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实验简单流程

实验简单流程. 直标抗体表面染色. 收获细胞 洗涤，浓度调节 封闭 FC 受体 加入适量抗体，避光孵育 洗涤 加入适量 PBS 上机检测. 注意. 用到 PE-CY7,APC-CY7 时，可以使用 BD Stabilizing Fixative 339860 固定再上机，以保证荧光强度 红细胞裂解液可能会对一些表面分子有破坏作用，建议表面抗体标记后使用 固定剂对一些抗体会造成荧光减弱，注意说明书提示 同型对照加入量根据抗体量决定 克隆号. 辅助试剂. Lysing solution Cytofix 固定剂可用 1% 多聚甲醛. 间接标记.

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Presentation Transcript

  1. 实验简单流程

  2. 直标抗体表面染色 • 收获细胞 • 洗涤，浓度调节 • 封闭FC受体 • 加入适量抗体，避光孵育 • 洗涤 • 加入适量PBS • 上机检测

  3. 注意 • 用到PE-CY7,APC-CY7时，可以使用BD Stabilizing Fixative 339860固定再上机，以保证荧光强度 • 红细胞裂解液可能会对一些表面分子有破坏作用，建议表面抗体标记后使用 • 固定剂对一些抗体会造成荧光减弱，注意说明书提示 • 同型对照加入量根据抗体量决定 • 克隆号

  4. 辅助试剂 • Lysing solution • Cytofix • 固定剂可用1%多聚甲醛

  5. 间接标记 • 加入没有标记的一抗孵育后，洗涤 • 加入二抗孵育，洗涤 • 加入其他抗体 • 洗涤，悬浮 • 上机检测

  6. 注意 • 对照可以直接加入二抗即可 • 一定先把间标试剂标完后再标记直标抗体 • 不能同时进行多个间标抗体的标记 • 可以达到信号放大的作用 • 生物素的方法类似

  7. 细胞内染色 • 收获细胞 • 洗涤，调节浓度 • 标记表面抗体 • 固定和破膜 • 细胞内标记 • 洗涤 • 上机检测

  8. 注意 • 一定先标记表面抗体 • 有一些固定破膜液处理时间过长会导致表面标记丢失或荧光变弱

  9. 辅助试剂 • Cytoperm • Cytofix • Cytofix/perm • Perm/wash

  10. 细胞周期 • 收获细胞 • 70%冰乙醇固定 • 缓冲液洗涤 • RNA酶 • PI染色

  11. 注意 • 混匀 • 可结合其他表面分子检测 • 注意乙醇可能造成的影响 • 不适合GFP同时检测

  12. 试剂 • CycleTEST Plus • PI/RNase A

  13. CBA • 溶解标准品 • 逐级稀释 • 混合捕获微球，分配至对应管 • 加入检测抗体，对应检测对象 • 孵育 • 处理仪器设置样本，调节仪器设置 • 洗涤 • 上机

  14. 注意 • 严格按照说明书 • 对血清样本需要增加相应步骤 • 仪器设置模版和数据收集模版都可以在网上找到

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