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电针刺激大鼠足三里穴 对肝缺血再灌注损伤的保护作用. 李叶晟. 东方肝胆外科医院 特需治疗一科、肝脏移植科. 研究背景. 缺血再灌注损伤 肝切除、移植术后恢复的主要障碍!. 研究背景. 肝缺血再灌注损伤. 缺血期(损伤轻). 再灌注期(损伤重). 急性损伤 期 ( 1-6h ). 亚急性损伤 期 ( 6-24h ). ① 细胞内钙离子浓度变化 ②膜电位结构改变 ③代谢性酸中毒. ① Kupffer 细胞激活 ② 炎症因子释放 ③活性氧产生. ① Kupffer 细胞抑制 ②炎症因子减少 ③中性粒细胞聚集 ④肝细胞破坏. 研究背景.
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电针刺激大鼠足三里穴 对肝缺血再灌注损伤的保护作用 李叶晟 东方肝胆外科医院 特需治疗一科、肝脏移植科
研究背景 缺血再灌注损伤 肝切除、移植术后恢复的主要障碍!
研究背景 肝缺血再灌注损伤 缺血期(损伤轻) 再灌注期(损伤重) 急性损伤期 (1-6h) 亚急性损伤期 (6-24h) ①细胞内钙离子浓度变化 ②膜电位结构改变 ③代谢性酸中毒 ①Kupffer细胞激活 ②炎症因子释放 ③活性氧产生 ①Kupffer细胞抑制 ②炎症因子减少 ③中性粒细胞聚集 ④肝细胞破坏
研究背景 过度炎症反应 缺血再关注损伤的重要影响因素!
研究背景 “藏寒生满病,其治宜灸” —《黄帝内经》
研究背景 • 足三里穴属足阳明胃经的合穴 • 主治消化系统疾病,具有镇痛、提高免疫力、调节膈肌功能和抗炎的功用 • 电针刺激足三里穴对内毒素所致的全身炎症反应产生有较好的治疗作用[1,2] [1] 胡森、宋琪、王磊、吕艺、周国勇、盛志勇。电针兴奋胆碱能抗炎通路对内毒素引起的细胞因子释放和脏器功能损害作用的研究[J]。中国中西医结合急救杂志,2008,15:205-208。 [2] Huang CL, Tsai PS, Wang TY, Yan LP, Xu HZ, Huang CJ. Acupuncture stimulation of ST36(Zusanli) attenuates acute renal but not hepatic injury in lipopolysaccharide-stimulated rats[J]. International Anesthesia Research Society. 2007, 104:646-654.
材料与方法 1.分组及处理(n=10) SD大鼠(200± 20g) 随机数字表 假手术(A组) 缺血再灌注(B组) 非经络穴位电针刺激(C组) 足三里穴位电针刺激(D组) 70%肝组织缺血再灌注(90分钟)
材料与方法 2. 70%肝组织缺血模型[3] [3] Young CY, Harkema J, Dean RE, Naylor D, Crockett E, Role of P-selectin and Intercellular Adhesion Molecule-1 in Hepatic Ischemia/Reperfusion Injury[J]. Am Surg 2001, 67:737-744.
材料与方法 3.电针刺激的方法[4] [4] 李忠仁。实验针灸学[M]。北京:中国中医药出版社,2003:327-328。
材料与方法 4.详细定位及刺激强度 • C组:双后肢膝关节内下侧约5mm • D组:双后肢膝关节外侧腓骨小头下约5mm • 进针深度均为7mm[4] • 韩氏电针仪持续电针刺激45分钟,强度为4mA、2/100Hz[5,6] • 肝血流再灌注8小时后留取标本 [4] 李忠仁。实验针灸学[M]。北京:中国中医药出版社,2003:327-328。 [5] Wang XR, Xiao J, Sun DJ. Myocardial protective effects of electroacupuncture and hypothermia on porcine heart after ischemia/reperfusion[J]. Aucpuncture & Electro-Therapeutic Res, 2003, 28:193-200. [6] Wang XR, Lin H, Wang ZH. Protective effect of electroacupuncture and salviaemiltiorrhizae on myocardial ischemia/reperfusion in rabbits[J]. Aucpuncture & Electro-Therapeutic Res, 2003, 28:175-182.
材料与方法 5.检测指标和方法 • 血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)---全自动生化分析仪 • 肝中叶病理---H&E染色 • 肝组织mRNA (TNF-α、 IL-10 )--- ABI 7300实时定量PCR仪
材料与方法 6.统计学方法 • PSAW 18.0统计软件包 • 多组比较采用ANOVA 完全随机方差分析 • 组间两两比较采用LSD-多重比较 • 检验水准为0.05
结果 1.肝组织损伤指标ALT Notes:A—B、A—C、B—D、C—D:P<0.001, A—D:P=0.007; B—C:P=0.151
结果 2.肝中叶组织病理 大鼠肝中叶病理H&E染色(放大倍数×100)
结果 3.前炎症因子TNF-α Notes:A—B、A—C:P<0.001; A—D:P=0.209; B—C:P=0.664; B—D:P=0.003; C—D:P=0.001
结果 4.抗炎因子IL-10 Notes: A—B:P=0.008; A—C:P=0.013; A—D:P=0.001; B—C:P=0.848; B—D:P=0.431;C—D:P=0.329
讨论 大鼠肝中叶病理H&E染色(放大倍数×100) 肝组织损伤指标ALT • ALT在肝缺血再灌注损伤引起肝细胞破裂时大量释放入血 • 血清ALT及病理H&E染色结果均提示足三里穴电针刺激可有效减轻肝细胞损伤 • 非经络穴位电针刺激对肝损伤无明显保护作用
讨论 前炎症因子TNF-α 抗炎因子IL-10 • 电针刺激足三里穴明显抑制TNF-α的mRNA表达 • 该保护作用可能并非通过激活抗炎因子介导
讨论 胆碱能抗炎通路[7,8] • Ach抑制体外培养细胞释放TNF-α和IL-6等因子 • 迷走神经阻断导致载体实验中类似作用减弱或消失 • 直接刺激迷走神经操作复杂,危险性大 • 经皮电针刺激足三里穴也具有类似效果 [7] Borovikova LV, Svetlana Lvanova, Minghuang Zhang, Huan Yang, Botchkina GI, Watkins LR. Vagus nerve stimulation attenuates the systemic inflammatory response to endotoxin[J]. Nature.2000, 405:458-462. [8] Elahe T Crockett, James J Galligan, Bruce D Uhal, Jack Harkema, Robert Roth, KinnariPandya. Protection of early phase hepatic ischemia-reperfusion injury by cholinergic agonists[J]. BMC Clinical Pathology, 2006, 6: 1-13.
讨论 • 电针刺激足三里穴可明显减轻肝缺血再灌注损伤 • 其作用机制可能与胆碱能抗炎通路有关