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碱性磷酸酶标记的链霉亲和素－生物素法（ SAP 法）

碱性磷酸酶标记的链霉亲和素－生物素法（ SAP 法）. 实验材料. 1 、小鼠胰腺的石蜡切片； 2 、胰岛素抗体（鼠抗人单克隆抗体）； 3 、 SAP 检测试剂盒； 4 、正常羊血清； 5 、 0.01M PBS （ pH7.2 ～ 7.6 ） ； 6 、 BCIP/NBT 显色试剂； 7 、孵育湿盒。. 实验原理. ABC 法. SAP 法. 实验方法或步骤. 1 、石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗， PBS 浸泡 2min ； ( 如需采用 抗原修复，可在此步后进行 ) 。 2 、 10 ％正常羊血清封闭，室温孵育 10min ；

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碱性磷酸酶标记的链霉亲和素－生物素法（ SAP 法）

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Presentation Transcript

  1. 碱性磷酸酶标记的链霉亲和素－生物素法（SAP法）碱性磷酸酶标记的链霉亲和素－生物素法（SAP法）

  2. 实验材料 • 1、小鼠胰腺的石蜡切片； • 2、胰岛素抗体（鼠抗人单克隆抗体）； • 3、SAP检测试剂盒； • 4、正常羊血清； • 5、 0.01M PBS（pH7.2～7.6） ； • 6、BCIP/NBT显色试剂； • 7、孵育湿盒。

  3. 实验原理 ABC法 SAP法

  4. 实验方法或步骤 • 1、石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗，PBS浸泡2min；(如需采用 抗原修复，可在此步后进行)。 • 2、10％正常羊血清封闭，室温孵育10min； • 3、倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的胰岛素一抗或一抗工 作液，37℃孵育45min。 PBS冲洗，3×3min； • 4、滴加生物素标记羊抗鼠IgG工作液，37℃孵育20min； • 5、 PBS冲洗，3×3min； • 6、滴加碱性磷酸酶标记链霉亲和素工作液，37℃或室温孵育 20min。 PBS冲洗，3×3min； • 7、显色剂显色（BCIP/NBT）； • 8、自来水充分冲洗，封片。

  5. 结果 胰岛内可见蓝色或紫蓝色着色的阳性细胞，阳性产物见于细胞质

  6. 多聚鳌合物酶法 HRP---多聚化合物---抗体 一、Epos法 Enhanced polymer one-step staining

  7. 组织抗原 一抗 HRP 多聚化合物骨架 EPOS 方法

  8. 原理：采用一种具有惰性的多聚 化合物作为骨架，将特异 性抗体和HRP，同时标记 在多聚合物分子上，形成 HRP---多聚化合物---特异 性抗体。

  9. 步骤：一步法 特点：快速，简便，特异性强， 敏感性高 但商品化种类不全， 价格昂贵

  10. 二、EnVision法（或PowerVison） Enhanced Labelled Polymer System 原理：HRP ---多聚化合物---第二 抗体

  11. 组织抗原 一抗 二抗 酶 多聚化合物骨架 第二步 第一步 PowerVision方法

  12. 特点： 敏感性高：（每个多聚鳌合物中含70个 HRP分子和10 个第二抗体） 特异性强： 复合物内无内源性Avidin和Biotin的干扰。

  13. 基本操作步骤 1. 抗原修复 2.内源性过氧化 物抑制 3. 正常血清封闭 4. 第一抗体 5. 多聚骨架复合物 6. 显色

  14. 实验步骤 • 1、石蜡切片脱蜡至水，PBS洗3×3min； • 2、3%H2O2室温孵育10min，以消除内源性过氧化 物酶的活性；蒸馏水洗，PBS浸泡5min； • 3、滴加适当比例稀释的胰岛素一抗工作液， 37℃ 孵育1hr； • 4、 PBS冲洗，3×3min； • 5、 滴加HRP标记羊抗小鼠Ig多聚体，37℃或室温孵 育20～30min； • 6、 PBS冲洗，3×3min； • 7、显色剂显色（AEC或DAB）； • 8、自来水充分冲洗，封片。

  15. 结果：胰岛内可见棕色着色的阳性细胞，阳性产物见于细胞质。结果：胰岛内可见棕色着色的阳性细胞，阳性产物见于细胞质。

  16. 相关帮助 • 需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎 • fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台，网址：http://www.fantibody.com • 需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网进行咨询，期待您的加入：http://www.biomean.com

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