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细胞与遗传实验

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细胞与遗传实验 - PowerPoint PPT Presentation


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细胞与遗传实验. 夏蓓莉 / 杨玲. 实验室要求. 点名签到 穿白大衣 损坏公物要赔偿 保持实验室整洁干净、每次实验毕安排值日生. 细胞与遗传实验课程要求. 每班根据实验需要分组,以组的形式完成细胞与遗传系统性实验 每次实验后,每人写实验报告 1 份(提交) 系统性实验结束后,每人写实验小结 — 细胞、遗传各 1 份(提交) 当逢课外加时,望能安排时间并请谅解 认真参与实验(思考、总结、提问和建议). 实验(一)细胞损伤与保护 1. 活细胞观察 细胞传代培养 细胞计数. 细胞培养.

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Presentation Transcript
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细胞与遗传实验

夏蓓莉/杨玲

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实验室要求
  • 点名签到
  • 穿白大衣
  • 损坏公物要赔偿
  • 保持实验室整洁干净、每次实验毕安排值日生
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细胞与遗传实验课程要求
  • 每班根据实验需要分组,以组的形式完成细胞与遗传系统性实验
  • 每次实验后,每人写实验报告1份(提交)
  • 系统性实验结束后,每人写实验小结—细胞、遗传各1份(提交)
  • 当逢课外加时,望能安排时间并请谅解
  • 认真参与实验(思考、总结、提问和建议)
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实验(一)细胞损伤与保护1
  • 活细胞观察
  • 细胞传代培养
  • 细胞计数
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细胞培养

取活体动物组织,在体外,无菌条件下,模拟体内环境(营养、温度、pH值、气体等),对其进行培养,使细胞能够生存、生长、保持原来生物学特性的一种实验方法。

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实验目的

通过对活细胞的培养

1、掌握细胞培养的基本操作及技术要领。为进一步试验,打好基础。

2、为后续实验,提供必需的试验材料。

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细胞培养内容
  • 细胞原代培养
  • 细胞换液、细胞传代培养
  • 细胞形态观察、活率测定
  • 细胞计数
  • 细胞生长曲线、分裂指数
  • 细胞冻存与复苏
  • 等等
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实验室基本条件
  • 无菌环境
  • 仪器设备
  • 普通器材
  • 一般试剂
slide9

无菌环境

无菌室

无菌操作

slide11
无菌操作
  • 洗手
  • 着装
  • 近火焰操作
  • 试剂瓶等斜放

back

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活细胞观察

体外培养的、生长中的细胞,借助显微镜来进行察看、比较、判断,以求对细胞做出进一步处理。

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器材
  • 倒置显微镜
  • 培养细胞株
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方 法
  • 肉眼观察
  • 显微镜下观察
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肉眼观察

培养液清浊度

培养液颜色

slide22
显微镜下观察

细胞的密度

细胞的透明度

细胞的形状

slide27

细胞传代培养

细胞在支持物表面长满后,进行重新分配,再培养的过程。

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器材与试剂:
  • 超净工作台
  • 二氧化碳培养箱
  • 倒置显微镜
  • 细胞株(CHL)
  • 滴管、培养瓶、瓶塞等
  • 培养液:DMEM ( 含10%小牛血清)
  • 消化液:0.25%胰蛋白酶液
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操 作(无菌)

细胞株——弃原培养液——加 胰旦白酶液(消化细胞)——弃胰旦白酶液

——定量加入培养液1ml,冲打细胞成悬液——取1滴细胞悬液细胞计数——按需接种至新培养瓶(皿) ——补足新鲜培养液——37℃培养

1-2min

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注 意

胰蛋白酶消化时间要严格掌握

(温度、pH)

back

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细胞计数

细胞的传代、冻存、生化研究及生长曲线制作等,都需对细胞进行计数。细胞的多少对实验结果会有影响。

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器 材
  • 细胞株
  • 血球计数板
  • 普通光学显微镜
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试 剂
  • 0.25%胰蛋白酶液
  • 培养液
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操 作

单层细胞——胰蛋白酶液消化细胞

——定量(1ml)加入培养液——

轻轻吹打细胞(单细胞悬液)——

计数细胞

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计算公式

细胞数/毫升

= (4大格细胞数÷4)

× 10000×稀释倍数

1ml=1000mm3

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注 意
  • 细胞悬液要充分打匀
  • 正确使用计数板
  • 悬液渗入计数室时,不易过多(溢出)、过少(气泡)
  • 数细胞有压线时,数左不数右、数上不数下
  • 正确使用显微镜(电源、亮度、倍数、聚光器等)
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小 结

活细胞观察(培养细胞瓶、皿或板

放在倒置显微镜载物台上)——

进入无菌室——细胞传代培养

(1传2)——取1滴(或数滴)细胞悬液

——显微镜下细胞计数

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告 知

实验(二)

  • 细胞活率测定(MTT)
  • 亚细胞结构分离及鉴定(离心)
  • 细胞超微结构检测(电镜)
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告知

一、9月16日-实验前2天中午饭后,细胞传代接种:

小盖片培养瓶3瓶(1组) , 96孔板9孔(8组) ,

25ml培养瓶8瓶( 4组)

二、9月17日-次日中午饭前,细胞换液( 损伤)

1、3瓶含小盖片培养瓶(电镜)

2瓶正常、4瓶损伤

2、每组96孔板9孔(活率)

3孔正常、6孔损伤

三、9月17日-下午课后5点,细胞换液(损伤恢复)

4瓶损伤小盖片中2瓶、 6孔损伤中3孔

四、下午1:30继续实验