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Diagnostic sérologique de la FCO (ELISA, SN) : état des lieux

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Journée FCO - Mars 2010. Diagnostic sérologique de la FCO (ELISA, SN) : état des lieux. E Albina, C Cêtre - Sossah , C Grillet , R Lancelot, A Pédarrieu. Les bases immunologiques. Infection ou vaccination (atténué/inactivé)  production d’anticorps Différentes spécificités :

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diagnostic s rologique de la fco elisa sn tat des lieux

Journée FCO - Mars 2010

Diagnostic sérologique de la FCO (ELISA, SN) :état des lieux

E Albina, C Cêtre-Sossah, C Grillet,R Lancelot, A Pédarrieu

les bases immunologiques
Les bases immunologiques
  • Infection ou vaccination (atténué/inactivé) production d’anticorps
  • Différentes spécificités :
    • Anticorps anti-orbivirus (FCO – EHDV)
    • Anticorps anti-sérogroupe (FCO)
    • Anticorps anti-sérotype

Anticorps neutralisants

VP2– VP5

Anticorps de groupe FCO

VP7–VP3

VP1, VP4 and VP6

tests recommand s par l organisation mondiale de la sant animale oie
Tests recommandés par l’Organisation Mondiale de la Santé Animale (OIE)
  • Fixation du complément (désuet)
  • Immunodiffusion en gélose(croise avec EHDV)
  • ELISA de compétition (prescrit dans les échanges internationaux) = meilleure sensibilité, robustesse, spécifique du sérogroupe FCO Détection de sérogroupe FCO pas de différenciation animal vacciné/infecté
tests elisa
Tests ELISA
  • En France, cinq tests sont agréés par la DGAl sur la base d’un contrôle par le LNR sérologie (CIRAD)
  • Ils sont tous basés sur une réponse anticorps dirigée contre la VP7

Anticorps neutralisants

VP2– VP5

Anticorps de groupe FCO

VP7–VP3

VP1, VP4 and VP6

tests elisa1
Tests ELISA
  • Deux principes :

ELISA de compétition

ELISA sandwich

Plaque

Plaque

Ag

Ag

Test sérum

+ Mab

Test sérum

A

B

B

A

Substrat

Substrat

Pas de coloration

Coloration

Coloration

Pas de coloration

POSITIF

NEGATIF

POSITIF

NEGATIF

tests elisa2
Tests ELISA
  • 3 tests de compétition :
    • détection des anticorps à 14-21 jours post-infection
  • 2 tests sandwich :
    • détection plus précoce 7 jours post-infection en particulier après vaccination avec vaccin inactivé,
    • meilleure détectabilité (entre 1 et 2 dilutions base 2) aucun test DIVA pratiquement plus de sérologie en France
dispositif diagnostic s rologique en france
Dispositif diagnostic sérologique en France
  • LNR Sérologie CIRAD  EILA Européen annuel
  • Laboratoires départementaux d’analyse vétérinaire  EILA national (pas en 2009 et 2010)
le test de s roneutralisation
Le test de séroneutralisation
  • Test spécifique du type (24 sérotypes)
  • Basé sur l’interaction anticorps - VP2 & VP5
  • Test non décrit dans le manuel OIE (!)
  •  réactions croisées entre sérotypes

Principe

Plaque

virus

Test sérum

Cellules sensibles

A

B

Substrat

Pas de lyse

Lyse

POSITIF

NEGATIF

r actions crois es entre s rotypes
Réactions croisées entre sérotypes

Neutralisation croisée in vitro

Protection partielle croisée

Faible communauté antigénique

application pratique le cas de la surveillance sentinelle en corse
Application pratique : le cas de la surveillance sentinelle en Corse
  • Prélèvements mensuels de 150 veaux de 6 à 12 mois dans chaque département depuis 2005
  • Analyse ELISA aux LVD
  • Envoi positifs et douteux CIRAD pour séroneutralisation
slide12

2008 : 119 positifs sur 6400 (1,86%)

2009 : 228 positifs sur 4000 (5,7%)

r sultats sn corse
Résultats SN Corse
  • Analyse de 55 résultats « complets » pour les 6 sérotypes identifiés en Corse:BTV-1, 2, 4, 8, 9 et 16
hypoth ses
Hypothèses
  • Fiabilité de la SN ?
  • Réactions sérologiques croisées hors cadre?
  • Vaccination/infection sérotypes 1 et 8?
  • … ?
performances des tests eila europ en
Performances des tests : EILA européen
  • 100 % de résultats conformes en ELISA avec tous les kits représentés (36 laboratoires participants)
  • 0% de résultats conformes en SN(8 laboratoires participants)
perspectives
Perspectives
  • Epilogue sur la séroneutralisation :
    • Standardisation du test à l’échelle européenne
    • Apprentissage des réactions croisées entre sérotypes européens
  • Perspectives ELISA : ELISA DIVA ?