 红细胞破坏—释出Hb—Hp与Hb 结合成Hp-Hb复合物—被网状 内皮系统吞噬—使Hb中的铁得以再利用。 (2)保护肾脏(Kidney protection) 形成的Hp-Hb复合物不易被肾小球滤过—防止血红蛋白沉积于 肾小管，从保护肾脏。

  21. 二.等位基因结构与命名 (The allelic structure and naming) (一)Hp基因(Hp gene) Hp基因定位 16q22.1 基因Hp*1：含5个外显子。 Hp*2基因：含有7个外显子。包括Hp*1基因第2, 4内含 子的部分和第3, 4外显子的全部，出现大 约1.7kb DNA片段的基因内重复，形成了 Hp*2基因。

  22. 1.7kb基因内重复 Hp*1基因和Hp*2基因结构示意图

  23. (一)Hp基因(Hp gene) • Hp*2基因第4外显子中的52位、53位，第6外显子中的111位、112位密码子也具有Hp*1F基因与 Hp*1S基因的差别。 Hp*2FF • Hp*2Hp*2FS Hp*2SS

  24. (一)Hp基因(Hp gene) • Hp普通型基因: Hp*1 ， Hp*2。 • Hp亚型基因: Hp*1F, Hp*1S, Hp*2FF, Hp*2FS, Hp*2SS。 • 按孟德尔规律呈共显性遗传. (Mendel's laws , codominant inheritance)。

  25. (二)Hp表型(Hp phenotype) 1.普通型(Ordinary type) Smithies(1955)采用淀粉凝胶电泳技术 将不同个体的Hp分为三型:Hpl-1, HP2-1, Hp2-2型。

  26. 2.亚型(Subtype) 8moI/L尿素使Hpl-1分子中α链变性，用巯基乙醇还 原后电泳，发现Hp*1基因产物由Hp*1F，Hp*1S两个 基因产物组成。可检出6种表型： Hp1S-1S、 Hp1S-1F、 Hp1F-1F、Hp2-1F、 Hp2-1S、 Hp2-2。

  27. (三)Hp遗传变异(genetic variation of Hp) 1.HpO 血液中Hp含量太低，用常规方法测不出Hp表 型，称为无结合珠蛋白血症(anhaptoglobinemia）。 Hp0型在中国汉族人群中约占0.81%。 胎儿血液中测不出Hp，称为HpO型。一般四 个月大的婴儿大部分可测出Hp型。

  28. Why？ • 造成个体HpO型的原因： Hp沉默基因存在。 Hp沉默基因编码Hp α链的基因片段缺失， 缺失DNA包含启动子部分，该基因称为 Hp*del。基因型为Hpdel/Hpdel。

  29. 三.群体遗传学调查 (Population genetics investigation) • Hp表型分布存在一定种族差异。 • 亚洲人： Hp2-2>Hp2-1>Hp1-1 • 白人： Hp2-1>Hp2-2>Hp1-1 • 黑人： Hp1-1>Hp2-1>Hp2-2

  30. 四.HP分型原理、方法(The principle, method of typing) 1.聚丙烯酰胺凝胶电泳（圆盘、垂直板） (Polyacrylamide gel electrophoresis) • 原理：利用聚丙烯酰胺凝胶（PAG）的分子筛和电场的作用，在凝胶中分离不同型别Hp蛋白。利用Hp-Hb复合物中Hb的过氧化物酶活性，使联苯胺氧化成联苯胺蓝，使谱带显色进行判型。

  31. 2.等电聚焦电泳分型—Hp亚型(Isoelectric focusing electrophoresis) 原理：用两性电解质（Ampholine）加入凝 胶系统，使处于正负极之间的凝胶形成一 个稳定的pH梯度，当蛋白质泳动至它们的 等电点位置时，不再带电荷，蛋白质停留在等 电点位置保持静止，以此来分离蛋白质。

  32. 2.等电聚焦电泳分型—Hp亚型

  33. 3.DNA分型技术(DNA typing techonlong) 原理：分析 Hp DNA编码序列。 方法：PCR技术 设计扩增Hp*1 ， Hp*2等位基因的引物，PCR 扩增，检测扩增产物， Hp*1为1757bp， Hp*2为 3481bp。

  34. 思考题 1.血清型的概念。 2.血清型的法医学意义。 3.Hp分型的原理和方法。

  35. Thank you!

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