slide1 n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
שיעור מספר 3 PowerPoint Presentation
Download Presentation
שיעור מספר 3

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 92

שיעור מספר 3 - PowerPoint PPT Presentation


  • 506 Views
  • Uploaded on

שיעור מספר 3. אבחון גנטי מעבדתי יכול להתבצע ברמות הבאות:. ברמת רצף ה- DNA - בדיקה מולקולרית לזיהוי של מוטציות נקודתיות, חסרים ותוספות קטנות. ברמת הכרומוזומים – בדיקה ציטוגנטית . (תקינות מספר וצורת הכרומוזומים, זיהוי של טרנסלוקציות , חסרים וכו ')

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'שיעור מספר 3' - cade


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide2
אבחון גנטי מעבדתי יכול להתבצע ברמות הבאות:
  • ברמת רצף ה-DNA- בדיקה מולקולרית לזיהוי של מוטציות נקודתיות, חסרים ותוספות קטנות.
  • ברמת הכרומוזומים – בדיקה ציטוגנטית. (תקינות מספר וצורת הכרומוזומים, זיהוי של טרנסלוקציות, חסרים וכו')
  • ברמת החלבון – בדיקה ביוכימית לחלבון (רמה – כמות החלבון או תקינות החלבון).
slide3

נושאים

  • מבוא- החומר הגנטי וצורות תורשה
  • עץ גנטי, סוגי תורשה גנטית, מחלות גנטיות
  • ציטוגנטיקה כללי ואבחון טרום לידתי
  • כרומוזומים והפרעות כרומוזומליות (טרום לידתי ופוסט לידתי)
    • שינויים מספריים
    • שינויים מבנייים
  • כרומוזומים והפרעות כרומוזומליות בסרטן
  • ציטוגנטיקה מולקולרית
    • FISH
    • שבב גנטי
slide4
כרומוזומים
  • הכרומוזומים בנויים מחומר שנקרא כרומאטין, שהמרכיב העיקרי שלו הוא ה- DNA.
  • הכרומוזומים נמצאים בדרך כלל בצורת רשת כרומטין בתוך גרעין התא, שנמצא כמעט בכל תא ותא בגופנו. לקראת חלוקת התא רשת הכרומאטין מתארגנת למבנים המכונים כרומוזומים.
  • מספר הכרומוזומים התקין באדם הוא 46; 23 מקורם בביצית מהאם ו-23 מקורם בזרעון מהאב.
  • בדיקת הכרומוזומים נקראת קריוטיפ ונבדקת בשיטה ציטוגנטית
slide5
ציטוגנטיקה
  • כרומוזום = Chromosome

צבע = Chroma

גוף = Soma

slide6
כיצד נזהה את הכרומוזומים?
  • הזיהוי נעשה על פי מבנה הכרומוזום:
  • מיקום הצנטרומר (איזור המצוי על פני כל כרומוזום הניתן לזיהוי בקלות במיקרוסקופ).
  • אורך הכרומוזום
  • פיספוס = Banding
slide7

מבנה כרומוזום

טלומר

כרומטידות אחיות

צנטרומר

טלומר

slide8

מטצנטרי = metacentric

סבמטצנטרי = submetacentric

אקרוצנטרי = acrocentric

p

q

slide9
קריוטיפ
  • קריוטיפהוא תמונה של מערך כרומוזומים של מין או פרט מסוים.
  • בבדיקת קריוטיפ נבדקים מספר הכרומוזומים וצורתם.
  • הבדיקה מתבצעת על תאים שמתחלקים (מיטוזה) ממקורות שונים: פיברובלסטים, תאי דם
  • טרום הלידה או בפרט שנולד (פוסט לידתי)
slide10
אבחון גנטי טרום לידתי
  • אבחון גנטי טרום השרשתי

PGD Preimplantation Genetic Diagnosis=

  • אבחון גנטי פוסט השרשתי
    • מי-שפיר.
    • סיסי שיליה.
    • דם מחבל הטבור.
slide11

אבחון טרום לידתי מוצע לזוגות העוברים טיפולי פוריות במטרה למנוע העברה של עובר פגוע ב:

                  • מחלה תורשתית קשה הגורמת למוות או פגיעה משמעותי באיכות החיים
                  • שינוים כרומוזומליים
                  • ציטוגנטיקה
                  • מולקולרית

Cleavage stage

embryo

שיטה קיימת

slide12
אבחון טרום השרשה
  • יתרונות:
    • ניתן למנוע יצירת עובר חולה
  • חסרונות:
    • יש צורך בטיפולי פוריות
    • לא כל המחלות ניתנות לזיהוי מוקדם
slide13
סיסי שלייה
  • יתרון :
    • שבוע הריון מוקדם- ניתן לבצע גרדה
  • חסרונות
    • סיכון של כ-1% להפלה
    • זיהום אימהי
    • מוזאיקה ייחודית לשלייה. לעיתים נדירות בלבד מתקבלת תשובה מטעה המעידה על בעיה כרומוזומאלית שאינה מופיעה בעובר ( 1-2% ).
slide14
בדיקות כרומוזומים ממי שפיר

גידול תרבית של תאים פיברובלסטים מתאי העובר

הסיבות לבדיקה:

1. שינויים מורפולוגיים באולטראסאונד של העובר

2. במשפחה יש פרט הסובל מבעיה כרומוזומלית.

3. בדיקות דם של האישה ההרה מנבאות סיכון גבוה ללידת דאון.

4. גיל האישה עולה על 35.

5. רצון בני הזוג.

slide15
דיקור מי שפיר
  • יתרון:
    • אבחון לפני הלידה
  • חסרון:
    • סיכון להפלה של כ 0.5%
slide16
דם טבורי
  • יתרונות:
    • פונים לבדיקה הזו כאשר בדיקות קודמות לא היו חד משמעיות. תשובה ודאית מרקמת עובר
  • חסרונות:
    • מיומנות גבוהה לדיקור מוצלח
    • לפחות שבוע 20 (שיראו חבל טבור בבירור)
    • סיכון להפלה 2-4%
slide19

נושאים

  • מבוא- החומר הגנטי וצורות תורשה
  • עץ גנטי, סוגי תורשה גנטית, מחלות גנטיות
  • ציטוגנטיקה
  • כרומוזומים והפרעות כרומוזומליות (טרום לידתי ופוסט לידתי)
    • שינויים מספריים
    • שינויים מבנייים
  • כרומוזומים והפרעות כרומוזומליות בסרטן
  • ציטוגנטיקה מולקולרית
    • FISH
    • שבב גנטי
slide20
בדיקות כרומוזומים מדם

גידול תרבית מתאי דם לבנים

הסיבות לבדיקה:

1. ליקוי שכלי והתפתחותי

2. דיסמורפיה של איברי הגוף

3. הפלות חוזרות הנגרמות לעיתים בגלל טרנסלוקציה מאוזנת

4. בעיות בכרומוזומי המין

slide21
שינויים כרומוזומליים
  • שינוי במספר הכרומוזומים
  • Euploidy/polyploidy
  • Aneuploidy
  • שינוי במבנה
  • טרנסלוקציות
  • תוספות או חסרים
aneuploidy
Aneuploidy

מספר הכרומוזומים שונה מהנורמה

  • בצמחים ללא בעיה
  • בחיות לרוב לטאלי
  • באוטוזומים (כרומוזומים מספר 1-22)
  • מונוזומיה - 2n -1
  • טריזומיה – 2n +1
  • נוליזומיה – 2n – 2
  • בכרומוזומי המין- מתואר כ-XX, XXY, XO, XYY
trisomy
Trisomy

2n + 1

  • לטאלי בחיות בשל חוסר שיווי משקל כרומוזומי
  • במקרה ובר-חיות באדם - עלול להיות לא פורה
  • XXY- תסמונת ע'ש Kleinfelter
  • XYY – לרוב ללא בעיה, סיכון של ליקויי פיריון
  • XXX – ליקויי פריון בסיכון מעט מעל לסיכון הרקע
  • טריזומיה 21 – תסמונת דאון
slide24
מצבים כרומוזומלים לא נורמליים
  • מהווים 0.7% מכלל הלידות של עוברים חיים!
  • מהווים 50% מכלל ההפלות הספונטניות בשליש הראשון של ההריון!
  • 15% מכלל ההריונות מסתיימים בהפלה ספונטנית!

מכאן ש:

במעל מ-7.5% מכלל ההריונות יש מצב כומוזומלי לא נורמלי!!!

slide25
מקור אברציות כרומוזומליות (מצב כרומוזומלי לא תקין) באדם
  • הפריה
  • מיוזה
  • מיטוזה
slide26
מצבים כרומוזומליים לא נורמליים בשל הפריה לא תקינה
  • Triploidy:
  • 2 תאי זרע + ביצית אחת
  • ביצית דיפלואידית + תא זרע
  • Tetraploidy:

הכפלה של הגרעין בזיגוטה

slide27

מצבים כרומוזומליים לא נורמליים בשל

חסר הפרדה = non-disjunction

  • Aneuploidy 2n +1 אנהפלואידיות
  • Polyploidy: 3n, 4n פוליפלואידיות
  • תא ביצה ללא גרעין/כרומוזומים + 2 תאי זרע
  • תא ביצה ללא גרעין/כרומוזומים + תא זרע שהכפיל את עצמו.
  • התפתחות רקמה עוברית מתא מין אחד עם 2n כרומוזומים.
  • Uniparental disomy = UPD, הורשה של זוג כרומוזומים הומולוגיים מהורה אחד בלבד.
slide28

חוסר הפרדה במיטוזות לאחר יצירת הזיגוטה גורם למצב של מוזאיקה

חלוקות תקינות

חלוקות לא תקינות

slide29

חוסר הפרדה במיוזה

חלוקה Iלא תקינה

חלוקה II לא תקינה

slide30

תסמונת דאון (Down Syndrome) - טריזומיה 21

מאפיינים קליניים:

פיגור שכלי, ידיים קצרות, צוואר קצר, לשון ארוכה, נטיה למחלות לב, פתולוגיה מוחית כשל חולי אלצהיימר (מעל לגיל 35), עקרות זכרית.

סיכון הגדול פי 10 לחלות בלוקמיה.

כף היד מאופיינת בקו רוחב אחד בלבד.

prenatal diagnosis 21
Prenatal diagnosisאבחון טרום לידתי לטריזומיה 21
  • בדיקה ביוכימית בסרום האם לרמה של 3 חלבונים לזיהוי קבוצת סיכון (שבוע 16):
  • Alphafetoprotein
  • Beta human chorionic gonadotropin
  • Estriol
  • Ultrasound = שקיפות עורפית (שבוע 11)
  • CVS / amniocentesis בדיקה ציטוגנטית (כרומוזומים)
slide33
גורמים המגדילים את הסיכון לטריזומיה 21
  • גיל האם.
  • ילד קודם עם טריזומיה 21

- גורמים גנטיים

- מוזאיקה בתאי המין

  • אם עם תסמונת דאון.
trisomy 18 edwards syndrome
Trisomy 18 ( Edwards Syndrome)
  • שכיחות של 1/6000 מהלידות.
  • פיגור שכלי חמור.
  • עיוות במבנה כליות.
  • פגמים בלב.
  • פגמים קשים במבנה ידיים ורגליים + עיוותים מרובים במבנה הגוף.
  • פיגור בגדילה תוך רחמי.
  • מוות תוך השנה הראשונה לחיים.
  • 95% מופלים באופן ספונטני.
slide35

טריזומיה 13

  • מאפיינים קליניים:
  • שכיחות: 1/16000לידות
  • פיגור שכלי חמור
  • שפה/חך שסוע, ריבוי אצבעות, עיוורון, חירשות, פגמים בלב ובכליות.
  • מוות תוך השנה הראשונה לחיים.
slide37
תסמונת טרנר 45X

מאפיינים: נמוכות קומה, צואר מעובה, נטיה למחלות לב, בעיות מוטוריות, אברי מין פנימיים לא מפותחים, עקרות.

IQ לרוב תקין, או מעט מתחת הממוצע המשפחתי

שכיחות : 1:10,000

47xxy
תסמונת קליינפלטר – 47XXY

נראים בנים נורמלים עד לגיל ההתבגרות.

בעיה בהתפתחות אברי המין, אשכים נשארים קטנים, וסימני מין משניים חסרים.

בדרך כלל עקרים.

שכיחות : 1:1000

slide40
שינויים כרומוזומליים
  • שינוי במספר הכרומוזומים
  • Euploidy/polyploidy
  • Aneuploidy
  • שינוי במבנה
  • טרנסלוקציות
  • תוספות או חסרים
slide41

מטצנטרי = metacentric

סבמטצנטרי = submetacentric

אקרוצנטרי = acrocentric

p

q

slide42
טרנסלוקציה (שחלוף)

טרנסלוקציהרוברטסונית

קיים חיבור בין 2 כרומוזומים כמעט בשלמותם

רק בין כרומוזומים אקרוצנטרים

טרנסלוקציה רציפרוקלית

חלק של כרומוזום אחד נשבר ועובר לכרומוזום אחר

slide43

נשא טרנסלוקציה מאוזנת

חלוקת גמטות (העברת חצי מהחומר הגנטי לצאצא)

אין שינוי בכמות החומר הגנטי המועבר לצאצא

שינוי בכמות החומר הגנטי המועבר לצאצא

צאצא מאוזן/תקין

צאצא שאינו מאוזן

slide44
טרנסלוקציה לא מאוזנת
  • כאשר יש שינוי בכמות החומר הגנטי ולכן מתבטא בשינוי בפנוטיפ

לדוגמא: מורגן נולד עם שינוי

שאינו מאוזן בין כרומוזומים

18 ו-9 שמתבטא:

בטריזומיה חלקית של כרומוזום

18

מונוזומיה חלקית של כרומוזום 9

slide45
אינברסיה- היפוך
  • היפוך מקטע בתוך הכרומוזומים כך שלא נוצר שינוי בכמות החומר הגנטי
  • יכול לגרום להפלות חוזרות או לידת צאצא שאינו מאוזן
  • יש כמה אינברסיות שכיחות באוכלוסיה המועברות בהורשה ונחשבות תקינות (כרומוזומים 2,9,17)
deletion
חסר-deletion

מצב לא תקין שבו קיים חוסר של חומר גנטי

duplication
הכפלה-duplication

מצב לא תקין שבו קיים עודף של חומר גנטי

slide48
חסר/תוספת מזערית
  • שינויים קטנים שלא בהכרח יראו בשיטת הקריוטיפ.
  • נוצרים מהפרעות בשחלוף בין כרומוזומים הומולוגים בזמן יצירת הגמטות במיוזה
  • בד"כ מופיעים כסינדרום מוכר
slide49

סינדרום יללת החתול - cri du chat syndrome

שכיחות: 1:50,000

חסר של הזרוע הקצרה של כרומוזום 5

מאפיינים קליניים:

פיגור שכלי, מוח מוקטן,

בכי הנשמע כמו יללת חתול

digeorge velocardiofacial syndrome
DiGeorge/velocardiofacial syndrome

חסר על הזרוע הארוכה של כרומוזום 22 (22q11.2)

סימנים קליניים מאפיינים: מום לב מלידה, חסר חיסוני, אי ספיקת חיך

ליילודים הלוקים בתסמונת זו מראה פנים חריג: מרווח גדול בין שתי העיניים, אוזניים בולטות ונמוכות, סנטר קטן ונסוג.

slide51
תסמונת פראדר-וילי
  • חסר קטן באזור מאד קרוב בכרומוזום 15 שהגיע בזרעון מהאב מתבטא בתסמונת פראדר-וילי.
  • תופעות: רעב בלתי נלאה, אכילה בלתי פוסקת, כל דבר – מגיל שנתיים-שלוש; השמנה מיוחדת; ישנוניות, אך כעס נוכח תסכול, במיוחד בהגבלת מזון; היפוגונדיזם, בעיות במחזור החודשי בנשים; קומה נמוכה; לרובם המכריע ליקויי לימוד עד פיגור קל
slide52
תסמונת אנגלמן
  • חסר קטן מאד בכרומוזום 15 שהגיע מהאם מתבטא בתסמונת אחרת: תסמונת אנגלמן.
  • פיגור שכלי, מיקרוצפליה
  • בעיות דיבור קשות עד חוסר דיבור
  • התקפים אֶפּילֶפּטיים, בעיקר ביַלדוּת
  • תנוחת ידיים ורגליים מיוחדת, הליכה קופצנית, לא יציבה, מבנה פנים מיוחד
  • התנהגות מאושרת, פרצי צחוק
slide54

נושאים

  • מבוא- החומר הגנטי וצורות תורשה
  • עץ גנטי, סוגי תורשה גנטית, מחלות גנטיות
  • ציטוגנטיקה
  • כרומוזומים והפרעות כרומוזומליות (טרום לידתי ופוסט לידתי)
    • שינויים מספריים
    • שינויים מבנייים
  • כרומוזומים והפרעות כרומוזומליות בסרטן
  • ציטוגנטיקה מולקולרית
    • FISH
    • שבב גנטי
slide55
גנטיקה של מחלת הסרטן
  • הסרטן הוא בדרך כלל תוצאה של מוטציות בתאים סומטיים (תאי גוף, לא תאי מין).
  • כתוצאה ממוטציות אלו נגרמו שינויים בביטוי של סדרה של גנים, אשר מובילים להתפתחות מחלת הסרטן.
  • בדרך כלל הפגיעה היא בגנים האחראים לחלוקה של תאים, התפתחות והתמיינות התאים, ופעילויות חיוניות אחרות בתא.
slide56
פנוטיפ של תאי סרטן

גידול לא מבוקר של התאים

אי יציבות גנומית

שיעור גבוה של שינויים כרומוזומלים ומוטציות

תאים לא מתים

יכולת לחדור דרך רקמות וליצור גרורות

slide57

גידול סרטני בתרבית רקמה

גידול סרטני רקמה נורמלית

Genetic instability can be an important

factor in cancer evolution

slide58

התפתחות הסרטן הוא תהליך רב-שלבי

  • התפתחות הסרטן הוא תהליך רב שלבי
  • הדורש התרחשות של כ-7 מוטציות בתא
  • כל מוטציה נותנת יתרון לגידול ולקצב החלוקות של התא
  • כך שהקלון (שבט) שמתקבל מיוצג על ידי מספר רב יותר של תאים

Mutation 1

Mutation 2

גידול סרטני

Mutation 3

Mutation 4

Mutation 5

slide59
רטינובלסטומה

מאפיינים: גידולים ממאירים ברשתית העין.

שכיחות: 1:20,000

40% מהמקרים הם תורשתיים.

אלל אחד מוטנטי עובר בירושה, ומוטציה שניה מתרחשת באלל השני ברקמת העין.

slide60
סרטן השד
  • כ- 180,000 מקרים חדשים כל שנה.
  • 50% מהמקרים יובילו למוות כתוצאה מהמחלה.
  • 10% מהמקרים של סרטן השד הם תורשתיים.
  • אורח ההורשה דומה לאוטוזומלי דומיננטי.
  • BRCA1 אחראי ל50% מהמקרים התורשתיים.
  • גנים נוספים הגורמים לסרטן שד תורשתי BRCA2 ו- TP3.
slide61
מדוע חשוב לזהות בני משפחה הנושאים מוטציה ?

1. הגברת מאמצי מעקב

2. כריתת שדיים מניעתית (מניעה של כ 90%- מהמקרי סרטן שד)

3. כריתת שחלות מניעתית (מניעה של כ 95%- מהמקרי סרטן שחלה)

4. טיפול תרופתי מניעתי הורמונלי

( עשוי להקטין את הסיכוי ב- 50% ,BRC2 ( יעיל רק עבור נשאיות

slide62
בדיקות כרומוזומים מלשד עצם
  • גידול תרבית של תאים מלשד עצם.
  • בחולי לאוקמיות מתרחשים לעיתים שינויים במבנה הכרומוזומים בלשד העצם.
  • אבחון השינויים עוזר לקבוע את סוג המחלה,והטיפול בה.
slide63
לוקמיה מילואידית כרונית

• מהווה 15-20% מכלל הלוקמיות במבוגרים (תדירות של 1.6:100,000 איש בשנה)

• גיל ממוצע באבחנה 50-60

• תסמינים נפוצים: אנמיה, טחול מוגדל, ספירה לבנה נמוכה, תאים מיאלואידיים לא בשלים בדם פריפרי

• נגרמת כתוצאה משגשוג בעודף של תאים לימפואידים וכשל התמיינותי

slide64

מעל 90% מחולי CML מכילים טרנסלוקציהt(9;22) (כרומוזום פילדלפיה) הגורמת ליצירת אונקוגןכימרי BCR‐ABL עם פעילות תמידית של טירוזיןקינאז האחראי לשינויים בתהליכים הכוללים:

- עידוד התרבות והתמיינות

- הגברת הדבקות של תאים

- עיכוב מוות תאי מתוכנן (אפופטוזיס)

bcr abl
יש יתרון הישרדותי על -פני תאי אב אחרים לתאים המבטאים BCR-ABL

Glivec

  • סריקה של חומרים המעכבים פעילות של טירוזיןקינאזות
  • איתור מעכב ייחודי כנגד החלבון המאוחה
  • מדכא חלוקה של התאים המותמרים באופן סלקטיבי
  • 95% מהחולים משלב הכרוני מגיבים היטב, אולם רק 30% מהחולים מגיבים בשלב הקריטי
slide67
CLL
  • סוג של לוקמיה כרונית (גדילה לא מבוקרת של התאים הלבנים מסוג לימפוציטים)
  • מחלה המאפיינת מבוגרים, לעיתים סרטן משני
  • הגיל הממוצע לגילוי המחלה הוא בשנות בסביבות גיל 70
  • המחלה יכולה להיות אסימפטומטית ולהתגלות "במקרה"
slide68

החולים שורדים בין 5-25 שנה מגילוי המחלה

  • חוסר תמותה של התאים כתוצאה מפגיעה בד.נ.א
  • תאי ה B אינם מתפקדים ביעילות- רגישות גבוהה לזיהומים.
slide69
אבחנה
  • תמונת דיפרנציאל בספירת דם כללית
  • לימפוציטוזיס
  • מרקרים על גבי התאים הלבנים

CD5;CD19; CD20, CD23

slide70
טיפול
  • הטיפול ניתן בהתאם להרגשת החולה. קיימות מספר קומבינציות של טיפול כימוטרפי. בד"כ אין נסיגה מלאה של המחלה אלא מחלה "שקטה".
slide71
מאפיינים ציטוגנטיים של CLL
  • High-risk cytogenetic abnormalities
    • del 17p13 (encodes the TP53 tumor-suppressor gene)
    • del 11q23 (encodes the ataxia telangiectasia (ATM) gene )
    • del 13q14 (encodes the retinoblastoma (Rb) gene)
    • Trisomy 12
conclusions and research goals
Conclusions and research goals
  • A Risk-Based Treatment Approach
  • Prognostic tools
slide73
FISH
  • זיהוי של אתר בגרעין שסומן עם גלאי פלורסצנטי.
  • בשיטה זו ניתן לאבחן חסרים ספציפיים או תוספות קטנים או אנאפלואידיה (מספרי בלבד).
  • יתרונות:
    • גילוי של מקטע סבמיקרוסקופי
    • אין צורך במטפזות
  • חסרונות:
    • תשובה תואמת לשאלה- יש צורך ב"ידע קודם"
slide74
Peripheral blood

Short term culture-lymphocytes

Cholchicine

Hypotonic treatment

Fixation

Slide preparation

Fluorescence In-situ hybridization

(FISH)

Sample preparation:

slide76

נושאים

  • מבוא- החומר הגנטי וצורות תורשה
  • עץ גנטי, סוגי תורשה גנטית, מחלות גנטיות
  • ציטוגנטיקה
  • כרומוזומים והפרעות כרומוזומליות (טרום לידתי ופוסט לידתי)
    • שינויים מספריים
    • שינויים מבנייים
  • כרומוזומים והפרעות כרומוזומליות בסרטן
  • ציטוגנטיקה מולקולרית
    • FISH
    • שבב גנטי
slide78
צ'יפ גנטי
  • מודד כמות של דנא
  • משווה בין 2 דוגמאות: נבדק מול ביקורת
  • סריקה של 46 כרומוזומים ברזולוציה תת מיקרוסקופית לגילוי של שינויים (תוספות וחסרים)
slide79
שיטת הבדיקה

דנא של ביקורת(cy5)

צ'יפ המכיל מקטעי דנא

מגיב עם הדנא הגנומי המסומן

עירבוב והגבה עם ה'ציפ

דנא של הנבדק(cy3)

סריקה ועיבוד של התוצאות

Feuk et al.

Nature Reviews Genetics 2006

slide80
aCGH
  • מאפשר זיהוי של חסרים או תוספות על פני כל הכרומוזומים במקביל
  • שינוי במספר העותקים הוא בהתאם להשוואה של דנא נבדק לביקורת תקינה
  • הרזולוציה היא תלוית סוג השבב: גודל הגלאים והמרחק בינהם
slide81

Array types

  • *BAC/PAC array: 100-300kb
  • 1Mb
  • *Oligo (targeted array) : 60-100 base
  • designed/tilling
  • *SNP (single nucleotide polymorphism) array:
  • 50 base
  • 100kb
  • Resolution : Probe size
    • Distance between the probes

Resolution ᷉0.6-1Mb

Resolution ᷉250-500kb

Resolution 100-500kb

typical analysis procedure
Typical Analysis Procedure
  • עבור כל גלאי מחושב ערך יחסי של Log 2
    • Log2 serves to center values around 0, why?
    • Hemizygousdeletion in test: log2(test/reference)=log2(1/2)=-1
    • Duplication in test:

log2(test/reference)=log2(3/2)=0.59

    • Homozygous duplication:

log2(test/reference)=log2(4/2)=1

slide83

Log2 ratio (test/reference

Typical Analysis Procedure

  • Homozygous duplication
  • log2(4/2)=1
  • Duplication
  • log2(3/2)=0.59

normal values

Log2 (2/2)=0

Hemizygous deletion

log2(1/2)=-1

x

Log (a)=X  b =a

b

chromosome

slide84
סיכום
  • השבב הגנטי משווה כמות של מקטעי דנא בין שני פרטים
  • הבדיקה היא ברמת הדנא
  • התוצאות מתבטאות ברמת פלורסנציה של נבדק מול ביקורת
slide85
יתרונות
  • רזולוציה גבוהה יותר בהשוואה לשיטות הקיימות:
    • תמונה של כל 23 זוגות הכרומוזומים בבדיקה אחת
    • ניתן לזהות חסרים/תוספות מזעריים
    • ניתן לזהות בכ- 30-40% מהמקרים שנראים מאוזנים ציטוגנטית חוסר איזון מזערי שניתן לגילוי רק בשיטת השבב הגנטי.
slide86
יתרונות
  • אין צורך במטפזות
  • שיטה אוטומטית- אוביקטיבית
  • קיצור לזמן תשובה- אין בהכרח צורך בתרבית תאים
slide87
חסרונות
  • לא יכול לזהות:
    • טריפלואידיה
    • טרנסלוקציה מאוזנת והיפוכים
    • מוזאיקה
  • לעיתים ימצאו ממצאים ללא משמעות קלינית (הטכנולוגיה מתקדמת מהידע הקיים)
    • חוסר ודאות בתוצאות
    • לחץ מיותר במטופל
slide88
מסקנות:
  • ההמלצה כיום היא לבצע שבב גנטי כבדיקה אבחנתית ראשונית:
    • בנבדקים עם איחור התפתחותי או מומים מולדים(4-5% מהמקרים ימצא ממצא שלא נראה בקריוטיפ).
  • קריוטיפ ימשיך לשמש כבדיקה אבחנתית ראשונית:
    • בפרטים עם חשד למום כרומוזומלי ברור (תסמונת דאון, טרנר, קליינפטר)
    • סיפור משפחתי של שינוי כרומוזומלי (טרנסלוקציה משפחתית)
    • הפלות חוזרות
slide89
שבב גנטי באבחון טרום לידתי

אוכלוסיית היעד לאבחון טרום לידתי:

  • נשים בסיכון נמוך (ללא הצדקה רפואית )
  • נשים בסיכון גבוה
  • זוגות עם ילד קודם פגוע (הסבר+מניעה)
prenatal chromosome microarray
Prenatal chromosome microarray
  • נשים בסיכון נמוך (ללא הצדקה רפואית )

->בעייתי (Too much information..)

  • נשים בסיכון גבוה
  • זוגות עם ילד קודם פגוע (הסבר+מניעה)

->צ'יפים מכוונים יכולים לספק תשובה

באבחון טרום לידתי כרגע אין המלצה להשתמש בצ'יפ גנטי כקו הבדיקה הראשוני אלא רק במקרים המצדיקים את המשך הבירור

slide91

סיבות לפניה לגנטיקה רפואית

  • לפני נישואין – קרבת משפחה; מחלות במשפחה
  • לפני הריון – בדיקות סקירה למחלות גנטיות; מחלות במשפחה; ליקויי פריון; הפלות חוזרות;
  • במהלך הריון – בדיקות סקירה בדם האם; בדיקות ;US
  • אחרי הלידה – פיגור שכלי;מומים מולדים; מחלות תורשתיות;
  • במהלך החיים – מחלות מורכבות; מחלות תורשתיות;
slide92

מבנה המכון הגנטי

מכון גנטי

יחידה גנומית

מעבדת גנטיקה מולקולרית

מעבדה ציטוגנטית

ייעוץ גנטי

פרנטלי

פוסטנטלי

אונקוגנטי

בד' מולקולריות

כרומוזומים בשיטה מולקולרית: דם הקפי

מי שפיר

בדיקות FISH

כרומוזומים:

דם הקפי

לשד עצם

מי שפיר