实验四细胞毒实验（ MTT 法）

实验四细胞毒实验（MTT法）

实验原理 MTT法是利用细胞线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶对MTT还原成难溶的蓝紫色结晶，经二甲基亚砜（DMSO）溶解后，在波长490nm处吸收值间接反映细胞的活性状态以及活性细胞的数量。

实验方法 • 收集对数生长期的细胞接种于96孔培养板中，每孔90μl • （含2×105个/ml ），其中一孔加培养液90μl（作为调零孔） 2.培养过夜后，分别加入系列浓度的CdCl2溶液10μl，对照组加入同体积的1640培养液，每组设4个平行孔，处理0.5小时。 3.每孔加入5mg/ml MTT反应液20µl，轻轻摇匀，置37℃ 二氧化碳培养箱中培养5小时。 4.每孔加入三联液100µl，37℃ 二氧化碳培养箱中放置过夜。

5.以无细胞空白孔为调零孔，选择490nm波长，在酶联免疫检测仪5.以无细胞空白孔为调零孔，选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定MTT反应孔的光吸收值（OD490）。 6.细胞生长抑制率按下列公式计算：实验组平均OD值细胞生长抑制率％＝（1－）×100％对照组平均OD值

（三）MTT测定法 • MTT测定法的操作： • 用微量加样器将细胞悬液接种于96孔板中，每孔100µl。每孔加 • 入MTT反应液50µl摇匀，置37℃ 二氧化碳培养箱中培养2至4小时， • 2000rpm离心10分钟，弃上清。加入PBS，离心洗涤一次，再加入DMSO， • 每孔200µl，室温放置10分钟，并不时摇动，以溶解细胞。以无细胞 • 空白孔为调零孔，在酶联免疫检测仪上测定MTT反应孔的光吸收值 • （OD490）。

用MTT法测定CdCl2对细胞活性的影响 • 在接种好细胞的96孔培养板内，分别加入系列浓度的CdCl2溶液，每孔100µl，处理0.5小时。弃除CdCl2溶液，用PBS离心洗涤2次。用MTT法测定各组细胞活性，比较各种不同浓度的CdCl2处理前后细胞活性的变化。

实验四 细胞毒实验（ MTT 法）