HIV 实验室诊断

1. HIV实验室诊断 广州医学院第一附属医院检验科 廖伟娇

2. 一、HIV的一些相关知识： 1. HIV的结构 2. HIV基因组成及结构 3. HIV感染的免疫反应 二、HIV的实验室检查 1. 实验室、人员及设备要求 2. 实验室检测 3. 职业暴露

3. 1. HIV的结构 gp120 gp41 脂质膜 蛋白酶 RNA 反转录酶 P18 P24 整合酶 核蛋白 核衣壳(由微粒组成)

4. 2、HIV的基因分型 HIV可分为两个型：HIV-Ⅰ和HIV-Ⅱ。 (1) 基因组成： Ⅰ: LTR-gag-pol-vif-vpr-tat-rev-vpu-env- nef-LTR. Ⅱ: LTR-gag-pol-vif-vpx-vpr-tat-rev-env- nef-LTR. 结构基因： gag、pol、 env 调节基因： tat、rev、nef、 vif、vpu 附属基因： vpr、vpx

5. （2）基因结构： vpr env LTP LTP gag vif rev rev pol tat net tat vpu vpx env LTP LTP vpr gag rev vif rev tat pol tat net

6. (3) 两者的主要区别： ①Ⅰ型含有vpu，而Ⅱ型含vpx。 ②vpr和nef与其他基因的关系也不同： A HIV-Ⅰ的vpr与vif相互重叠，而nef 与env不重叠； B HIV-Ⅱ的vpr与vif不重叠，而nef与 env相互重叠。

7. (4) 基因表达产物： HIV-Ⅰ HIV-Ⅱ env：gp160 gp120 gp41 gp140 gp105 gp36 gag：p55 p24 p18 p56 p26 p16 pol：p65 p51 p31 p68 p53 p34

8. 3.HIV感染的免疫反应 抗-gp41 抗-p24 p24

9. 实验室要求 ： 实验室分级：初筛实验室 确证实验室 粤卫[2004]305号文规定：05年6月份前在 县级以上收治定点医院建立初筛实验室。 填写申请、评审、批准 要求： HIV血清学试验：BSL- Ⅱ(P2) HIV病毒研究： BSL- Ⅲ P3)

10. 初筛实验室设计和建造的要求： ⑴ 有专用实验室（至少专用检测台），应划分清洁区和污染区，并有明显标记，有充足的操作空间。 (2) 实验室墙面、地面、台面材料应来耐酸、碱、易清洁消毒、不渗漏液体；室内应有防蚊、防蝇、防鼠等设备

11. ⑶ 检验台上应装置紫外灯。 ⑷ 备有消毒药品、消毒器材和消毒设备。 ⑸ 有感应流水装置，备有冲眼睛水，足够的 一次性手套、口罩、隔离服和防护眼镜。 (6) 实验室应装置恒温设备,室温为20~25℃。

12. BSL Ⅱ实验室： 设计和建造的要求（增加）： ⑴ 应有专门放置生物废弃物容器的台(架)。 ⑵ 应设置实施各种消毒方法的设施，如高压灭 菌锅、化学消毒装置等对废弃物进行处理。 ⑶ 应设置洗眼装置。 ⑷ 实验室门宜带锁、可自动关闭。 ⑸ 实验室出口应有发光指示标志。

13. BSL Ⅱ实验室： 安全设备： Ⅱ生物安全柜或其他物理抑制设备

14. 样本 选用初筛试剂 HIV抗体初筛检测程序： 初筛检测 阳性反应 阴性反应 原有试剂＋另一种原理初筛试剂 重复检测 均呈阳性 均呈阴性 一阴一阳 送确认 阴性报告

15. HIV抗体的检测： 1.初筛试验方法及原理： （1）ELISA （2）明胶凝集试验 （3）金标法 （4）自动化仪器测定

16. 2.确证试验：免疫印迹法、间接免疫荧光法、免疫沉淀法2.确证试验：免疫印迹法、间接免疫荧光法、免疫沉淀法 (1) 方法原理 (2) 确证试验结果判断： 美国CDC：gp160/gp120或p24/gp41 任意二条带 美国FDA：gp160/gp120或p24、gp41、p31 三者 组合 WHO：至少二条以上env带 美国红十字：gag、pol、env每组至少一条带 中国：至少二条以上env带或一条env带和一条 (gag)p24带。

17. 3 注意事项 (1) 相关的政策和规定 (2) 临床操作中的注意事项 (3) 初筛与确证结果的差异及解释 (4) 医疗纠纷

18. 医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则(试行)(2004.5.31) ： 第八条 医务人员发生艾滋病病毒职业暴露后，应当立即实施以下局部处理措施：

19. 1 用肥皂液和流动水清洗污染的皮肤，用生理盐水冲洗粘膜。 2 如有伤口，应当在伤口旁轻轻挤压， 尽可能挤出损伤处的血液，再用肥 皂液和流动水进行冲洗；禁止进行 伤口的局部挤压。 3 受伤部位的伤口冲洗后，应当用消毒液，如75％酒精或0.5％碘伏进行消毒，并包扎伤口，被暴露的粘膜，应当反复用生理盐水冲洗干净

20. 第九条 医务人员发生艾滋病病毒职业暴露后，医疗机构应当对其暴露的级别和暴露源的病毒量水平进行评估和确定 第十条 艾滋病病毒职业暴露级别分为三级

21. 一、发生以下情形，确定为一级暴露： • 暴露源为体液、血液或者含有体液、 血液的医疗器械、物品。 2暴露类型为暴露源沾污了有损伤的 皮肤或者粘膜，暴露量小且暴露时 间较短。

22. 二、发生以下情形，确定为二级暴露： • 暴露源为体液、血液或者含有体液、 血液的医疗器械、物品。 2 暴露类型为暴露源沾污了有损伤的 皮肤或者粘膜，暴露量大且暴露时 间较长；或者暴露类型为暴露源刺 伤或者割伤皮肤，但损伤程度较轻， 为表皮擦伤或者针刺伤。

23. 三、发生以下情形，确定为三级暴露： • 暴露源为体液、血液或者含有体液、 血液的医疗器械、物品。 2 暴露类型为暴露源刺伤或者割伤皮肤， 但损伤程度较重，为深部伤口或者割 伤物有明显可见的血液。

24. 第十一条 暴露源的病毒载量水平分为： 轻度、重度和暴露源不明三种类型。

25. 暴露源不明：不能确定暴露源是否为 HIV病毒阳性者 轻度：经检验，暴露源为HIV病毒阳性， 但滴度低，艾滋病病毒感染者无 临床症状、CD4计数正常者。 重度：经检验，暴露源为HIV病毒阳性， 但滴度高，艾滋病病毒感染者有临 床症状、CD4计数低者。

26. 第十二条： 医疗卫生机构应当根据暴露级别和暴露源病毒载量水平对发生艾滋病病毒职业暴露的医务人员实施预防性用药方按。

27. 第十三条 预防性用药方按分为基本用药程序和强化用药程序。 基本用药程序：为两种逆转录酶制剂，使用常规 剂量，连续使用28天。 强化用药程序：是在基本用药程序的基础上，同 时增加一种蛋白酶抑制剂，使用 常规治疗剂量，连续使用28天。

28. 预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早开始，最好在4h内实施，最迟不得超过24h；即使超过24h，也应当实施预防性用药方。（早、有）预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早开始，最好在4h内实施，最迟不得超过24h；即使超过24h，也应当实施预防性用药方。（早、有）

29. 发生一级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度时，可以不使用预防性用药；发生一级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度时，可以不使用预防性用药； （一级轻度不用药） 发生一级暴露且暴露源的病毒载量水平为重度或者发生二级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度时，使用基本用药程序。 （一级重度或二级轻度用基本）

30. 发生二级暴露且暴露源的病毒载量水平为 重度或者发生三级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度或者重度时，使用强化用药程序。 （二级重度或三级用强化） 暴露源的病毒载量水平不明时，可以使用基本用药程序。

31. 第十四条 医务人员发生艾滋病病毒职业暴露后，医疗卫生机构应当给予随访和咨询。随访和咨询的内容包括：在暴露后的第4周、第8周、第12周及6个月时对艾滋病病毒抗体进行检测，对服用药物的毒性进行监控和处理，观察和记录艾滋病病毒感染的早期症状等。

32. 谢谢！