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工欲善其事 必先利其器

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工欲善其事 必先利其器. 绪言. 第一节 免疫学技术的范畴与应用. 一、免疫学技术的范畴 二、免疫学技术的应用特点. 免疫学技术的范畴. 1 、对具有免疫活性物质的定性、 定量测定 2 、对免疫系统的组成成分的数量、 状态的测定. 免疫学技术的应用特点. 1 、对象 ——“ 包罗万象” 2 、方法 ——“ 兼容并蓄”. 第二节 有关免疫学基本概念. 一、抗原的概念与属性 二、免疫细胞的概念与分类 三、免疫应答的概念与过程. 抗原的概念与属性. 免疫原性 —— 可识别、可反应性 (诱导机体产生免疫应答的特性)

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Presentation Transcript
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工欲善其事

必先利其器

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第一节 免疫学技术的范畴与应用

一、免疫学技术的范畴

二、免疫学技术的应用特点

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免疫学技术的范畴

1、对具有免疫活性物质的定性、

定量测定

2、对免疫系统的组成成分的数量、

状态的测定

slide5

免疫学技术的应用特点

1、对象——“包罗万象”

2、方法——“兼容并蓄”

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第二节 有关免疫学基本概念

一、抗原的概念与属性

二、免疫细胞的概念与分类

三、免疫应答的概念与过程

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抗原的概念与属性

免疫原性——可识别、可反应性

(诱导机体产生免疫应答的特性)

免疫反应性——选择结合性

(和免疫应答产物特异性结合的特性)

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免疫细胞的概念与分类

免疫细胞(Immune cells)

泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关的细胞。

免疫活性细胞(Immune competent cell,ICC)

能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效应产物的淋巴细胞。

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免疫细胞的类型

红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞 NK细胞

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免疫应答的概念与过程

免疫应答(immune response)

免疫系统接触抗原后,免疫细胞对抗原进行识别;并使特异性淋巴细胞活化、增殖;表现出免疫效应的过程。

免疫应答的阶段

1、抗原识别阶段(antigen-recognizing phase)

2、淋巴细胞活化阶段(lymphocyte-activating phase)

3、抗原清除阶段(antigen-eliminating phase)

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第三节 抗原抗体反应的基本原理

一、抗原抗体反应的原理

二、抗原抗体反应的特点

三、影响抗原抗体反应的因素

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抗原抗体反应的原理

1、抗原抗体结合的作用力

2、抗原抗体结合物析出原因

slide13

引起抗原抗体结合的作用力

1、电荷引力(库仑引力)

2、电子云引力(Van der Waals力)

3、氢键结合力

4、疏水作用力

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抗原抗体结合物析出的原因

电解质

析出

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抗原抗体反应的特点

1、特异性

2、可逆性

3、适合比例性

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特异性

特异性反应

交叉反应

无反应

抗原A

抗原B

抗原C

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可逆性

Ag+Ab

K(亲和常数)=

Ag Ab

slide18

适合比例性

抗体含量

抗原含量

后带

前带

等价带

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抗体抗体比例合适

抗原过剩

抗体过剩

网格学说(lattice theory)

slide20

抗原抗体反应的影响因素

1、电解质

2、酸碱度(pH值6-8)

3、温度(37-42。C)

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第四节 免疫学检测技术的评价

一、评价标准

二、特异性与敏感性的关系

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评价标准

Specificity(特异)

Sensitivity(敏感)

Simplicity(简便)

Safety(安全)

Saving(节约)

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特异性与敏感性的关系

特异性高、敏感性低

敏感性高、特异性低

slide25

第一节 抗原/免疫原制备的基本概念

一、抗原制备的目的

二、抗原的“纯度”

三、抗原制备的主要技术途径

slide26

抗原制备的目的

免疫原:激活T、B细胞

半抗原:检测相应抗体

slide27

抗原的“纯度”

免疫原:保留足够的可被T、B细胞

识别的抗原决定簇

半抗原:尽可能减少影响反应特异

性的抗原决定簇

slide28

抗原制备的主要技术途径

天然抗原——分离、纯化

半抗原——人工合成、载体联接

抗原肽—— 合成、基因工程制备

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第二节 完全抗原/免疫原的制备方法

一、颗粒性抗原的制备

二、可溶性抗原的制备

slide30

颗粒性抗原的制备

1、采集、分离抗原

2、无害化处理

slide31

可溶性抗原的制备与纯化

1、处理与粉碎

2、蛋白质分离

3、单一组分提取

4、抗原纯度鉴定

slide32

处理与粉碎

组织粉碎:机械、生物

细胞破碎:物理、化学、生物

slide33

蛋白质分离

选择性沉淀:盐析

有机溶剂沉淀

水溶性非离子型聚合物沉淀

透析技术:

超滤技术:

slide34

单一组分提取

层析技术:凝胶过滤

离子交换

亲和层析

离心技术:差速离心

密度梯度离心

电泳技术:电泳洗脱

等电聚焦

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+

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+

+

+

+

+

离子交换层析

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抗原纯度鉴定

方法:层析性质测定

电泳法

免疫法

指标:电泳纯

免疫纯

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第三节 半抗原免疫原制备的方法

一、载体的选择

二、半抗原与载体的联接

slide40

载体的选择

蛋白质载体:BSA、HAS、OVA、KLH

聚合多肽载体:多聚赖氨酸

高分子聚合物载体:PVP、羧甲基纤维素

slide41

半抗原与载体的联接

1、连接方式:物理法(吸附)

化学法

2、化学连接方法:

直接联接法:

间接联接法:

slide42

碳化二亚胺法

蛋白质-COO— + R-N+=CN-R`

H-N+-R

蛋白质-COO-C-NH-R` + 半抗原-NH2

O

蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH

R`

半抗原与载体直接联接

slide43

戊二醛法

蛋白质- NH2+ 半抗原-NH2 + COH-(CH2 )3 -COH

蛋白质-N=CH-(CH2 )3 –CH=N-半抗原

半抗原与载体直接联接

slide44

氯甲酸异丁酯法

半抗原-COOH+ Cl-COO-CH2 CH(CH3)2

O O

半抗原-C-O-C-O-CH2CH(CH3)2 + 蛋白质- NH2

半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH(CH3)2

半抗原与载体直接联接

slide45

琥珀酸酐法

O O

半抗原-CH2 –OH + C-O-C

CH3 CH3

O

半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH

半抗原与载体间接联接

slide46

O-(羟甲基)羟胺法

半抗原-C=O+H2 N-O- CH2 - COOH

半抗原-C=N-O- CH2 - COOH

半抗原与载体间接联接

slide47

一氯醋酸钠法

半抗原- - OH+ Cl- CH2 - COONa

半抗原- - CH2 - COOH

半抗原与载体间接联接

slide48

重氮化的对氨基苯甲酸法

HOOC- -NH2 + NaNO2 HOOC- -N=N

半抗原- - OH+ HOOC- -N=N

半抗原- -N=N- -COOH

OH

半抗原与载体间接联接

slide49

本章小结

1、免疫学技术的应用范畴

2、免疫学的基本概念

3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素

4、抗原制备的方法

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思考题

1、免疫学技术的应用范畴有哪些?

2、体外抗原抗体反应有哪些特点?

3、可溶性抗原的制备涉及哪些技术?

4、如何使半抗原具有免疫原性?举例说明

半抗原与载体的联接方法。