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生物印迹酶的制备及应用研究

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生物印迹酶的制备及应用研究. 慕洋洋. 1. 课题介绍 2. 近期实验汇报 3. 未来 实验安排. 分子印迹. 生物印迹. 利用脂肪酶分子能与底物分子经过构象转变特异性结合，通过 模板分子的诱导作用，使本身并不具有底物结合能力的模型酶产生能够识别、结合特定底物的构象 口袋，从而进一步提高酶的特异选择性。. 实验规划. iCLEAs. 手性拆分. 印迹模拟. 肌肽合成. 实验设想. 实验层次图. 模拟. 模拟生物印迹过程的底物模板选择，实现印迹的理性调控. 生物 印迹模拟. 合成. 肌肽合成. 合成肌肽. (R,S)- 苯乙醇手性拆分. 拆分.

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生物印迹酶的制备及应用研究

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Presentation Transcript

  1. 生物印迹酶的制备及应用研究 慕洋洋

  2. 1.课题介绍 • 2.近期实验汇报 • 3.未来实验安排

  3. 分子印迹

  4. 生物印迹 • 利用脂肪酶分子能与底物分子经过构象转变特异性结合，通过模板分子的诱导作用，使本身并不具有底物结合能力的模型酶产生能够识别、结合特定底物的构象口袋，从而进一步提高酶的特异选择性。

  5. 实验规划 iCLEAs 手性拆分 印迹模拟 肌肽合成

  6. 实验设想 实验层次图 模拟 • 模拟生物印迹过程的底物模板选择，实现印迹的理性调控 生物印迹模拟 合成 肌肽合成 • 合成肌肽 (R,S)-苯乙醇手性拆分 拆分 • 对（R,S）-苯乙醇进行手性拆分 制备 生物印迹酶的制备 • 优化生物印迹酶的制备工艺

  7. 有机相 结合生物印迹技术（bioimprinting）与无载体固定化技术(CLEAs) 得到具有更强特异选择性和稳定性的酶，实现印迹酶无法在水相中应用的弊端。 iCLEAs 实验拓展 有机相 + 水相 纯水相

  8. 1.课题介绍 • 2.近期实验汇报 • 3.未来实验安排

  9. 实验进展 • 生物印迹酶的制备 ppl

  10. 游离ppl与CALB S型 R型

  11. 游离ppl与CALB 反应2h

  12. 游离ppl与CALB ppL拆分苯乙醇

  13. 印迹ppl 结构相似的R(-)-扁桃酸 • 以与R(+)-苯乙醇 为模板进行印迹，鉴于扁桃酸记性较强，不易溶于非极性溶剂，因此分别考察了甲基叔丁基醚和异丙醚作为洗脱溶剂，并进行苯乙醇的手性拆分。

  14. 洗脱剂对印迹的影响 异丙醚 甲基叔丁基醚

  15. 改进ppl 以R扁桃酸为模板，加入少量吐温20作为冻干保护剂，冻干后用异丙醚进行洗脱，得到印迹酶。 效果不明显

  16. 1.课题介绍 • 2.近期实验汇报 • 3.未来实验安排

  17. 遇到的问题 • ppL是否无法实现手性拆分？ • 印迹方法不当？模板极性太强夺走催化“三元体”必需水

  18. 游离ppl手性拆分

  19. 印迹CRL • 采用完全相同的方法，以R扁桃酸作为印迹模板，加入少量冻干保护剂吐温20，进行印迹，等待进一步反应检测

  20. 遇到的问题 • ppL是否无法实现手性拆分？ • 印迹方法不当？模板极性太强夺走催化“三元体”必需水？

  21. 印迹模板优化，运用扁桃酸+硬脂酸提供“油-水”界面，打开酯酶的催化“盖子”。印迹模板优化，运用扁桃酸+硬脂酸提供“油-水”界面，打开酯酶的催化“盖子”。 • 运用极性较弱的扁桃酸酯类作为模板，在低温下进行印迹。

  22. ? • S(-)-苯乙醇 • R(+)-苯乙醇 • R(-)-扁桃酸

  23. Thank You!

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