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第 17 章 支原体

第 17 章 支原体. 支原体 ( Mycoplasma ) 是一类缺乏细胞壁、形态上呈高度多形性，可以通过一般的除菌滤器，是目前所知能独立生活，自行繁殖的最小原核细胞型微生物。由于它们能形成有分支的长丝，故称之为支原体。. 概 念. 支原体在自然界中广泛分布，因其缺乏细胞壁归属于柔膜体纲的支原体目支原体科。 支原体科又分四个属：支原体属、血虫体属、血巴尔通氏体属和脲原体属。 对人致病的主要为 肺炎支原体 、 人型支原体 、 生殖器支原体 、 穿通支原体 和 溶脲脲原体 。. 第一节 分 类. 第二节 肺炎支原体. 一、临床意义

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第 17 章 支原体

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  1. 第17章 支原体

  2. 支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁、形态上呈高度多形性，可以通过一般的除菌滤器，是目前所知能独立生活，自行繁殖的最小原核细胞型微生物。由于它们能形成有分支的长丝，故称之为支原体。支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁、形态上呈高度多形性，可以通过一般的除菌滤器，是目前所知能独立生活，自行繁殖的最小原核细胞型微生物。由于它们能形成有分支的长丝，故称之为支原体。 概 念

  3. 支原体在自然界中广泛分布，因其缺乏细胞壁归属于柔膜体纲的支原体目支原体科。支原体在自然界中广泛分布，因其缺乏细胞壁归属于柔膜体纲的支原体目支原体科。 支原体科又分四个属：支原体属、血虫体属、血巴尔通氏体属和脲原体属。 对人致病的主要为肺炎支原体、人型支原体、生殖器支原体、穿通支原体和溶脲脲原体。 第一节 分 类

  4. 第二节肺炎支原体 一、临床意义 • 肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae, MP)，是引起呼吸道感染的一种病原体，所引起的人类支原体肺炎病理变化以间质性肺炎为主，又称之为原发性非典型性肺炎。 • 过去认为肺炎支原体是温和的病原体，现也可引起严重的双侧肺炎和其他系统的肺外并发症。

  5. 第二节肺炎支原体 一、临床意义 • 肺炎支原体感染呈全球性分布，以温带为主。散在发病，3～5年出现一次地区性流行。 • 主要经飞沫传染。 • 流行特点为间歇性，长时期缓慢播散，可持续数月至一年。 • 患者以儿童和青年人居多，冬秋季较多见。

  6. 二、微生物学检验 （一）基本特性 1.形态与结构 • 短细丝状，长约2～5μm，在近细胞丝状体尖端有一球状的特殊结构；典型的肺炎支原体形态类似酒瓶状，无细胞壁，仅有细胞膜，电镜下其细胞膜由三层结构所组成。 • 革兰染色阴性，Giemsa染色淡紫色。 2.抗原结构 • 糖脂抗原：抗原性强，特异性差； • 蛋白质抗原：P1膜蛋白是支原体的主要型特异性抗原。

  7. （一）基本特性 3.培养特性 • 营养要求高，培养基中必须添加10%～20%的人或动物血清，初次分离培养支原体，尚须添加10%的酵母浸膏，并置于5%CO2的条件下生长较好。 • 生长最适pH为7.8～8.0，pH7.0以下可致其死亡，最适温度为36～37℃。 • 液体培养基中时有极浅淡的混浊； • 固体培养基上形成直径10～100μm的菌落。初次分离时菌落呈细小的草莓状，反复传代后呈典型的“油煎蛋”样菌落； • 半固体培养基中呈现肉眼可见的细小粒状菌落。

  8. （一）基本特性 肺炎支原体“油煎蛋”菌落(10×)

  9. （一）基本特性 人类主要支原体生物学性状 4.生化反应

  10. （一）基本特性 5.抵抗力 • 对热的抵抗力与细菌相似。 • 耐冷，-70℃或液氮可长期冻存。 • 如在4℃放置不要超过3d，56℃很快灭活。 • 对干燥敏感。 • 对青霉素、头孢菌素等作用于细胞壁的抗菌药物不敏感。 • 对作用于其核蛋白体，抑制或影响菌体蛋白合成的抗菌药物敏感，如红霉素、强力霉素、螺旋霉素等。

  11. （二）肺炎支原体的检验程序 1.标本采集 患者痰、咽拭子、鼻咽洗液、支气管分泌物、血清标本等 2.标本直接检查：1）标本涂片 2）核酸检测PCR法：快速、敏感和特异 3.分离与鉴定 • 分离培养：培养基是以牛心消化液为基础另加20%小牛血清及新鲜酵母浸液制成的液体或固体培养基。加入适当浓度醋酸铊、青霉素。 初次分离生长缓慢，先将标本接种于加有葡萄糖以及酚红、美蓝指示剂的液体培养基中增菌，1周后培养基由紫变绿，液体清晰，此时，可转种于固体培养基上。 • 鉴定：典型“油煎蛋”样菌落，能发酵葡萄糖产酸，不能利用精氨酸与尿素，可还原美蓝，能使无色的氯化三苯基四氮唑（TTC）还原为粉红色的甲臢。 4.抗体检测 • 方法有酶联免疫吸附测定、冷凝集试验、补体结合试验、间接血凝试验等。

  12. （二）肺炎支原体的检验程序

  13. （二）肺炎支原体的检验程序 阳性 阴性 肺炎支原体固体培养

  14. 第三节溶脲脲原体 溶脲脲原体 (Ureaplasma urealyticum, Uu)也称解脲脲原体，是1954年Shepard首先从非淋球菌尿道炎(NGU)患者的尿道分泌物中分离获得，因其菌落细小，故曾称为T支原体。按其分解尿素的特性命名为溶脲脲原体。在分类学上属人支原体科脲原体属。

  15. 第三节溶脲脲原体 一、临床意义 Uu寄居于人泌尿生殖道，主要传播途径为性接触传播和母婴传播。Uu所引起的疾病最常见的是非淋菌性尿道炎(NGU)，Uu多寄生在男性尿道、阴茎包皮和女性阴道。 若上行感染，可引起男性前列腺炎或附睾炎；女性阴道炎、宫颈炎，并可导致流产。也能引起早产儿及低体重新生儿呼吸道和中枢神经系统感染。

  16. 二、微生物检验 （一）基本特性 1.形态结构 • 以球形为主，直径约50~300nm，单个或呈双排列，能通过0.45μm微孔滤膜。 • 革兰染色阴性，姬姆萨染色呈紫蓝色。 • 无细胞壁，细胞膜由三层薄膜构成。 • 基因组大小为(4.1~4.8)×108， DNA中G+C含量为26.9～29.8mol%。

  17. （一）基本特性

  18. 二、微生物检验 2.培养特性 • 营养要求较高，需要供给胆固醇和酵母，常用的基础培养基为牛心消化液或商品PPLO肉汤。生长除胆固醇外，尚需尿素，Uu中的脲酶能水解尿素产氨，不分解葡萄糖和精氨酸。 • 37℃生长良好，22℃生长差，42℃不生长，最适pH为5.5~6.5。 • 在固体培养基上，置于含95%N2和5% CO2气体环境下培养2d形成15~50μm，颗粒状，呈“油煎蛋”样小菌落，放大200倍才能观察到。

  19. （一）基本特性 3.抗原构造 • 脂多糖抗原 • 蛋白质抗原 • 脲酶抗原：是Uu种特异性抗原 • Uu有16个血清型，其中以第4型引起疾病的频率最高。

  20. （一）基本特性 4.抵抗力 • 对渗透作用敏感，易被脂类溶媒、清洁剂、酒精、特异性抗体和补体溶解。 • 对热抵抗力差。 • 对青霉素等作用于细胞壁的抗菌药物不敏感，对影响胞浆蛋白合成的抗菌药物敏感。

  21. （二）溶脲脲原体的检验程序 1.标本采集患者中段尿，精液，阴道与宫颈分泌物，羊水和血液等。 2.标本直接检查 1）核酸检测:临床快速诊断的重要手段; 2）ELISA:可以测定血清型别，较敏感、特异性强，有早期诊断意义3）免疫斑点试验(IDT):较特异。 3.分离与鉴定 接种于pH6.0±0.5含有酚红和尿素的液体培养基中，37℃孵育，颜色由黄变红者判为阳性。转种于新的固体培养基上，Uu菌落呈黑褐色。此外，可作姬姆萨、革兰染色和细胞壁染色，观察菌体形态。 Uu分解尿素，不分解葡萄糖和精氨酸。进一步鉴定则需要特异抗血清作MIT和GIT。 4．抗体检测意义不大。

  22. 解脲脲原体液体培养阳性 解脲脲原体固体培养阳性 培养结果 阳性 阴性

  23. 第四节 其他支原体 一、人型支原体 • 人型支原体（M.hominis,Mh）主要寄居于生殖道，21% ～53%的性成熟女性子宫颈或阴道内可分离出Mh，男性尿道携带率低。通过性接触传播，可引起盆腔炎、输卵管炎、产后热、阴道炎与宫颈炎、肾盂肾炎等。此外，Mh也能引起新生儿感染，如脑膜炎、脑脓肿、硬脑膜下脓肿。 • 形态结构与溶脲脲原体相似，Mh能分解精氨酸，不分解尿素和葡萄糖。培养最适pH为7.2～7.4，液体培养基中因分解精氨酸产氨，pH增至7.8以上易死亡。在固体培养基上呈典型的“油煎蛋”样。 • 微生物学检验与溶脲脲原体相似。

  24. 第四节 其他支原体 二、穿通支原体 1990年Lo从AIDS患者尿中分离到新的支原体，命名为穿通支原体(M. Penetrans, Mpe)，也称穿透支原体。研究认为Mpe、发酵支原体、梨支原体三种新支原体是加速AIDS进程的一个协同因子。 （一） 临床意义 Mpe的尖形结构具有粘附和穿入作用，导致宿主细胞受损和死亡。研究表明Mpe对HIV感染者T细胞的作用，可能促进HIV的复制和病程的发展。因而提出Mpe感染是艾滋病的辅助致病因素。它对诱导TNF-α的表达可能也是造成细胞损伤的主要因素。

  25. （二）微生物学检验 Mpe杆状或长烧瓶状。培养营养要求高，培养基中需加血清，在改良的SP-4培养基生长，菌落呈“油煎蛋”样，生长较慢，发酵葡萄糖，水解精氨酸，但不分解尿素。 1. 标本采集 取AIDS患者或HIV感染者咽部黏液，血清、尿液等 2.分离培养与鉴定 • 分离培养：SP-4培养基，置37℃温箱培养。 • 鉴定 • 生化反应：发酵葡萄糖试验，水解精氨酸试验 • 代谢抑制试验(MIT) • PCR：套式PCR(nPCR) 3. 抗体检测

  26. 小结 支原体是一群缺乏细胞壁，介于细菌与病毒之间，能在人工培养基中生长繁殖的最小的原核细胞型微生物，形态上呈高度多形性，可通过滤菌器。 肺炎支原体是引起呼吸道感染的一种病原体，其P1蛋白在致病中起了重要的作用。所引起的人类支原体肺炎病理变化以间质性肺炎为主，又称为原发性非典型性肺炎。培养营养要求高，在固体培养基上，形成“油煎蛋”样菌落。革兰染色阴性。 解脲脲原体是人类泌尿生殖道常见的寄生菌之一，在特定的环境下可以致病，引起的疾病最常见的是非淋菌性尿道炎；男性前列腺炎或附睾炎；女性阴道炎、宫颈炎，并可导致流产。营养要求较高，需要提供胆固醇和酵母，尚需尿素，有脲酶能水解尿素产氨。 Mpe是加速AIDS进程的一个协同因子。

  27. 第18章 衣原体

  28. 一、衣原体的定义 • 革兰氏阴性病原体，在自然界中传播广泛； • 专性细胞内寄生，一般寄生在动物细胞内； • 对多种抗生素敏感； • 能通过细胞滤器，有独特发育周期、严格细胞 内寄生的原核细胞型微生物

  29. 二、 衣原体特点 具有DNA和RNA两种核酸，二分裂增殖，有核糖体和黏肽组成的细胞壁； 具有独立的酶系统，能分解葡萄糖释放CO2，但缺乏产生代谢能量的作用，因而表现严格的细胞内寄生； 其生活周期分为细胞外期（即有感染性的原体）和细胞内期（即增殖性的始体）两个时期；

  30. Giemsa或荧光抗体染色可在细胞核附近原浆查见衣原体包涵体；Giemsa或荧光抗体染色可在细胞核附近原浆查见衣原体包涵体； 衣原体基因组的Mr为660×10６,比除支原体外的任何原核生物都小； 可作涂片检查，补体结合试验及微量免疫荧光试验等检测方法，还可直接作细胞培养分离衣原体； 对多种抗生素敏感 二、 衣原体特点

  31. 三、衣原体与其他微生物的区别 • 衣原体与细菌的主要区别： 缺乏合成生物能量来源的ATP酶，其能量完全依赖被感染的宿主细胞提供。 • 衣原体与病毒的主要区别： • 具有DNA、RNA两种核酸、核糖体和一个近似细胞壁的膜，并以二分裂方式进行增殖，能被抗生素抑制。

  32. 四、衣原体结构 • 原体（elementary body，EB）：体积小，卵圆形电子密度大，直径为0.2～0.4微米，细胞壁厚。 • 始体（initial body）亦称网状体(reticulate body，RB) ：球状细胞，形体较大,呈圆形或不规则形，电子密度较小，直径约为0. 3 ～0. 5微米，细胞壁薄，壁中结构松散。 • 中间体 (Intermediate body)：存在的一种过渡形态。

  33. N:细胞核;燕尾箭头:网状体;五角星:中间体;箭头:原体; Bar = 1μm

  34. 五、衣原体的两相生活史 • 有感染性的原体（elementary body，EB） • 一种不能运动的球状细胞，对外界不良环境抵抗力强。 • 无感染性的始体（initial body）亦称网状体(reticulate body，RB) • 以二分裂进行繁殖，产生小细胞，当寄主细胞解体后，这些小细胞能被释放出来，再去侵染另一些寄主的细胞。

  35. 衣原体发育周期

  36. 第一节 衣原体的分类 • 四种衣原体是引起人类和动物一系列疾病的病原 • 沙眼衣原体(C. trachomatis ) • 鹦鹉热衣原体(C. psitta ) • 肺炎衣原体(C. pneumoniae) • 家畜衣原体(C.pecorum)

  37. 第二节 沙眼衣原体 不仅能引起眼科的感染性疾病，还可以引起泌尿生殖道、呼吸道感染等。其中以沙眼最常见。而且是致盲的首位因素。人类是其主要的自然宿主。

  38. 这两个亚种的自然宿主都是 人，分别感染眼、生殖道和 呼吸道以及淋巴结。 1.分类 • 沙眼衣原体生物亚种 • 性病淋巴肉芽肿生物亚种（biovar lymphogranuloma venereum，LGV） • 鼠生物亚种 这种亚种为鼠间传播，不 感染人，与鼠肺炎有关

  39. 2.生物学特性 原体较小，Giemsa染色呈紫色； 始体较大，形状不甚规则；以二分裂方式繁殖，生成新的原体，在结膜上皮细胞胞浆内形成包涵体； 包涵体可呈散在型、帽型、桑椹型或填塞型， Giemsa染色呈深紫色； 接种鸡胚卵黄囊中，鸡胚死亡后卵黄囊膜涂片可见衣原体颗粒，病理切片可见细胞内包涵体。

  40. 3.致病性与免疫性 致病性： 沙眼衣原体：沙眼亚种和性病淋巴肉芽肿亚种 人类感染 （1）沙眼：沙眼亚种引起。 （2）包涵体结膜炎：同上。 （3）泌尿生殖道感染； （4）性病淋巴肉芽肿：LGV生物亚种引起 • 免疫性： • 产生抗体，但维持时间不长。

  41. 4.微生物学检测 • （1）标本直接检查 • 显微镜检查 • 1）Giemsa染色：原体染成紫红色，网状体或始体呈 • 蓝色。此法简单易行，但敏感性较低。 • 酶免疫检测 • 胶体金法检测衣原体 • 核酸检测 • （2）抗体检测 2）免疫荧光检查：

  42. 第三节 肺炎衣原体 肺炎衣原体是衣原体属中的一个新种，只有一个血清型，其代表株为TW-183和 AR-39，因两株衣原体的血清型完全相同，以这两株的字头合并后，称作TWAR组衣原体，98kD蛋白为其特异性抗原。

  43. 1.分 类 • 只有一个血清型，在1989年正式被命名 • 是一种重要的呼吸道病原体 • 代表菌株——TWAR株

  44. 2.临床意义 • 寄生于人类，也寄生于马和考拉树熊体内； • 主要引起青少年急性呼吸道感染，可引起肺炎、支气管炎、咽炎和鼻窦炎等； • 临床表现：咽痛、声音嘶哑等； • 慢性感染与急性心肌梗死和慢性冠心病有关； • 慢性肺炎衣原体感染可能是冠心病的一个重要因素。

  45. 3.致病性与免疫性 • 目前已新分离出10多株肺炎衣原体，是一种重要的呼吸道病原体。 • TWAR主要引起青少年急性呼吸道感染，可引起肺炎、支气管炎、咽炎和鼻窦炎等。

  46. 4.微生物学检测 • （1）标本直接检查： • 直接显微镜检查： • Giemsa染色查找包涵体——参考价值 • TWAR特异性核酸检测： • 采用PCR技术 • （2）细胞分离、培养与鉴定： • 选用HEP-2和H-292细胞系进行分离培养。 • 鉴定——直接或间接法荧光染色。 • 观察并计算——包涵体数目。

  47. 第四节 鹦鹉热衣原体 鹦鹉热衣原体首先从鹦鹉体内分离出来，可感染家禽、家畜（如牛、羊、猪、猫、豚鼠等）、和野生动物（如海貂、麝鼠、野兔、跳羚、树袋熊、苏门羚、野猪、袋鼠、野猴）等，主要引起动物肺炎、关节炎、流产和毒血症等多种疾病，也可感染人类引起非典型性肺炎等。

  48. 1.分类 可将鹦鹉热衣原体分为A、B、C、D、E、F、M56和WC 8个血清型和至少9个基因型，每个血清型株均表现出一定的感染宿主的特异性。

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